蓝莓休克病毒IC-RT-nested PCR检测技术

【目的】蓝莓休克病毒(Blueberry shock virus,BlShV)是蓝莓上主要病毒之一,侵染蓝莓后能够对其产量造成严重影响。研究旨在建立用于BlShV快速检测的IC-RT-nested PCR技术,为该病毒的检测鉴定提供可靠的技术手段。【方法】根据GenBank已报道的BlShV基因序列,设计一对外侧引物(BlShV-F/BlShV-R)和一对内侧引物(BlShV-1/BlShV-2),以感染BlShV的蓝莓病叶为材料,利用免疫IC-RT-PCR(免疫捕获RT-PCR)和nested PCR(巢式PCR)建立BlShV的IC-RT-nested PCR检测技术;分别以BlShV、蓝莓焦枯病毒(Blueberry scorch virus,BlScV)、蓝莓带化病毒(Blueberry shoestring virus,BSSV)、蓝莓叶斑驳病毒(Blueberry leaf mottle virus,BLMoV)、烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)、番茄环斑病毒(Tomato ringspot virus,ToRSV)和健康蓝莓叶片为对象,测定该检测技术的特异性;将BlShV第1轮、第2轮PCR产物分别回收纯化后连接到pMD18-T载体,连接产物转化大肠杆菌DH5α后筛选阳性克隆,进行测序和序列比对验证该检测技术的准确性;将感染BlShV的蓝莓病叶提取液用健康蓝莓叶片提取液进行10倍梯度稀释,测定该检测技术的灵敏度,并与DAS-ELISA方法相比较;利用建立的IC-RT-nested PCR对收集的中国福建、吉林、辽宁地区蓝莓叶片样品(53份)和进境美国蓝莓叶片(15份)进行实际检测,并对上述样品采用普通RT-PCR方法进行验证。【结果】建立的IC-RT-nested PCR方法成功从感染BlShV病叶提取液第1轮PCR扩增出约746 bp大小的目的片段,第2轮PCR扩增出约486 bp大小的目的片段,未从健康蓝莓叶片提取液和空白对照扩增出目的片段;特异性测定结果表明,IC-RT-nested PCR具有良好的特异性,仅从感染BlShV蓝莓病叶提取液第1轮、第2轮PCR分别扩增到目的片段,而从BlScV、BSSV、BLMoV、TRSV、ToRSV和健康蓝莓叶片提取液第1轮、第2轮均未扩增到相应的目的片段;序列分析结果显示,感染BlShV蓝莓病叶提取液第1轮、第2轮PCR产物的序列同预期大小完全一致,分别为746、486 bp,将获得的两轮PCR产物序列与GenBank数据库中的BlShV基因序列进行比对,结果显示第1轮、第2轮PCR产物的序列与已报道的BlShV核苷酸序列一致性均达99%,证实两轮PCR产物均为BlShV特异性产物,进一步验证了扩增结果的准确性;灵敏度测定结果表明,IC-RT-nested PCR的第1轮PCR能够检测到稀释102倍的BlShV病叶提取液,灵敏度与DAS-ELISA相当,经过第2轮PCR,灵敏度提高100倍,能够检测到稀释104倍的BlShV病叶提取液;蓝莓样品IC-RT-nested PCR测定结果显示,2份来自于美国的蓝莓叶片样品扩增出大小约486 bp的目的片段,BlShV检出率为13.3%,而中国福建、吉林、辽宁地区蓝莓叶片样品上均未扩增出相应的目的片段,未检测到BlShV,该检测结果与普通RT-PCR验证结果完全相符,表明建立的IC-RT-nested PCR能够用于蓝莓样品的实际检测。【结论】建立的IC-RT-nested PCR具有快速、特异、准确和灵敏的优点,适合于田间和进出境口岸蓝莓样品上BlShV的检测鉴定。     

长江中下游地区主推小麦品种的硒强化潜力研究

为了筛选适宜叶面喷施硒强化的理想品种,对63个近年来长江中下游主推小麦品种（系）进行叶面喷施硒酸钠,强化浓度为300 mg Se/L（Se300）,利用离子发射光谱-原子吸收仪测定了小麦籽粒中Se、Cu、Fe、Mn、Zn、K、Mg、K和S含量。结果显示,叶面喷施硒酸钠可以提高小麦籽粒中的硒含量,总硒含量平均值由对照组的2.13±0.73 mg/kg提高到9.13±3.86 mg/kg,但增幅因品种而异;籽粒中不同矿物质元素对叶面喷施硒酸钠的响应不同,硒降低了籽粒中Cu、Fe、K、Mg和S的含量,但提高了锌的含量,对Mn和Ca元素含量没有影响。综合比较显示江麦816是长江中下游主要推广品种中硒强化潜力较大的品种（系）之一。     

红脂大小蠹发生期的物候观察

对红脂大小蠹的发生期与林间植物物候变化的规律进行了系统调查研究,编制出了红脂大小蠹发生期的物候关系表,以期为红脂大小蠹的测报防治提供依据。     

小麦拟坏死营养症状基因与赤霉病扩展抗性的分析

以宁7840和韩国品种Chokwang衍生的F10代重组近交系(RIL)群体为材料,研究拟坏死营养性症状与小麦赤霉病扩展抗性的关系。结果表明:拟坏死症状与赤霉病扩展抗性显著相关,具有坏死营养症状的RIL其病小穗率(PSS)显著低于没有该性状的株系。位于3BS上的Fhb1能够解释21%的表型变异,而拟坏死营养症状(Lesion mi mic,LM)基因对PSS的影响基本独立于Fhb1,二者没有显著的互作关系。这表明LM性状的表达具有一因多效作用,能够介导小麦的广谱抗性,对活体营养性病原菌引起的病害(如小麦锈病)和腐生营养性病原菌引起的赤霉病均有抑制作用,这类广谱基因在育种中可能具有重要的应用价值。     

龙眼ISSR-PCR反应体系的优化及指纹图谱初探

以立冬本龙眼DNA为模板研究了龙眼ISSR-PCR反应体系的主要成分对ISSR扩增结果的影响,并探讨了构建龙眼指纹图谱的可行性。结果表明:在25μL的PCR反应体系中Mg2 的最适浓度为2.0 mmol.L-1;dNTP最适浓度为0.2 mmol.L-1;引物的最适浓度为0.7μmol.L-1;模板20 ng;Taq DNA聚合酶用量为1.5 U。利用优化后的反应体系对福建不同地区龙眼基因型进行了ISSR扩增,扩增产物在250 bp~2 kb;利用丰富的多态性DNA谱带构建了12个基因型龙眼的指纹图谱。     

中牟县大蒜生产机械化发展中的问题

中牟县是河南省大蒜生产的重要基地,近几年来已逐步成为中牟的经济支柱产业之一,是农民增收和经济发展的重要推动力量。中牟县在大蒜生产方面虽然取得了一些骄人的成绩,但是也存在很多问题,尤其是在大蒜生产机械的推广上,更是困难重重。通过对中牟大蒜生产的调研和思考,探讨了大蒜生产机械化发展中存在的问题及影响因素。     

小麦地方品种黄方柱中赤霉病主效抗性位点 Fhb1的精细定位

位于小麦3BS染色体上的赤霉病抗性主效基因Fhb1的效应较大而且比较稳定,是培育抗赤霉病品种最常用和最可靠的位点。我国小麦地方品种黄方柱（HFZ）高抗赤霉病且在3BS染色体上携带Fhb1基因。本研究对HFZ/Wheaton重组自交系（RIL）群体的Fhb1位点进行分子标记检测,筛选到两个杂合子株系,并对这两个杂合子株系连续自交3代,衍生出2个次级分离群体（L30和L112）,将这两个次级分离群体在扬州大学农学院试验田种植,并在扬花期进行单花滴注接种鉴定赤霉病,调查这两个群体中各株系的病小穗数、病小穗率、病粒数和病粒率。结果表明,L30和L112两个群体的病小穗数和病小穗率均显著正相关,病粒数和病粒率均显著正相关。同时依据小麦3B染色体参考序列开发了7个新的多态性标记,分别是 X1550、X2214、X2300、X2357、X2455、X2460和X2467。用这些多态性分子标记进行基因型检测,在目标位点发现5个交换株系,根据基因型和病小穗率,进一步将Fhb1定位在分子标记 X2214与 X2357之间,在ctg0954b上这两个分子标记之间的物理距离约为143 kb,NCBI预测该区间有3个候选基因,但是FGENESH在相同区段预测了29个基因,说明目标区段所具有的基因数目很可能多于3个,但少于29个。     

琯溪蜜柚黄龙病病原的克隆及序列分析

Guan溪蜜油是中国大陆柚类中的优质品种。近年来，在福建省的产地发现Guan溪蜜油叶片表现斑驳的病树，其叶片斑驳与柑桔黄龙病的叶片病状十分相似。据实验结果证明：该病能通过病梢嫁接传染到柚和柑桔的健苗；在电镜下观察到病株韧皮部寄生着大量BLOs，其形态和构造均与柑桔黄龙病病原（Liberobacter asiaticum)相似，经PCR扩增与Southern Blot分子杂交测定，表明该病原DNA PCR产物与柑桔黄龙病病原PCR产物之间具有很高的同源性。初步认为该病很可能是柑桔黄龙病引起的。为了进一步明确该病与柑桔黄龙病的关系，对病原DNA片段进行扩增、克隆和序列分析，并与柑桔黄龙病病基因相应序列进行比较，结果表明该病原与亚洲柑桔黄龙病病原（Lasiaticum）相应基因序列的同源率达94．2％，而与非洲柑桔黄龙病病原（L.africa num)的同源率仅为75．0％。进一步证明Guan溪蜜油叶片斑驳是柑桔黄龙病引起的，其病原是L.asiaticum中的一个成员。     

在循环养殖系统中不同溶氧量对虹鳟幼鱼代谢水平的影响

在循环养殖系统中设置四种溶氧水平,分别为7.05、8.82、11.84和15.80 mg/L,其中8.82 mg/L为对照组,对虹鳟幼鱼（体长13.0-18.5 cm）的代谢水平及生长率进行了研究。结果表明,饲养30 d后7.05mg/L的低溶氧使虹鳟幼鱼耗氧率和排氨率下降,11.84和15.80 mg/L溶氧下饲养的鱼耗氧率明显增加,15.80 mg/L使鱼的排氨率显著高于对照组。并且11.84和15.80 mg/L组虹鳟幼鱼在24 h内都具有高的代谢水平。随着溶氧量提高,虹鳟幼鱼的增重率、特定生长率和饲料转化率均随之升高,表现出生长指标的明显变化。     

超声测定右心室射血分数对肺切除术危险性的评价

目的：探讨术前右心室射血分数（ Ｒ Ｖ Ｅ Ｆ）值与术后并发症的关系以及肺切除术对 Ｒ Ｖ Ｅ Ｆ的影响。方法：应用超声心动图对１２７ 例接受肺切除术患者行术前 Ｒ Ｖ Ｅ Ｆ测定,并对其中６１ 例于术后３ 周再测 Ｒ Ｖ Ｅ Ｆ。结果：有并发症组的术前 Ｒ Ｖ Ｅ Ｆ较无并发症组低,差异有显著性（ Ｐ＜ ０．０１）;术前 Ｒ Ｖ Ｅ Ｆ＜ ４０％ 组的术后并发症发生率较 Ｒ Ｖ Ｅ Ｆ≥４０％ 组者高（ Ｐ＜ ０．０１）;术后 Ｒ Ｖ Ｅ Ｆ较术前明显减少（ Ｐ＜ ０．０１）。用术前 Ｒ Ｖ Ｅ Ｆ４０％ 为参数评价肺切除术危险性的阳性符合率为７９．８％ ,阴性符合率为８８．８％ 。结论：术前 Ｒ Ｖ Ｅ Ｆ值低则术后并发症发生率高,建议将术前 Ｒ Ｖ Ｅ Ｆ列为肺切除术危险性的评价指标之一。