二代靶向测序在CRISPR/Cas9靶区筛选中的应用性研究

旨在利用二代靶向测序技术比较不同靶区对CRISPR/Cas9基因编辑结局的影响,为该技术应用过程中的靶区筛选提供技术参考。本研究进行如下试验:1)以小鼠Pyk2基因为研究对象,针对其第一外显子区设计3个靶区,通过打靶质粒构建、细胞转染及转染细胞DNA二代靶向测序等手段发现,不同靶区总体的基因编辑(Indels)效率相差较大(site1:32.0%;site2:7.9%;site3:69.5%),编辑修复的偏好性也存在较大区别;而对于同一靶区,总编辑效率在2组试验重复中较为稳定(site1:31.8%vs 32.3%;site2:7.4%vs 8.4%;site3:71.3%vs 67.8%),编辑的偏好性也相对一致;2)针对上述筛出的最佳靶区site1,通过sgRNA与Cas9体外转录、小鼠胚胎显微注射和移植及子代的基因型鉴定等手段,结果发现,上述靶区的基因编辑偏好性在基因编辑动物生产中也得到证实;3)利用上述得到的site1靶区插入一个碱基的突变小鼠,在原靶区位置设计与site1仅相差一个碱基的sgRNA。通过突变小鼠基因组PCR和Cas9酶体外切割试验发现,靶区切割位点单碱基的插入就对该靶区编辑的效率产生显著影响(49.2%vs 0%)。综上所述,靶区选择对CRISPR/Cas9基因编辑的结局影响显著,通过二代靶向测序可以有效筛选CRISPR-Cas9基因编辑靶区,并在模式动物生产过程中也获得较好的结果。此外,针对靶区切割位点的单个碱基插入对基因编辑效率影响显著。     

求职应聘

再好的简历不一定让你得到工作,但面试中的表现出色却可以让你十拿九稳。下面向你介绍一些面试技巧。 一、充分准备 时间:面试时间确定好,不要与自己的日程安排冲突;要守时,可提前一刻钟到达,安定一下自己的情绪,整理好衣饰。 仪表:第一印象非常重要,良好的开端是成功的一半。穿衣服要配     

动物血液资源的开发利用研究进展

对动物血液资源的理化和营养特性进行了阐述,重点介绍了近年来动物血液产品在饲料、食品和医药工业领域的开发利用现状与应用研究进展,特别是介绍了青海牦牛和藏羊特色功能性食品的研发成果,并对动物血液资源开发利用的不足以及今后的开发利用前景进行了综述。     

切根与施肥对草地饲草产量、质地及调制的干草与青贮品质的影响

为研究切根与施肥对草地饲草产量与质量的影响,及对调制的干草与青贮品质的影响,采用单因素随机区组设计,测定产量、含水量、常规营养成分。结果表明;切根与施肥处理能够提高草地产草量和饲草品质,8月份收获,施尿素225kg/hm~2和磷酸二铵135kg/hm~2调制的干草品质较好;7月份收获,施尿素225kg/hm~2和磷酸二铵135kg/hm~2调制的青贮品质较好。     

基于刚毛柽柳转录组测序的EST-SSR标记识别与开发

表达序列标签-简单序列重复(EST-SSR)能为植物适应环境提供分子基础.通过对5个不同样地刚毛柽柳(Tamarix hispida)进行转录组测序、组装及比较,共识别出该物种1187个多态性EST-SSR位点.其中,三核苷酸重复数目最多(54.42％),其次是二核苷酸重复(37.66％).分别有500、176和211...     

褪黑激素在毛皮动物生产中的研究应用

褪黑激素(melatonin)是一种吲哚类(indole)激素,由松果腺(pineal gland)分泌。光照是调节松果腺活动的原始因素。光照抑制松果腺活动,黑暗则刺激松果腺产生褪黑激素。随着一昼夜光照和黑暗的交替及一年中长日照和短日照的交替,褪黑激素的分泌呈现明显的周期性变化。动物血液中褪黑激素白天含量低,夜间含量高;长日照期间褪黑激素的分泌少,短日照期间分泌增多。Rollag等(1976)报道了绵羊一昼夜24小时褪黑激素分泌的规律,白天血液中褪黑激素的含量10～     

陆地卫星影象在草地资源调查定量分析中的应用

草地资源遥感开拓了草地科学的一个新领域,应用电子计算机数字图象处理技术进行草地资源管理将是今后的发展方向,但目前尚难在生产中大量使用,因此,提高目视解译技术,将其由定性分类发展到定量分析是提高和普及草地资源遥感技术的重要任务。1983年,我们在河北省和内蒙古自治区应用陆地卫星影象目视解译抽样技术进行了草地资源调查,编绘了草地类型图,计算了各类型草地的面积,估测了草地生产力,取得了较好的效果。     

一例免疫应激引起的肉鸡支原体病、大肠杆菌病、温和型感冒混合感染的诊治

<正>巨鹿县一肉鸡养殖场引进一批20000羽白羽肉鸡,在7日龄免疫新城疫疫苗(C30+H120+28/86)和新流二联油苗,鸡群出现甩鼻、咳嗽,但没有引起足够的重视,在14日龄免疫传染性法氏囊疫苗后症状加重,个别鸡出现打蔫、咳嗽、呼噜、腹泻、下痢,遂使用含量为80%的氟苯尼考粉和40%的盐酸大观霉素、20%的盐酸林可霉素加黄栀口服液,连续使用5天后,鸡群无改观,并在20日龄免疫新城疫Ⅳ系疫苗后出现死亡(每天死亡由30只上升到180多只)。1临床症状鸡群出现食欲不振或废绝、羽毛松乱、打蔫、咳嗽、呼噜、张口伸颈呼吸、呼吸困难