松瘿小卷蛾发生与林分因子的关系研究

[目的]了解松瘿小卷蛾（Cydia zebeana Ratzebury）发生与林分因子的关系,为控制森林主要病虫危害和提高森林健康提供参考.[方法]通过分析大兴安岭地区93个松瘿小卷蛾受灾小班相关数据研究了松瘿小卷蛾发生与林分因子之间的关系.[结果]主要受灾海拔区间为400 ～630 m,受灾比较严重的3种林型为兴安杜鹃兴安落叶松林、兴安杜鹃白桦林、坡改落叶松林,发病小班数共65个,占发病总数的69.89％.南坡发病数是北坡的2.00倍,郁闭度发病区间相对集中,郁闭度0.40 ～0.70占所有发病总数的87.10％,人工林发病率是天然林发病率的3.84倍,发病林胸径范围主要集中在0～ 16 cm,占受灾林地的93.55％,各胸径组间感病指数差异不显著.虫口密度与发病林地的乔木平均树高、乔木平均胸径均呈显著相关.[结论]为大兴安岭地区森林健康维护与提高提供了技术支撑.     

SYBR Green Ⅰ法洋虫β-actin基因实时荧光定量RT-PCR体系的建立

为了建立洋虫β-actin基因实时荧光定量RT-PCR体系,本实验采用MJ Research OpticonTM2型实时荧光定量PCR仪,利用SYBR Green Ⅰ染料法,根据GenBank上其他昆虫β-actin基因的保守序列设计引物,对PCR退火温度、引物浓度、模板浓度等各反应因子进行优化,结合扩增曲线和熔解曲线进行分析.结果显示,在20μL体系下,当2×SYBRR Premix Ex TaqTM为10μL时,引物和cDNA模板的最佳浓度分别为1 μmol/L和50 ng/μL.最佳PCR反应程序为:94℃预变性30 s,44个循环包括94℃变性10s,45℃退火30 s,72℃延伸40 s,最后加做熔解曲线82℃1 s.结果表明,在洋虫不同发育时期β-actin基因表达水平基本稳定,因此β-actin基因可以作为洋虫实时荧光定量RT-PCR的内参基因.本研究成功建立了2-△△CT相对定量法的洋虫β-actin基因实时荧光定量RT-PCR体系,并分析了优化PCR反应体系的重要性,建立的洋虫β-actin基因荧光定量RT-PCR方法简便、特异性强,该体系的建立可用于洋虫蜕皮相关基因表达差异的深入研究.     

双斑长跗萤叶甲对几种植物挥发物的触角电位和行为反应

采用触角电位(EAG)、"Y"型嗅觉仪和风洞的方法研究双斑长跗萤叶甲成虫对14种植物挥发物的电生理和行为反应,筛选出对双斑长跗萤叶甲有效的植物挥发物,为该害虫的种群监测和防控提供新技术。研究结果表明:稀释102、103倍的薄荷精油和1 mol.L-1的香叶醇能引发双斑长跗萤叶甲强烈的EAG反应(P<0.01),且嗅觉测试表明,薄荷精油(稀释102倍)对双斑长跗萤叶甲的最大驱避率为(74±5.47)%,香叶醇(1 mol.L-1)对双斑长跗萤叶甲的最大引诱率为(70±10.00)%。风洞行为趋性研究表明:稀释102倍的薄荷精油对双斑长跗萤叶甲的最大驱避率为(72±8.37)%,而1 mol.L-1的香叶醇对双斑长跗萤叶甲的最佳引诱率为(66±8.94)%。     

5种饲料对洋虫生长发育的影响

常温条件下,采用大米粉、大豆粉、面粉、爆米花、中草药5种饲料饲喂洋虫,观察了洋虫的卵、幼虫、蛹、成虫的形态特征、取食习惯、活跃程度等生活习性,分析了5种饲料饲喂的洋虫幼虫化蛹后,饲料种类对蛹的发育历期、蛹重、成虫的体重等生理指标的影响,结果表明：5种饲料中蛹发育历期最长的为大豆粉饲料,发育历期最短的为大米粉饲料;用面粉和大米粉饲喂的幼虫化蛹后蛹最重;5种饲料下成虫体重由重到轻的顺序依次为：中草药＞爆米花＞面粉＞大米粉＞大豆粉。综合经济成本考虑,建议以爆米花为主要饲料,并混合适当的大米粉饲喂洋虫效果最佳。     

温度及饲料组分对洋虫生长发育的影响

洋虫（Martianus dermestoides Chevrolat）又名九龙虫,是一种重要的药用、饲用昆虫。对其生长环境和人工饲料的研究是实现洋虫规模化饲养的关键。笔者在恒温和常温饲养条件下,观察了不同饲料对洋虫幼虫、成虫的形态特征、活跃程度、取食习惯、生长周期、繁殖和生长动态等指标的影响。结果表明,温度和饲料2个因素中,饲料对洋虫生长发育影响最显著。谷物饲料可使洋虫生育周期缩短,性成熟期提前,2次产卵间隔时间变短,能在较短时间内完成其一生的产卵量;研究还发现,洋虫在温暖潮湿环境下更为活跃,寒冷、干燥的环境会使处于不同形态的洋虫生长缓慢、发育滞后。     

利用正交设计优化异色瓢虫ISSR-PCR反应体系

利用正交设计L16(45)对异色瓢虫(Harmonia axyridis Pallas) ISSR-PCR反应体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物)在4个水平上进行优化试验,试验结果用DPS软件进行分析,建立了异色瓢虫ISSR-PCR反应的最佳体系,即在20 μL体系中模板150 ng、引物0.5 μmol/L、dNTPs 0.15 mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5 U、Mg2+ 1.25 mmol/L.并对反应体系进行梯度退火试验,得到最佳退火温度为53.3 ℃.     

"基因工程"教学改革的思考

基因工程课程教学改革应从教学内容、手段和考核方式等方面入手,建立融入新知识、新观念的教学内容模式;充分运用多媒体和网络资源,改进教学方法等;科学安排实验内容,强化学生的动手能力和发挥学生的创造能力;采取多种考核方式,增强学生分析和解决问题的能力。     

油菜下胚轴农杆菌介导法转化影响因素探讨

利用甘蓝型油菜下胚轴为外植体，对油菜农杆菌介导转化中的主要因素进行了研究，并由此建立了油菜下胚轴农杆菌介导的遗传转化体系。研究发现，在农杆菌介导的油菜下胚轴转化中，较好的转化体系是：外植体在农杆菌侵染前进行3d的预培养。农杆菌的浸染浓度为OD600=0．2～0．4。共培养时的pH值为5．2。在转化后的分化培养基中附加30μmol／LAgNO3。     

Β-蜕皮激素对异色瓢虫羧酸酯酶基因表达及酶活性影响的初步研究

为了探明β-蜕皮激素对异色瓢虫的作用及其安全剂量,本研究利用实时定量PCR(RT-PCR)和比色法测定了异色瓢虫3龄幼虫施用不同浓度的β-蜕皮激素体内羧酸酯酶活性与基因表达情况.结果表明:用0.1、0.5、1 mg/L β-蜕皮激素处理异色瓢虫3龄幼虫,在处理后4～48 h内CarE mRNA水平和CarE比活力呈现先升高、保持正常水平或略下降、再升高、然后很快恢复正常的规律.到处理后的第48 h,处理组的CarE mRNA表达量和CarE比活力均恢复到正常水平.所以,认为在低于1 mg/L浓度下应用β-蜕皮激素控制害虫对异色瓢虫的3龄幼虫安全.而利用5 mg/L或10 mg/L的β-蜕皮激素处理异色瓢虫3龄幼虫,CarE mRNA表达量和CarE比活力均表现出长期的被抑制效应,特别是到处理24 h后,CarE mRNA表达量和CarE活性不仅未能恢复到正常水平,反而一直处于极低的水平.因此,认为这两个浓度对异色瓢虫3龄幼虫不安全.     

匍枝筋骨草悬浮培养生产蜕皮甾酮的研究

为得到生长迅速、生物量大、蜕皮甾酮含量高的匍枝筋骨草(Ajuga lobata D.Don)细胞系,从固体培养基选择、激素种类筛选出筋骨草颗粒状的胚性愈伤组织,再从培养基类型、激素配比和接种量3个方面优化悬浮培养体系。试验结果表明：添加0.4 mg/L 2,4-D的MS固体培养基可以诱导匍枝筋骨草组培苗的根段产生松散的颗粒状胚性愈伤。比较细胞系在WPM、MS、1/2MS 3种液体培养基中的生长状况,确定MS为最佳的悬浮培养基。2,4-D对细胞生长有显著影响,细胞生物量可达到添加NAA生物量的1.3倍;其与6-BA配比对筋骨草细胞的影响研究结果表明,随着6-BA的浓度增加,蜕皮甾酮的含量随之增加,其中,添加0.5 mg/L 6-BA的筋骨草细胞中蜕皮甾酮含量与不添加6-BA的对照相比,差异显著(P<0.05);添加1 mg/L 6-BA积累的蜕皮甾酮与对照组差异极显著(P<0.01)。因此,0.4 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA为悬浮培养的最优激素配比,培养7天后细胞生物量净增长生物量可达到(4.3652±1.0739) g,蜕皮甾酮含量可达到(4.5692±0.2044) mg/g,所形成的细胞系更均一且繁殖速率最快。接种量为15%时,细胞长势好,鲜重增殖倍数达3.45,第7天细胞生长速率达1.109 g/d,为最适的接种量。试验建立了生长迅速、悬浮液均一的匍枝筋骨草细胞悬浮培养体系,适于蜕皮甾酮的大量生产。