稳定表达小反刍兽疫病毒受体Nectin-4的MDBK细胞系的建立

小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus, PPRV)是小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)的病原。Nectin-4为PPRV感染宿主上皮细胞的受体。本研究采用合成的Nectin-4基因,构建重组质粒pLOV-eGFP-Nectin-4。将该重组质粒与包装质粒pSPAX2和外膜质粒pMD2.G质粒共转染293T细胞,获得逆转录病毒样颗粒。为了构建稳定表达PPRV受体Nectin-4的MDBK (Madin-Darby bovine kidney)细胞系,将含有逆转录病毒样颗粒的细胞培养上清液感染MDBK细胞,利用嘌呤霉素筛选、纯化,获得了稳定表达Nectin-4蛋白的MDBK细胞,将其命名为MDBK-Nectin-4。pLOV-eGFP-Nectin-4、p SPAX2和pMD2.G三质粒共转染293T细胞后荧光结果表明,慢病毒成功包装。嘌呤霉素对MDBK细胞最小致死浓度检测结果表明,1μg/mL的嘌呤霉素为最佳的筛选工作浓度。RT-PCR检测结果表明,Nectin-4基因能够在MDBK-Nectin-4细胞中转录成mRNA。Western blot检测结果表明,Nectin-4在MDBK-Nectin-4细胞中能够稳定表达。间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)结果表明,表达的Nectin-4蛋白主要分布在细胞膜上。构建的MDBK-Nectin-4细胞系在连续传代至20代,仍然能够稳定表达Nectin-4蛋白,结果表明具有良好的遗传稳定性。PPRV分别感染MDBK细胞与MDBK-Nectin-4细胞系,后者较于前者能够更快地出现细胞病变。该细胞系的建立为深入研究PPRV与受体Nectin-4的相互作用机制,以及临床快速地分离PPRV提供了实验材料。     

羊口疮病毒127基因的克隆表达及亚细胞定位分析

为了对羊口疮病毒(ORFV) AH-F10株127基因进行原核表达及亚细胞定位,本试验采用PCR方法扩增出ORFV127基因,成功构建原核表达重组质粒pG EX-6p-1-ORFV127和真核重组质粒pE GFP-N1-ORFV127。将原核表达重组质粒转化到大肠埃希氏菌中表达,并进行纯化和鉴定。以纯化的蛋白质免疫BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,利用Western-blot技术鉴定其反应原性。利用脂质体介导法将重组质粒pE GFP-N1-ORFV127转染至Vero细胞,通过倒置荧光显微镜观察其在细胞中的表达及亚细胞定位。结果表明,获得的ORFV127基因序列全长为558bp,ORFV127蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,主要以包涵体蛋白质的形式表达,大小约49 000。Western-blot结果显示,免疫小鼠获得的抗ORFV127蛋白的多克隆抗体可特异性识别ORFV127蛋白,倒置荧光显微镜观察发现,ORFV127蛋白主要定位于细胞质。本试验结果为后续研究ORFV127蛋白的功能提供了宝贵的生物材料。     

侧多食跗线螨危害温室苹果苗

2003年笔者在温室育苗时发现侧多食跗线螨严重危害苹果幼苗,造成苹果幼苗停止生长。在我国关于侧多食跗线螨对苹果幼苗的危害此前未见报道。研究表明,用0.9%爱福丁乳油1500倍液可以有效防治该螨的为害。     

无土穴盘基质育苗技术

近几年来,我市一些园艺场、苗圃,在花卉、蔬菜等园艺作物上采用轻基质穴盘育苗新技术,培育草莓、茄果类、名优花卉等秧苗,既节省种子,减少劳动强度,又改善农业生态环境,有效地促进了秧苗培育的专业化、集约化、环保化.     

西部大开发与陕西省区域发展战略研究

中国西部地域辽阔,经济欠发达,资源分布,自然条件和经济基础的空间差异很大,在资金技术投入有限的情况下,在市场机制和投资效应原则作用下,西部开发不可能在人全面铺开,必须实行相对集中的重点区域开发战略,西部大开发中陕西省重点开发区域应该确定为“一心三带”,即西安中心城市、关中陇海铁路沿线产业密集地带、长城沿线资源富集地带,汉江上游地带。围绕重点开发区域应该选择“榆林国家级资源开发区建设”、“面向欧洲国     

番茄应用多效唑的效应

利用四种浓度的多效唑,在番茄生长的不同生育期对其喷施,结果表明,以２００ｐｐｍ的处理浓度效果最佳,同时,初花期喷施的矮化效应明显,初果期喷施的增产作用显著。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

本研究根据PRRSV GL膜蛋白基因和CSFV多聚蛋白基因,分别设计2对特异性引物和1条TaqMan探针,建立了同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的双重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。结果表明,该方法只对猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒特异性良好,不与非洲猪瘟、猪圆环病毒Ⅱ型、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒等常发猪病存在交叉反应;PRRSV和CSFV的检出下限分别为1.41拷贝/μL和1.6拷贝/μL;组内和组间Ct值变异系数都小于1.3%。对175份临床采集的样品检测,PRRSV单一阳性样品27份,CSFV单一阳性样品16份,检测双阳性样品24份。本方法敏感高、特异强,可以用于猪场的快速检测与诊断。     

村级会计委托代理服务工作实践——以云南省昭通市昭阳区永丰镇为例

2009年8月,村级会计委托代理服务工作云南省在昭通市昭阳区全面启动,基于此,将结合昭通市昭阳区永丰镇村级会计委托代理服务工作实践,对村级会计委托管理运行的现状及问题展开分析,并提出一些粗略的看法。     

杏鲍菇秀珍菇榆黄蘑中微量元素的光谱测定

采用火焰原子吸收光谱法直接测定了杏鲍菇、秀珍菇和榆黄蘑中铁、锰、锌、铜的含量,运用原子荧光光谱法测定了这3种食药真菌中硒的含量。选用硝酸和高氯酸（5：1）混合消化液进行消化。方法的相对标准偏差介于0．76％～2．12％,回收率介于95．8％～103．2％。结果表明,榆黄蘑、秀珍菇和杏鲍菇中含有较高的人体必须的微量元素铁、锰、锌、铜和硒等,揭示了这3种食药真菌具有较高的营养价值。     

高产高油早熟广适应性大豆新品种中黄35的选育

高产高油早熟大豆新品种中黄35,具有高产特点,2007年在新疆石河子获得5 577.0 kg·hm-2的产量:在黄淮海北组两年试验及全国北方春大豆两年试验增产均极显著;含油量高:黄淮海北组试验及北方春大豆试验的含油量平均为23.1%;早熟:北方春大豆晚熟组试验比对照早7 d;适应性广:已在辽宁、吉林、内蒙古东南部、河北、山东、天津、北京、陕两、宁夏、甘肃等地审定推广,是一个极有推广价值的品种.