李属坏死环斑病毒怀柔分离物CP基因的克隆、原核表达及其抗血清制备

本研究通过RT-PCR技术获得了包含李属坏死环斑病毒怀柔分离物CP蛋白基因的DNA片段,构建了针对pET29a载体的两种表达质粒;〖JP2〗转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导表达了带不同融合肽段的PNRSV1（25 ku）〖JP〗和PNRSV2（29 ku）融合蛋白。经过Ni NTA亲和柱与SDS PAGE分离纯化,获得大量表达融合蛋白,并免疫家兔制备了融合表达蛋白的特异性抗体。间接ELISA测定其效价分别为8×103和3.2×104。     

进境东盟水果货物携带细菌病害截获疫情分析

2011—2015年,全国各检验检疫口岸累计从东盟截获细菌745种次,其中包含货检336种次,旅检406种次,邮检3种次。分析了其中的货检货物携带细菌病害截获疫情,结果表明,疫情较为严重的年份为2015、2012和2011年,分别占36.61%、34.22%、16.07%。深圳口岸截获的细菌占全国总检出种次的95.83%;截获较多的种类有肠杆菌属(Enterobacter sp.),占50.89%)、芽孢杆菌属((Bacillus sp.),占27.68%)和金黄杆菌属((Chryseobacterium sp.),占11.31%),截获的检疫性细菌仅有1种次(芒果黑斑病菌(Xanthomonas campestris pv.mangiferaeindicae))。从来源国来看,来源于泰国和越南的水果截获种次居前位,其中以泰国榴莲和越南火龙果检出的细菌种次最多,均占总检出种次的40%。从水果种类来看,细菌疫情较为严重的水果有火龙果、榴莲和龙眼等;芒果中检出的细菌最少,仅占总检出种次的0.29%。总体各口岸细菌检出率较低,特别是检疫性的细菌病害截获仅有一次,相关口岸的细菌检测能力亟待加强...     

核酸环介导等温扩增技术及其在植物检疫中的应用

介绍核酸环介导等温扩增技术的基本原理、特点及应用前景.环介导等温扩增技术具有简单、快速、特异性强和扩增效率高等特点,目前可部分替代普通PCR,日后伴随着不断改进、完善和标准化,必将在植物检疫上有广阔的应用前景.     

用毕赤酵母表达李属坏死环斑病毒外壳蛋白基因及表达产物抗血清的制备与研究

用RT-PCR的方法克隆李属坏死环斑病毒的外壳蛋白(CP)基因,然后将其连接到pGEM-T载体上,得到pGEM-T-PNRSV重组载体,然后将其克隆到真核表达载体pPIC9K上,转化毕赤酵母GS115菌株后,在甲醇的诱导下表达外壳蛋白,表达产物经过SDS-PAGE及Western-blot分析,结果表明该病毒的CP基因在毕赤酵母中得到了高效表达,回收表达蛋白并免疫家兔,获得PNRSV特异性抗血清共计40mL,经过间接酶联免疫吸附法测定其效价为3.2×104,本研究利用基因克隆的方法来制备PNRSV抗血清,完全避免了用该病毒的繁殖来制备抗血清而导致该病毒扩散蔓延的风险。     

香蕉细菌性枯萎病菌荧光 LAMP 检测体系的建立

【目的】基于香蕉细菌性枯萎病病原(Ralstonia solanacearum)2号生理小种的特异保守引物和LAMP技术建立一种实时荧光定性检测方法,解决常规PCR定性检测特异性低、灵敏度低、耗时长等问题,实现在1 h内能进行准确高效的定性检测,为加强该病害防控检测和检疫工作提供技术支持。【方法】确定被测基因靶序列,利用Primer软件设计两对内外引物。由两对引物、具有链置换特性的DNA聚合酶、模板DNA、甜菜碱、Mg_2SO_4、反应缓冲液、荧光染料等组成LAMP反应体系,采用不必在反应完开管盖检测的实时荧光LAMP方法,针对该方法对于样品DNA定性检测的灵敏度、特异性及可重复性进行试验。【结果】设计的引物能顺利扩增目标基因,实时荧光LAMP检测体系对于香蕉细菌性枯萎病病原生理2号小种有良好的灵敏度、特异性,该方法可重复性强,灵敏度比普通PCR高10倍以上。【结论】香蕉细菌性枯萎病菌荧光LAMP检测体系检测特异性强、灵敏度高、耗时短、不易污染,效果较好。     

中山口岸从芒果中检出番石榴实蝇

2008年7月,中山出入境检验检疫局中港办旅检科工作人员从一位来自香港的旅客携带物中截获1批芒果,通过对芒果的检查培养,检出属于国家禁止入境的危险性害虫--番石榴实蝇 Bactrocera correcta (Bezzi),并经广东出入境检验检疫局复核确认.     

砂糖橘果实品质变化规律研究

为了解砂糖橘果实生长发育期品质的变化规律，在高产果园选取4年和8年2种树龄的砂糖橘树，对2种树龄果实中的可溶性固形物、总糖、总酸和维生素C的含量进行了研究。结果表明，在果实生长发育期，随着生长期的延长，果实中可溶性固形物、总糖和糖/酸不断增加，而总酸和V_C含量不断减少。果实成熟期时，4年树和8年树果实中可溶性固形物含量分别为13.15%、12.58%,总糖含量分别为12.02%、11.45%,糖/酸分别为27.72、23.10,总酸含量分别为0.43%、0.50%,维生素C含量分别为164.9、171.3 mg/kg。该研究为探讨砂糖橘优质的原因奠定基础。