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胡杨根、茎、叶、愈伤组织总RNA提取的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
胡杨根、茎、叶、愈伤组织等器官和组织的总RNA高质量提取是进行以胡杨RNA为基础的分子生物学研究的基础。以2 a生胡杨实生苗根系为材料,用CTAB-PVP提取缓冲液裂解细胞并变性蛋白,经氯仿/异戊醇(24∶1,v/v)抽提后,用3种不同的沉淀方法获得胡杨根系总RNA,电泳和定量测试等分析提取质量。结果表明,LiCl沉淀法结合70%乙醇洗涤沉淀两次获得的的胡杨根系总RNA,条带清晰、亮度高,且没有明显的DNA污染;actin基因片段设计引物对胡杨根系总RNA进行RT-PCR扩增,扩增片段与预期大小一致,表明该RNA可用于逆转录合成cDNA,提取物RNA中的Li 残留对逆转录酶活性的抑制作用不明显;该方法用以提取2 a生胡杨实生苗茎、叶及愈伤组织总RNA,均获得高质量总RNA。CTAB-PVP-LiCl(附70%乙醇洗涤RNA沉淀2次)的方法可用于胡杨根、茎、叶和愈伤组织总RNA的提取。 相似文献
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[目的]获得耐旱转录因子的植物表达载体,进而转化植物获得耐旱性提高的新植物株系。[方法]提取脱水处理的拟南芥总RNA,利用AtDREB2B特异引物通过RT-PCR扩增出1.2kb片段,并将其克隆至pBS-T上,测序。[结果]序列分析表明,该克隆序列与GenBank上登录AtDREB2B基因序列的一致性为100%。进一步通过片段的亚克隆,将其构建至植物表达载体pCAMBIA1301和pBin438上,分别由rd29A启动子和重复35S启动子调控基因表达。[结论]成功构建了2种AtDREB2B的植物表达载体,并通过冻融法转化根癌农杆菌GV3101,为农杆菌介导的AtDREB2B基因对植物的遗传转化奠定基础。 相似文献
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我县地处宁绍平原、钱塘江畔,种植业除水稻、小麦之外,棉花是主要的作物之一,种植面积达8.3万亩,油菜面积亦有数万亩之多。棉籽饼、油菜籽饼年产量达二千万斤以上,仅棉籽饼一项年产量就有1600万斤。棉籽饼是质地良好的蛋白质饲料,据测定粗蛋白质为28.43%,但由于棉籽饼中含有游离的棉酚毒类,而且该毒在体内有蓄积作用,会造成猪体中毒,轻则使猪拉稀脱水消瘦,重则造成死亡和母猪流产。因此长期以来我县棉籽饼除少量作牛冬季饲料和少数社员煮熟作饲料之外,绝大部分棉籽饼一向作为肥料沤田。为了广辟蛋白质饲料,高速度的发展养猪事业,我县曹娥油厂采用汽油、乙醇混合溶剂浸出法提取棉酚,使棉籽饼残毒,下降至0.02%。本试验系采用该厂生产的脱毒棉籽饼作试验材料,饲喂育肥猪。试验自79年5月20日开始到10月15日结束,在县科委的正确领导,粮食农业部门的密切配合,共同努力下,试验已顺利完成。现将我们在上虞县畜牧场用脱毒棉籽饼作饲料饲喂肥猪的试验结果报告如下: 相似文献