p15在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的表达

为探讨鸡p15蛋白的特性及其在细胞周期抑制通路中与其他蛋白的作用,本研究选用昆虫细胞表达系统来表达有活性的p15蛋白.为后期纯化的需要,对pFAST供体质粒的多克隆位点进行了重新改造,并成功构建带有TAP纯化标签的供体质粒pFAST-NMCS-N-TAP-p15和pFAST-NMCS-C-TAP-p15.将2个供体质粒转化到DH10Bac感受态菌中,对阳性转化子Bacmid-N-TAP-p15和Bacmid-C-TAP-p15进行反复涂板的去阴性单克隆纯化,提取大质粒Bacmid-N-TAP-p15和Bacmid-C-TAP-p15并进行转座鉴定.将纯化的大质粒Bacmid-N-TAP-p15和Bacmid-C-TAP-p15转染入sf9昆虫细胞中,72 h后收集培养上清中的杆状病毒,并进行病毒的扩增和滴度测定,结果所获2株重组杆状病毒N-TAP-p15和C-TAP-p15的滴度分别为3.6×107,5.4×107pfu/mL.将2株高滴度的重组杆状病毒再感染新培养的sf9昆虫细胞进行重组p15蛋白的表达,结果与对照组相比,重组p15融合蛋白得到了有效的表达,表达量分别为4.32%和4.7%.Western blotting结果表明,所表达的重组p15融合蛋白只特异地与p15单克隆抗体和兔的IgG反应而未与其他细胞蛋白反应;明带有TAP标签的重组p15融合蛋白在昆虫细胞表达系统中得到了有效表达.     

多用途树种香椿的研究综述

香椿材色美丽,芳香而耐腐,用途广泛,享有"中国桃花心木"之称,具有较强的生态适应性、抗病虫草害能力,在生产中不需使用化肥、农药,是名副其实的绿色蔬菜,具有巨大的发展潜力。本文对香椿的材用价值、食用价值、药用价值及其研究现状进行了综述,并对香椿的发展前景作了展望。     

梅花鹿Smad2与Smad4基因的克隆及其在鹿茸顶端组织的表达

为了从梅花鹿鹿茸顶端组织中克隆Smad2与Smad4基因的编码区(CDS)序列,分析其分子特性及在鹿茸顶端不同组织中的表达情况,试验采用TRIzol法提取鹿茸顶端组织总RNA,以PCR方法获得Smad2与Smad4基因,并利用生物信息学软件对其进行生物信息学分析,免疫组化法检测Smad2与Smad4基因在鹿茸顶端不同组织中的表达水平。结果表明:Smad2基因完整的CDS序列长度为1 404 bp,编码467个氨基酸,与牛、人、马和猪的Smad2核苷酸序列同源性分别为98.29%、94.52%、95.30%和95.51%;Smad4基因完整的CDS序列长度为1 662 bp,编码553个氨基酸,与牛、人、马和猪的Smad4核苷酸序列同源性分别为98.26%、94.89%、95.85%和95.97%;Smad2与Smad4蛋白的分子质量分别为52.24 ku与60.50 ku,理论等电点分别为6.13与6.50,均具有较强的亲水性;梅花鹿Smad2与Smad4基因在茸皮层、间充质层和软骨层中均有表达,在软骨层中表达水平较高。说明梅花鹿Smad2与Smad4基因在鹿茸软骨层中表达水平较高,对鹿茸再生发育具有一定的调节作用。     

RNA干扰技术及其在马立克病端粒酶研究中的应用

RNA干扰是一种在动植物中广泛存在的、由双链RNA诱发的、同源mRNA特异性沉默的过程,具有高特异性、高效性和可遗传性等特征.RNA干扰技术已成为分子生物学研究中最为活跃的热点之一.端粒和端粒酶系统可以调节细胞的增殖,通过抑制端粒酶的活性而抑制细胞的增殖是肿瘤治疗的新策略.文章综述了RNA干扰技术对端粒酶活性调节方面的...     

大型矿用潜水电泵接力排水系统的改进

针对我国矿山抢险排水中存在的问题。分析全贯流式轴流潜水电泵与大型矿用潜水电泵组成的接力排水系统存在的不足。研制开发了充油式混流潜水电泵与大型矿用潜水电泵组成的新型接力排水系统。现场运行的结果表明，改进后的排水系统具有排水能力强、运行可靠性高等优点，解决了地下开采矿井淹后抢险复矿工作中深部大流量排水、有效安全运行的问题。     

鲜食玉米病虫害发生特点及绿色防控技术

现代都市农产品供求需要和农业产业结构调整,促使鲜食玉米种植面积逐年增大。推广应用鲜食玉米绿色防控技术防治病虫危害,是促进鲜食玉米高产高效优质生产的主要措施。1主要虫害及其防治1.1玉米螟的危害及防治玉米螟也称其玉米钻心虫,具有多食性,其寄主植物多。玉米螟钻蛀心叶,玉米叶现整齐小孔。玉米螟幼虫钻入雄花危害。     

猕猴桃的主要功能成份及其开发利用

主要介绍猕猴桃的6种功能成份,即维生素、膳食纤维、微量元素、多糖、黄酮、多酚的研究近况,及猕猴桃在果实贮藏、加工工艺、保健药用方面的开发利用,为今后猕猴桃的进一步开发与研究提供帮助。     

基于J2EE平台的寄生虫虫种资源库的构建

目的构建寄生虫虫种资源信息管理系统。方法对系统进行功能分析和结构设计,确定系统的模块组成、各模块之间的逻辑关系。结合J2EE,XML,JDO,JSP,MVC等多种技术,运用企业级应用的分层构建原则,在设计中应用设计模式理念,将显示与逻辑、内容与表示相分离。结果实现了跨平台数据库的构建,建立了可供二次开发的用户模块、查询模块和逻辑关联,并组合成一个完整的系统。结论完成了基于J2EE平台具有可扩展结构的寄生虫虫种资源信息管理系统的构建。     

人参鲨烯环氧酶基因的克隆与原核表达

【目的】克隆人参皂苷生物合成途径中的鲨烯环氧酶（SQE）基因,并进行原核表达与纯化,初步探讨SQE活性与人参皂苷生成量之间的关系。【方法】以4年生人参根组织须根为材料,提取其总RNA,反转录为cDNA。以合成的cDNA为模板,对SQE基因进行克隆,再将其插入原核表达载体pET-30a中,构建pET-30a-SQE重组质粒,经酶切和测序鉴定后,转入Rosetta大肠杆菌,经0.8 mmol/L IPTG 37 ℃诱导表达4 h后,进行SDS-PAGE电泳检测,采用NiAgarose亲和层析柱纯化目的蛋白,利用液相色谱串联质谱联用技术（LC-MS）检测SQE的活性。【结果】获得了人参SQE基因1 611 bp的全长编码区cDNA。酶切和测序结果表明,原核表达载体pET-30a-SQE构建成功;SDS-PAGE分析显示,在Rosetta大肠杆菌中成功诱导表达了SQE融合蛋白,且纯化后的目的蛋白纯度较高;LC-MS联用检测结果发现,随着SQE用量的增加,达玛烯二醇的生成量递增。【结论】克隆了人参SQE基因,获得了在体外具有生物学活性的SQE蛋白,并证实了其活性与人参皂苷生成量有很大的相关性。