西瓜噬酸菌磷酸盐特异性转运系统pstS基因功能分析

以西瓜噬酸菌（Acidovorax citrulli）Aac5菌株为研究对象,构建了pstS基因的缺失突变菌株和互补菌株,进行了致病能力及生物学表型的测定,并通过荧光定量PCR分析了pstS缺失对西瓜噬酸菌致病相关基因和磷酸盐特异性转运系统相关基因表达量的影响。此外,测定了西瓜噬酸菌的PstS蛋白在大肠杆菌中表达时对Pi的结合能力。结果表明,pstS的缺失,降低了西瓜噬酸菌的致病能力、运动能力、体外生长能力和生物膜形成能力,但不影响西瓜噬酸菌诱导烟草产生过敏性坏死反应的能力。pstS缺失后Ⅲ型分泌系统基因hrpG、鞭毛基因fliC、毒力相关基因virB、趋化性相关基因cheA、群体感应基因luxR的相对表达量显著上调,Ⅲ型分泌系统基因hrpX的相对表达量下调。磷酸盐特异性转运系统相关基因Aave＿2627、Aave＿2628、Aave＿2629、Aave＿2631和Aave＿2632表达量均上调。经PstS对Pi的结合能力试验,证明在大肠杆菌中异源表达的PstS蛋白具有Pi结合能力。研究表明,pstS在西瓜噬酸菌致病能力和Pi转运吸收过程中的Pi结合环节起到重要作用。     

油菜-小麦邻作模式对麦蚜种群动态的影响

为了探讨油菜-小麦邻作模式对麦蚜种群动态的控制作用,2009—2010年将小麦田和油菜田交界处设为0 m,在距0 m处2、4、6、8、16 m(包括0 m)处设立试验小区,记录麦蚜数量。邻作小麦田距离油菜田16 m处的无翅麦蚜数量最多,且与其它距离差异显著(P<0.05),而单作小麦田中各距离之间差异不显著(P>0.05);距离油菜田8~16 m处,小麦邻作田麦蚜数量的降低百分率骤减,分别从2009年的26.91%降低到1.02%和2010年的22.72%降低到0.53%。初步表明该邻作模式可以控制小麦田8 m以内的蚜虫数量。     

西瓜噬酸菌MarR家族转录因子Aave_3922的功能研究

 MarR(Multiple antibiotic resistance regulator)家族转录因子是一种广泛存在于细菌及古细菌中的转录抑制子。MarR可通过调控毒力因子的表达来影响病原细菌的致病性,其调控机制独特,在不同菌中存在不同的调控网络。为明确其在西瓜噬酸菌中的功能及信号通路,以西瓜噬酸菌Aac5菌株为研究对象,构建MarR转录因子Aave_3922的缺失突变株及互补菌株,通过对表型及转录水平的测定,初步探究西瓜噬酸菌中MarR转录因子的功能及可能的调控网络。结果显示,与野生型Aac5菌株相比,突变菌株致病能力、生物膜形成能力、体内生长能力均显著下降,互补菌株有所恢复。同时,基因Aave_3922的缺失会显著影响三型分泌系统关键基因hrpX及hrcJ、毒性相关基因trbC、鞭毛及趋化性相关基因fliC及cheA、生物膜相关基因Aave_2620在西瓜噬酸菌中的表达量;与WT-hrpXpGUS相比,ΔAave_3922-hrpXpGUS的启动子活性显著减弱。以上结果表明Aave_3922基因可能通过参与hrpX的转录调控,以及调控生物膜形成来影响西瓜噬酸菌的致病能力。     

基于多重PCR技术的西瓜噬酸菌分组检测方法及其应用

瓜类细菌性果斑病是瓜类作物上重要的种传细菌性病害,其病原菌西瓜噬酸菌Acidovorax citrulli为我国进境植物检疫性有害生物,种子种苗带菌是病害长距离传播的重要来源,种子种苗的快速检测对病害综合防控具有重要的意义。根据寄主的差异西瓜噬酸菌分为两个组,Ⅱ组菌株比Ⅰ组菌株具有更高的铜制剂敏感性,因此,西瓜噬酸菌的分组检测可为病害田间防治中铜制剂的精准使用提供科学依据,避免化学农药的过量施用。本研究筛选了现有的西瓜噬酸菌种间特异性引物和种内分组特异引物,建立并优化了一个多重PCR体系,实现了通过一步试验,就能够准确将西瓜噬酸菌与近缘种和其他植物病原细菌区分开来,并直接鉴定到西瓜噬酸菌不同组。该多重体系可以从带菌种子浸泡液和感病植物组织研磨液中直接检测到西瓜噬酸菌的不同组,且稳定性好,具有应用于生产实践的潜力。     

猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染对仔猪致病性的评估

本研究通过猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)强毒共感染3周龄健康仔猪来评价其致病性。试验动物随机分为3组,空白对照组(n=3头),PRRSV单独感染组(n=3头),PCV2和PRRSV共感染组(n=6头),从而比较相互之间的差异。通过临床症状、病理学变化、病原学和血清学检查,对二者混合感染仔猪的致病性进行了研究。结果表明PCV2和PRRSV共同感染能引起仔猪断奶后多系统消耗性综合征,表现为淋巴组织肿大、出血,肉芽肿性炎症,坏死性肝炎,仔猪消瘦、生长缓慢等特征性病变;混合感染能加重PRRSV对仔猪引起的间质性肺炎的严重程度。混合感染可以出现支气管肺炎和明显的肝病变,淋巴结多呈界限明显的块状出血等典型病变。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NM1株全基因测序及致病性分析

从内蒙古自治区暴发猪“高热病”的猪场分离出1株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（ Highly pathogenicporcine reproductive and respiratory syndrome virus, HP-PRRSV）,命名为NM1株。根据GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）全基因序列设计引物进行RT—PCR扩增和序列测定,结果表明HPPRRSVNM1株基因组全长15356bp（包括PolyA尾）。分析结果显示该毒株与PRRSV美洲型标准株（VR-2332）和欧洲型标准株（LV）全基因核苷酸同源性分别为89．4％和61．9％,说明NM1属于美洲型毒株。与VR-2332相比,NM1株非结果蛋白（nsp2）第481位和第533～561位氨基酸存在缺失,该毒株属于PRRSV变异株。动物接种试验结果表明,该毒株对猪具有高致病性。     

猪圆环病毒2型吉林分离株全基因组的克隆与序列分析

从吉林某猪场采集疑似患断奶仔猪多系统衰竭综合征死亡的猪体病料,进行猪圆环病毒2型(PCV-2)的分离;分离培养物经荧光标记的PCV-2特异抗体染色鉴定,并用PCV-2全基因组的特异性引物扩增,进行序列测定和分析。结果表明,从采集病料中成功分离出一株猪圆环病毒2型,并将此吉林分离株命名为PCV-2-JL11S,对其进行全基因测序,拼接结果显示,基因组全长为1 767bp;将分离株病毒的全基因组序列与14株GenBank已登录病毒进行比较,结果显示,核苷酸同源性最高可达99.2%;全基因序列系统进化树结果表明,分离株与HQ395057关系最近,而与HQ395037关系较远。上述结果表明,PCV-2吉林分离株存在一定的基因变异,而变异的发生原因尚需深入研究。     

两种早熟禾品种在植被砼上的表型可塑性

研究了2个早熟禾(Poa pratensis)品种Nublue、Kenblue建植在植被砼和田园土的表型可塑性(phenotypic plasticity)。结果表明:从叶长、叶宽、株高、基部直径4个方面相比较,Kenblue在植被砼与田园土上表现出显著的差异;但植被砼上Nublue与田园土上的比较,除叶长、叶宽、株高3个方面表现了显著的差异外,其基径并没有表现出显著的差异。就成坪性的综合指标而言,建植在植被砼上的Nublue要好于植被砼上的Kenblue。     

中抗稻瘟病优质高产早熟晚粳镇稻28号的选育与应用

镇稻28号是江苏丘陵地区镇江农业科学研究所以迟熟中粳主推品种淮稻5号作母本,与本所选育的优质食味超级稻品种镇稻18号作父本杂交,通过7代系谱法选择,于2016年育成的早熟晚粳新品种,2021年3月通过江苏省农作物品种审定委员会审定,2021年12月通过安徽省引种备案。该品种参加2019-2020年江苏省中间试验,全生育期155.1d,比对照武运粳23号早熟0.5d;株高98.3cm,有效穗数334.5万/hm²,每穗实粒数118.3粒,结实率94.5%,千粒重28.5g;中抗稻瘟病和条纹叶枯病,品质达《食用稻品种品质》标准二级。示范试种中表现出综合抗性强,产量潜力大,品质优,熟相好,耐肥抗倒等优点,适宜江苏沿江、苏南地区及皖南稻区种植。     

牛传染性鼻气管炎病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

为检测牛传染性鼻气管炎病毒,通过设计针对gB基因的特异性引物扩增gB基因,构建阳性重组质粒。经过优化建立了牛传染性鼻气管炎病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。结果显示,建立的实时荧光定量PCR检测方法在阳性标准质粒拷贝数在5.474×10⁴～5.474×10⁹拷贝/μL时线性关系良好,线性相关系数R²=0.999 3。该方法最低检测限为5.747×10²拷贝/μL;可以特异性检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛副流感病毒(BPIV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)不发生交叉反应。病毒滴度与拷贝数的线性关系良好,线性相关系数R²=0.985 4。该方法为牛传染性鼻气管炎病毒的快速检测提供了技术支持。