自然低温胁迫对3种桉树生理生化特性的影响

对3种桉树幼苗叶片相对电导率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量等生理指标进行了研究。结果表明,自然低温下,各桉树表现出不同的适应性。总的来说,邓桉柳桉巨桉。自然低温(日最低气温-3.6℃)对柳桉和巨桉造成较大损害。另外,低温使桉树SOD活性上升,这与其MDA含量增加保持一致。     

闽楠微扦插繁育体系的建立

  目的   以闽楠Phoebe bournei近成熟胚为外植体,采用多种方法建立闽楠微扦插繁殖体系。  方法   探究不同子叶切除强度对胚褐化的影响,以及抗褐化剂和吲哚丁酸（IBA）对近成熟胚萌发和无菌苗微扦插生根的影响。  结果   闽楠近成熟胚褐化的主要部位为子叶,子叶切除后胚可以萌发但不能正常生长,添加聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）对抑制子叶褐化有明显效果且不影响胚的萌发。近成熟胚萌发最佳培养基为1/2MS+0.2 mg·L-1 IBA+2 g·L-1 PVP,萌发率最高可达89.71%。无菌苗微扦插最佳生根培养基为1/2MS+1.5 mg·L-1 IBA+2 g·L-1PVP,顶芽生根率为100%,平均生根数为3.86条,平均根长1.56 cm;侧芽生根率为60.27%,平均生根数为1.55条,平均根长0.85 cm。筛选出的3号株系的繁殖系数达24.40。  结论   研究结果可为闽楠良种繁育提供参考。     

浙江省庆元县域楠属植物野生资源调查

【目的】调查浙江省庆云县范围内楠属Phoebe植物野生资源,以期为楠木合理保护与开发利用提供理论支撑。【方法】采用样方法每木检尺对庆元县域范围的野生楠木野生资源进行全面调查,掌握其分布数量、分布格局、生境及居群状况。【结果】庆元县域楠属植物有浙江楠P. chekiangensis、闽楠P. bournei、紫楠P. sheareri等3种,分布点23个,覆盖9个乡镇街道。浙江楠和闽楠多分布于800 m以下,紫楠水平分布跨度最大,垂直分布可达1 250 m,但种群植株数量少。现有居群多存于村旁风水林或人为干扰较少的保护区,楠木群落主要建群种和优势种为壳斗科Fagaceae和樟科Lauraceae树种。【结论】庆云县楠木野生资源稀少,亟需保护,人为活动频繁及楠木自身光需求特性是导致濒危的主要成因。表5参21     

光皮桦BBX类基因BlCOL13的克隆与表达分析

利用RACE、RT-PCR以及基因组步移技术克隆得到光皮桦BlCOL13全长cDNA（GenBank登录号：KP663425）、全长DNA及其启动子序列。该基因DNA全长2 808 bp,具有4个外显子,3个内含子;cDNA全长1 370 bp,包含1 140 bp的开放阅读框,编码含379个氨基酸的蛋白。BlCOL13蛋白N、C端分别有两个B-box和一个CCT结构域,属于典型的BBX蛋白。以拟南芥中BBX蛋白的分类为参照,通过聚类分析表明BlCOL13属于Ⅱ型BBX蛋白;克隆得到的BlCOL13启动子序列长685 bp,含有多个与成花、光响应、激素信号转导以及逆境胁迫相关的顺式作用元件。亚细胞定位试验结果表明该基因主要在细胞核中表达。不同组织中该基因都有一定程度的表达,但在雄花中表达量最高。低温、干旱、ABA和盐胁迫等非生物逆境都在一定程度上诱导BlCOL13的表达,盐胁迫的影响最为明显,表明该基因在光皮桦逆境响应中可能发挥比较重要的作用。     

百山祖冷杉SSR体系的建立及人工辅助授粉子代的初步鉴定

应用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法提取百山祖冷杉Abies beshanzuensis叶片DNA,建立百山祖冷杉简单重复序列（SSR）反应体系。在体系建立过程中,采用单因素法分别对影响聚合酶链反应（PCR）的因素进行分析。结果表明：在20.00 μL反应体系中,模板DNA用量、镁离子（Mg²⁺）浓度、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸（dNTPs）浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量分别是60 ng,3.75 mmol·L^－1,0.15 mmol·L^－1,0.40 μmol·L^－1,16.67 nkat（1.0 U）时结果最好。随机挑取其中1对引物扩增的多态性片段进行克隆测序,序列经比对后得到的一致性值达到94%,表明其他杉科植物的SSR引物可以在百山祖冷杉中应用。通过引物筛选,得到15对引物可在百山祖冷杉中扩增得到多态性条带,其中4对引物扩增得到的部分片段在百山祖冷杉和日本冷杉Abies firma间有明显区别。这些结果表明,利用SSR分子标记技术能够用于百山祖冷杉人工辅助授粉子代的初步鉴定。图7表2参16     

光皮桦EST-SSR PCR反应体系的优化

为获得稳定的聚合酶链式反应（PCR）产物,采用正交设计L25（56）对光皮桦Betula luminifera表达序列标签-简单重复序列聚合酶链式反应（EST-SSR PCR）反应体系中的5个因素:DNA模板浓度,引物浓度,镁离子（Mg2+）浓度,三磷酸碱基脱氧核苷酸（dNTPs）浓度和DNA聚合酶量进行优化,每个因素设计5个水平。优化试验结果表明:光皮桦EST-SSR最佳PCR反应体系:4.0 mgL－1DNA模板,0.500 molL－1引物,1.250 mmolL－1 Mg2+,0.250 mmolL－1 dNTPs,0.072 5 16.67 mkatL－1 rTaq酶。通过梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度。对优化出的EST-SSR PCR反应体系进行稳定性检测,结果均能获得稳定、清晰可辨的DNA谱带。图6表3参15     

林木遗传连锁图谱构建研究进展

林木遗传图谱是林木遗传学家进行林木遗传改良的重要工具。由于林木生长周期长, 高度杂合, 且多为异交物种, 构建高密度的遗传图谱困难较大。文中对已构建的林木遗传图谱进行总结, 从遗传标记的选择、作图群体的构建和遗传作图策略3个方面综述林木遗传图谱构建的过程, 着重介绍林木遗传图谱构建的特殊之处, 指出作图过程中可能存在的问题, 并对构建高密度的林木遗传图谱进行展望。     

2种测定红叶石楠耐寒性方法的比较

将红叶石楠2个品种‘鲁班’和‘红罗宾’置于-20℃低温下分别处理2 h3、h、4 h5、h、6 h8、h后,采用立即测定与回温测定2种方法测定红叶石楠2个品种的耐寒性,并比较2种方法之间的差异性。结果表明:①随着低温处理时间的延长,2个品种的电导率与超氧物歧化酶(SOD)都呈现上升趋势;②立即测定与回温后测定方法之间差异不显著;③低温处理后2个品种试验苗均生长良好。表明,红叶石楠2个品种能耐-20℃的低温。     

乳白石蒜组织培养

以乳白石蒜Lycoris albiflora 的鳞茎作为外植体, MS 为基本培养基, 比较9 种不同配方对乳白石蒜不定芽诱导和增殖的作用。结果表明:MS +1.0mgL-1BA +0.1mgL-1NAA 是最佳的不定芽诱导培养基, 最高诱导率达到100 %;通过切割诱导得到的小鳞茎, 在MS +5.0mgL-1BA +2.0 mgL-1NAA 培养基上得到了最好的增殖效果, 最高增殖倍数达到15 ;MS +1.0 mgL-1BA +2.0 mgL-1NAA 是较好的生根培养基。表5 参11     

巨桉EgrCBF1和EgrCBF2基因的克隆和胁迫响应表达分析

从低温诱导的巨桉幼苗中克隆到2条CBF的全长cDNA序列,命名为EgrCBF1和EgrCBF2,全长分别为1 062 bp和1 203 bp,编码220个氨基酸和196个氨基酸,命名为EgrCBF1和EgrCBF2(GenBank登录号分别为:JQ068827; JQ068828),都包含1个AP2结构域.2个基因编码的蛋白都与冈尼桉中CBF蛋白(DQ241820)具有很高的同源性,与EguCBF1a的同源性分别达到了91％和80％.RT-PCR分析表明,EgrCBF1主要在叶和根中表达,而EgrCBF2在叶、茎和根中都有表达.对不同低温条件(0,2,4,6,8℃)和4℃2,4,8,24,48 h处理下EgrCBF1和EgrCBF2的qRT-PCR分析表明:2个基因都受低温诱导,并在2℃时诱导水平达到最高;4℃下随低温时间的延长,它们的诱导表达特性都呈先升后降的趋势.在100 μmol·L-1 ABA,200 mmol·L-NaCl和干旱处理下,EgrCBF1受ABA和干旱诱导,EgrCBF2则受干旱和高盐胁迫诱导.