牛流行热病毒山东流行株G基因的克隆及序列分析

为了解牛流行热病毒(BEFV)山东流行株G基因的特点,从临床病料中获得山东流行株牛流行热病毒的G基因,并对其进行序列测定和分析。参考GenBank中牛流行热病毒的G基因序列,设计并合成一对特异性扩增G基因引物进行PCR,扩增目的片段,并克隆于pEASY-T3载体上,筛选阳性重组质粒进行序列测定,用MEGA软件、NJ法构建进化树。结果显示,该流行毒株G基因与GenBank中其他BEFV株G基因的核苷酸推导氨基酸的同源性均大于96%;遗传进化关系分析结果表明,BEFV山东流行株与中国台湾流行株具有较高同源性和较近的亲缘关系。     

牛Nramp 1基因5'调控区序列的克隆及序列分析

采用LA-PCR技术扩增牛Nrampl基因2 515 bp的5'调控区序列,构建了重组克隆载体pEASY-T3-Nrampl,对阳性克隆进行了PCR扩增、限制性酶切鉴定,DNA测序及生物信息学分析.结果表明,试验成功构建了包含Nrampl基因5'调控区的重组质粒.经同源性比对发现,Nrampl基因5'调控区在不同物种中具有一定的保守性,在转录起始位点近端的启动子区域,牛与人、鼠、猪、羊的同源性分别是60.50%.58.52%,72.18%,81.95%.经预测,该调控区富含GR、SP1、c-Ets-1、NF-W2等转录因子结合位点.本研究为进一步确定牛Nrampl基因核心启动子区域及该基因的表达调控奠定了理论基础.     

健康奶牛产道内正常菌群的研究

本试验从山东省不同奶牛场筛选出60头健康状况良好的奶牛,按试验要求分三组,第一组为20头8~15月龄的未配种的青年奶牛,第二组为20头处于干奶期(围产期)的奶牛,第三组为20头产后一个月的奶牛。采用常规细菌培养、分离、鉴定的方法从产道分离到细菌150株,其中乳酸杆菌46(30.7%)株、表皮葡萄球菌39(26%)株、无乳链球菌21(14%)株、大肠杆菌23(15.3%)株、芽孢杆菌8(5.3%)株、棒状杆菌5(3.3%)株、念珠菌8(5.3%)株。比较结果显示,乳酸杆菌为正常奶牛产道内的主要寄生菌,其次是表皮葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌。但是未配青年奶牛的阴道内,乳酸杆菌的分离率并不高。试验发现,奶牛阴道内的寄生菌一般为2~3种。     

基于学科交叉融合的农业资源与环境专业改造升级路径探索与实践

新时代国家对人才需求发生了巨大变化,传统农业资源与环境专业无论在课程体系还是人才培养模式上都与新农科建设人才供给侧的结构性变革不相适应。基于此,文章分析了农业资源与环境专业的历史发展过程及其进行改造升级的必要性,依托“世界一流学科”建设学科及理学、工学和农学多学科优势,将多学科交叉理念融入人才培养方案、培养模式及培养途径,改革以及师资培育和实践平台建设等各个方面,构筑了面向新农科建设的多学科交叉新型人才培养“立交桥”,从而实现对传统农业资源与环境专业的改造升级。     

细胞自噬与小RNA病毒相互作用分子机制研究进展

细胞自噬是真核生物中普遍存在的、对细胞内物质进行循环更新,维持内环境稳态的一种自我保护机制。近年研究表明,细胞自噬能够参与小RNA病毒的感染过程,小RNA病毒感染细胞时,快速激活自噬途径,自噬可以通过递呈病毒抗原发挥抗病毒天然免疫功能;同时自噬体为部分小RNA病毒提供复制相关蛋白质和非细胞裂解性释放途径,促进病毒的复制。论文对近年来小RNA病毒感染和细胞自噬相互作用的研究进展进行综述,为进一步阐明小RNA病毒参与自噬调节的作用机制提供参考。     

牛轮状病毒结构蛋白VP4基因的真核表达

[目的]克隆获得牛轮状病毒VP4全基因,并进行真核表达。[方法]采用RT-PCR技术,从牛轮状病毒总RNA中扩增出VP4基因,将其重组到含有Flag标签的pcDNA3.1(+)载体中,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,通过Lipofect2000TM转染293T细胞,细胞增殖后经RT-PCR和Western Blot检测VP4基因的表达。[结果]获得了VP4基因的阳性重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-VP4;转染293T细胞后经RT-PCR和Western Blot检测表明,该基因的重组表达载体构建正确,可在293T细胞内瞬时表达。[结论]VP4基因的重组真核表达载体构建成功并可在真核表达细胞内表达,该研究为VP4基因的DNA疫苗的研发及应用奠定了基础。     

Genefinder和Goldview两种核酸染料的灵敏度比较

使用前染和后染两种不同的染色方法,比较了Genefinder和Goldview两种新型核酸染料对凝胶中DNA的染色效果及灵敏度。结果表明,用前染法染色Genefinder对琼脂糖凝胶中的核酸染色效果要较Goldview好,用后染法染色两种染料效果差不多,且用前染法的灵敏度较后染法好。     

抑制牛整合素β5基因表达的shRNA的筛选

 根据牛整合素β5（Integrin Bata5,ITGB5）的基因序列,设计并构建了真核表达载体pcDNA3.1-flag-β5和shRNA重组慢病毒载体H1-shRNA145、H1-shRNA726,利用脂质体介导法,将pcDNA3.1-flag-β5分别和H1-shRNA145、H1-shRNA726共转染293T细胞,并以针对LacZ基因的H1-shRNA-LacZ 与pcDNA3.1 flag β5共转染293T细胞作为对照,以持家基因β-actin为蛋白内参,通过Western blot检测ITGB5的表达,结果表明,H1-shRNA145、H1-shRNA726均可抑制ITGB5的表达,并有剂量效应,为进一步研究ITGB5的基因功能奠定基础。     

国内外奶牛主要病毒病的流行现状及防控技术研究进展

近年来,随着我国奶牛业的迅猛发展,规模化、集约化程度不断提高,传染病防控形势也越来越严峻,特别是口蹄疫、病毒性腹泻粘膜病、传染性鼻气管炎、轮状病毒腹泻对养牛业危害巨大,在我国广泛流行。本文就这4种病毒病的危害、流行现状、诊断技术、疫苗研发、防控技术进行分析和概述。     

农业技术服务体系与农业产业化

目前"三农"工作是各项工作的重中之重,近年来,我国农业一直都在不断发展,尤其是加入世界贸易组织之后,农业更是呈现出快速发展的良好趋势。在农业技术服务体系中,服务对象是农业,主要任务将放在农产品的质量上,力争提高其质量。另外,要提高农民的农业技术,进行专业的技术培训,进而优化农业技术服务体系,使其与农业产业化、农业社会化相互促进、共同发展,使我国的农业发展到一个更高的层次。