水貂生长激素的原核表达及特异性抗血清制备

本研究旨在建立水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS感受态细胞,经IPTG诱导表达,超声破碎菌体后离心获得包涵体蛋白,利用8mol/L尿素对其进行溶解和复性,经Ni-NTA树脂亲和层析纯化获得重组蛋白。通过Western blotting检测及MALDI-TOFMS质谱分析对获得的蛋白进行鉴定。用SDS-PAGE电泳法检测蛋白纯度,用BCA法测定其浓度。复性mGH蛋白与完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂乳化制备免疫抗原,采用皮下多点注射法免疫3只新西兰大白兔,首次免疫剂量为600μg/只,二免剂量为600μg/只,三免剂量为400μg/只。三免10d后分离制备血清,Western blotting法检测其特异性,间接ELISA法检测其效价。结果表明,原核表达的包涵体经Ni-NTA柱纯化后所得蛋白鉴定为mGH融合蛋白;SDS-PAGE电泳鉴定复性mGH蛋白条带单一,纯度达90%以上,BCA法计算蛋白浓度为669μg/mL,均达到了免疫动物的要求;制备的抗血清经Western blotting检测具有良好的结合特异性,间接ELISA法测定其抗体效价达1∶256 000以上。上述结果表明,原核表达载体pET28b-mGH可在大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS细胞中高效表达mGH融合蛋白,表达蛋白经变性、复性和纯化后免疫新西兰大白兔,可制备高效价特异性抗血清。     

沙棘嫩枝容器扦插育苗试验小结

沙棘,适应性强,抗严寒风沙,耐干旱和高温,也耐水湿和盐碱.其根系发达,根蘖能力强,生长快,是防风固沙、水土保持的优良树种.但苗木扦插成活率低,尤其是嫩枝扦插技术一直没有得到很好解决,成为沙棘苗木繁殖的一大障碍.为此,我们组织开展了沙棘嫩枝容器扦插育苗技术研究,取得很好效果,现归纳如下:     

中山杉引种试验研究

2004～2009年,以中山杉1、9、27、46、68、102、118、149、302号等9个无性系为试验材料,通过苗期初选和在不同立地条件下栽植试验,筛选适应山东自然生态条件、防护性能优异、抗逆性强、综合性状优良的中山杉无性系,进一步丰富山东林木种质资源,加快山东省水系生态建设、洼地盐碱地造林和城镇绿化建设。     

冬枣夏枝嫁接新技术

冬枣是河北省名、特、稀、珍贵的红枣鲜食品种。其营养丰富、酥脆香甜,品质极优,引起各地果农的高度重视。但由于冬枣难以采用种子和扦插繁殖的办法繁殖苗木,嫁接又受季节、材料等因素的严重限制,极大地制约了冬枣的发展速度。自１９９７年以来,沧县金丝小枣良繁场,...     

禽流感病毒、新城疫病毒、猪瘟病毒和口蹄疫病毒多联RT-PCR诊断技术的建立

选择禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒（NDV)、猪瘟病毒(CSFV)和口蹄疫病毒(FMDV)基因组序列高保守区，按照多联PCR引物的设计要求，利用DNAsis计算机软件设计并合成了4对特异性扩增引物，扩增片段大小分别为470、320、200和140bp。以AIV、NDV、CSFV和FMDV的培养物提取RNA并反转录，进行RT-PCR特异性扩增。结果表明，各单项RT-PCR扩增产物与设计的4对引物之间的序列大小一致。在分别建立了各病毒单项RT-PCR及AIV与NDV、CSFV与FMDV二联RT-PCR的基础上，进一步优化各种多联PCR扩增条件，成功建立了上述4种病毒的四联RT-PCR技术。经特异性和灵敏度实验证明，本方法具有高度的特异性和灵敏性，其灵敏度为10pg总RNA。在3h内即可完成样品的检测。     

鲁西毛白杨优良无性系的选育

将山东省林木良种普查选出的鲁西毛白扬优树无性繁殖，建立起无性系测定林，进行优中选优。经过10年的观测研究。结果表明；82033、82032号的材积生长量与对照(易县毛白扬)差异显著，分别超过对照29．1％和24．3％。且主要形质指标优良。抗病能力较强。可以作为鲁西地区的推广良种。     

人胰岛素基因杆状病毒表达载体的构建及其在Sf9细胞中的表达

对人胰岛素基因真核表达载体（pCMA／mINS）进行Xho I酶切，回收的含人胰岛素基因组基因的1608bp片段与线性化的杆状病载体pFast Bac I进行连接，获得重组载体pFast/mINS。将该重组载体转化DH10Bac感受态细菌，在体内进行重组，并经2次抗性与蓝白斑筛选，得到杆状病毒重组载体Bacmid/mINS。将该载体转染Sf9细胞，获得了重组杆状病毒，经Tricine-SDS-PAGE和Western-blotting检测，重组杆状病毒在Sf9细胞中的表达产物是胰岛素原，而细胞培养上清中未检测到胰岛素和胰岛素原。     

百病特灵可溶性粉治疗雏鸡大肠杆菌病的试验研究

选用杯碟琼脂扩散法和染菌动物药物治疗法,验证和评价新兽药百病特灵可溶性粉对鸡大肠杆菌的体外抗菌的体外抗菌效能和雏鸡大肠杆菌病的疗铲,结果证实,本药对此菌的抑菌圈直径均值,比对照药盐酸恩诺沙星大１．１６倍;饮服百病特灵可溶性粉水溶液的最适治疗浓度为３０～６ｍｇ．Ｌ＾－１,每天２次,给鸡饮服,连用３～５ｄ,对此病的治愈率均达１００％,相对增重率分别为１３８．９８％～１８０．６３％。比阳性对照组鸡死亡率     

丹麦的水貂养殖业现状

通过对丹麦水貂养殖业的历史、规模与经济效益以及饲养管理、繁殖、销售、人员培训和动物福利等进行阐述,指出了其目前存在的主要问题,并对未来的发展方向进行了展望。     

山东省苗木花卉产业发展战略探索

该文以加快山东省苗木花卉产业发展为目标,总结了山东省苗木花卉产业近年来取得的成绩,分析和归纳了苗木花卉产业的地位和作用,提出了搞好新形势下苗木花卉工作,加快产业发展的的对策。