口蹄疫病毒O／China／99株VP1基因植物种子特异性表达载体的构建及农杆菌的导入

根据植物组成型表达质粒pBin438的限制性酶切位点及FMDV VP1的核苷酸序列设计并合成引物，从种子特异性启动子7S质粒pU8—2质粒中扩增7S启动子，经HindⅢ和BarnHⅠ酶切，与经同样双酶切的植物组成型表达载体pBin438大片段连接，经酶切、PCR鉴定及序列分析，种子特异性表达载体p7SBin438构建完成。从FMDV VP1基因的pGEM—VP1质粒中扩增VP1基因，经BarnHⅠ和SalⅠ双酶切后，与p7SBin438质粒酶切后的大片段连接，经酶切、PCR及测序鉴定，FMDV VP1基因已置于种子特异性启动子7S下游，成功构建了FMDV VP1基因的种子特异性表达载体p7SBin438-VP1。通过三亲交配法，将表达载体p7SBin438-VP1导入根癌农杆菌，为研究FMD可饲疫苗奠定了基础。     

牛O—A型口蹄疫双价灭活苗研究：效力试验和最小免疫剂量试验

用制备的６批牛Ｏ－Ａ型口蹄疫又价灭活疫苗对黄牛进行了安全性试验,效力和最小免疫剂量试验。结果表明：免疫牛对Ｏ型和Ａ型同源强毒攻击的近期免疫保护率分别为９１．３％和１００％;免疫后１８０ｄ时,保护率分别为１００％和９３．３％;免疫后２４０ｄ时,保护率分别为６０．０％和５０．０％。     

口蹄疫病毒株AF72 VP2的结构模拟与分析

为了分析FMDV AF72VP2蛋白结构和功能的关系.以口蹄疫病毒株AF72 RNA为模板,反转录并扩增目的基因,PCR纯化产物与pGEM-Teasy载体连接并转化JM109菌株,用凝胶电泳、PCR和SpeⅠ、SphⅠ双酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序.比对测序结果确定AF72 VP2的核苷酸序列,利用同源建模的方法建立AF72 VP2结构蛋白的3D结构,在此基础上,综合亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数预测AF72 VP2结构蛋白的B细胞抗原表位.分析表明,口蹄疫病毒VP1,VP2,VP3 和VP4在核苷酸水平上的变异率是无差异的(P>0.05);而他们在氨基酸水平上的变异率差异显著(P<0.05).该毒株与20株源于GenBank中的VP2氨基酸序列比对发现其保守区主要位于第1～23、37～51、66～76、85～101、124～142、165～199、205～219位.保守区氨基酸残基在维持VP2蛋白的空间构象和功能方面具有重要作用,其中1～10、129～140、165～176氨基酸区段是AF72 VP2结构蛋白可能的B细胞抗原表位区域,该结果将为进一步的FMDV多表位疫苗研究提供更有价值的参考信息.     

细胞免疫检测方法研究进展

细胞免疫在机体的免疫过程中发挥着重要的作用,掌握细胞免疫的各个过程对全面了解机体免疫反应、监测抗原变异、正确理解病原体致病的分子机制、自身免疫性疾病的治疗以及疫苗的研制等都具有重要的意义.笔者从体内功能检测、体外表型检测、体外功能检测3个方面系统地介绍了目前在细胞免疫检测研究中常用的检测方法,并对这些方法的优缺点进行了分析比较.     

江淮地区棉花铃病的防治技术

棉花铃病是指侵染棉铃造成危害的多种病害的通称,一般又叫烂铃.其中最重要的病害是棉花疫病,其次还有其他10余种由各种病原危害的铃病.江淮流域棉区雨水多,湿度大,容易发生烂铃.尤其是秋雨连绵,田间湿度增高,烂铃现象更为严重,受害轻的可造成棉铃脱落或僵瓣,形成烂铃,受害严重的,可严重影响棉花的产量和品质.     

FMDV Asia1/HeB病毒株结构蛋白基因的克隆测序及B细胞抗原表位预测

对口蹄疫病毒Asia1/HeB株P1结构蛋白基因进行了扩增、克隆及序列测定.采用DNAStar Protean软件对P1蛋白的二级结构、可塑性、亲水性、表面可及性及抗原指数等参数进行分析,综合预测其B细胞表位分布.结果表明,FMDV Asia I/HeB株P1基因长2 199 bp,包含完整的开放阅读框,编码733个氨基酸,其中VP1长633 bp,编码211个氨基酸,VP2长654 bp,编码218个氨基酸,VP3长657 bp,编码219个氨基酸,VP4长255 bp,编码85个氨基酸.P1结构蛋白的二级结构较为复杂,含有较多的β片层结构和转角结构,VP1、VP2和VP3上均有多个区域为B细胞优势表位,VP4上也有少量的潜在B细胞表位.与已鉴定的B细胞表位相比较,该方法预测的结果有较高的准确度.为试验确定FMDV AsiaI/HeB株P1结构蛋白的B细胞表位和反向疫苗学设计提供了理论基础.     

口蹄疫A型灭活疫苗毒种和种子批的研究

为了保证制苗及攻毒用毒种的质量和稳定性，在对制苗和攻毒毒种的毒力、特异性、保存期、扩繁代次等进行研究的基础上，建立了口蹄疫A型灭活疫苗制苗和攻毒用毒种种子批。结果表明，原始毒种和基础毒种的扩繁代次均控制在5代以内，适宜的保存方法和保存期均为加含500mL／L甘油的PBS后在-30℃保存1年、-70℃保存2年；用于生产抗原的工作毒种，最高扩繁代次控制在15代以内，最佳保存方法和保存期为加保护剂后在-20℃保存半年、-70℃保存1年；用于效力检验的攻毒毒种采用原始毒种。通过制苗和攻毒用毒种种子批的建立，规范了口蹄疫疫苗生产和检验过程中的毒种管理。     

转亚洲Ⅱ型口蹄疫病毒VP1基因烟草研究

将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因克隆到植物表达质粒pB in438中,构建了植物表达载体pB in-VP 1,通过根癌农杆菌叶盘转化法,将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因导入NC 89烟草基因组中,对经卡那霉素筛选获得的20株抗性植株,进行PCR和RT-PCR检测。结果表明,抗性烟草植株中已整合了VP 1基因。     

口蹄疫A型病毒AF/72株免疫原性分析

用口蹄疫A型病毒AF/72株,经RT-PCR获得其VP1基因序列,并与GenBank中的其他5株A型口蹄疫病毒株比对,同源性均大于90%。将此病毒灭活后与弗氏佐剂联合制成灭活疫苗免疫豚鼠后分离血清,经液相阻断ELISA和微量细胞中和试验检测此血清的抗体效价,其均值分别为2.093和1.227。用微量细胞中和试验分别测定了AF/72参考血清对5株A型口蹄疫病毒的中和抗体效价,各试验重复3次,其平均值为2.156。分别计算AF/72对5株不同病毒株的r值,结果为0.79~0.92,均值为0.85。按照OIE标准,AF/72具有较强的免疫原性,抗原谱广,可作为制造口蹄疫A型疫苗的备选毒株。     

口蹄疫病毒病毒样颗粒研究进展

口蹄疫病毒病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是不含口蹄疫病毒RNA的空衣壳结构,由口蹄疫病毒的4种结构蛋白体外自组装形成的,形态上与天然病毒粒子相似,具有很强的免疫原性和生物学活性。文章介绍了口蹄疫病毒衣壳的组装、口蹄疫病毒VLPs在国内外的研究进展和影响VLPs形成的因素,并对VLPs在疫苗研制等方面的应用前景作了展望。