山东省一例山羊伪狂犬病的病原分离鉴定

2017年4月,山东省某羊场饲养的山羊发生疑似伪狂犬病疫情。为确诊引发疫情的病原,采集死亡山羊组织样品,匀浆处理后接种家兔,并进行病原分离、PCR鉴定、效价测定、电镜观察及主要毒力基因测序分析。结果显示:家兔接种病料上清液后出现奇痒、麻痹,最后死亡;Marc145细胞接种病例样品后,产生变亮、变大、破裂,呈"包涵体"样等PRV特征性细胞病变,细胞分离物伪狂犬病病毒(PRV)g E PCR检测结果为阳性,病毒效价可达10-7.50 TCID50/0.1 m L,电镜观察可见病毒粒子呈圆形,有囊膜,直径约150 nm,将其命名为SDPD-17株。测序发现该毒株g E糖蛋白48、497位各插入了1个天冬氨酸,有12个氨基酸位点发生点突变;g C蛋白氨基酸序列64～70位出现了7个氨基酸(AASTPAA)插入;TK基因无碱基插入或缺失。分离鉴定结果证实,该病例由PRV野毒感染所致。     

湖南省猪瘟流行病学调查和分析

为了解猪瘟在湖南的流行情况,2004年5月至2004年9月,从湖南11个地市共收集了54个猪场的疑似猪瘟猪病料及其背景资料,其中发生猪瘟的猪场21个。通过对这些病料检测、背景资料的统计和分析,总结出了湖南目前猪瘟流行的状况:临床症状典型的急性猪瘟和临床症状不典型的慢性猪瘟并存,多与胸膜肺炎放线杆菌、Ⅱ型圆环病毒、蓝耳病病毒、伪狂犬病毒混合感染;发病猪群以断奶以后的保育仔猪为主,但育肥猪和肥猪也有发病,占总发病率的28·6%;从外来猪场引进猪混群后发病率比自繁自养高;该病主要以猪场为单位呈点状散发,未有大规模流行。     

家禽和生猪健康促进策略研究

近年来,我国家禽和生猪产业发展迅速,家禽存栏占全球的28%,其中水禽占80%左右;生猪存栏量约占全球总量的50%,猪肉产量约占全球总量的46%。促进家禽和生猪健康,对保障畜牧业持续发展,提高人民群众生活水平至关重要。20世纪初以来,美国启动了家禽改良计划和猪瘟等猪病消灭计划,家禽和生猪健康水平不断提高,对我国具有重要借鉴意义。本课题旨在借鉴美国家禽和生猪疫病控制计划,结合我国畜禽疫病防控现状,提出促进我国家禽和生猪健康的有关疫病防控策略。     

猪2型圆环病毒ORF2基因的克隆及原核表达

采用PCR方法从已构建好的猪圆环病毒2型(PCV2)全基因重组质粒(pMD18-T-PCV2)中扩增出大小为579bp的ORF2基因,克隆到表达载体pET-32a,经IPTG诱导,成功表达了ORF2基因编码的结构蛋白。表达的重组蛋白为融合蛋白,分子量40Ku,表达量20%左右。经Western-blot检测,重组蛋白可被PCV2阳性血清识别。     

一例犬尿路结石病的诊断与手术治疗

尿石症是指尿路中无机盐类结晶的凝结物刺激尿路黏膜而引起出血、炎症和阻塞的一种泌尿器官疾病。泌尿系统结石是一种常发病,临床上常见的为肾结石、膀胱结石和尿道结石,最常见的为尿道结石。当发生尿道结石时,尿液不能正常排出体外而引起自体中毒,严重时膀胱破裂,引起腹膜炎,可很快引起动物死亡。下面以一例犬的尿道结石为例,来介绍犬尿道结石的诊断与手术治疗方法。     

猪源冠状病毒监测简报

目前,已知感染猪群的冠状病毒有6种,分别是猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)、猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)和猪δ冠状病毒(PDCoV)。在冠状病毒科α、β、γ、δ等4个属中,PEDV、TGEV、PRCV、SADS-CoV均为α冠状病毒,PHEV为β冠状病毒,PDCoV为δ冠状病毒。PRCV在临床上引发仔猪呼吸道症状,PHEV感染会造成仔猪呕吐和神经症状,其他4种病毒均可引起猪群腹泻。中国动物卫生与流行病学中心对2011年以来收集自全国16个省份的2 915份临床腹泻猪群样品(肠道、粪便等)进行了PEDV、TGEV检测,检出PEDV阳性1 223份、TGEV阳性109份,PEDV、TGEV检出率分别为41.96%、3.74%;对2014年以来收集自14个省份的12 430份临床健康猪组织样品(淋巴结、扁桃体等)进行了PEDV检测,检出阳性325份,检出率为2.61%。针对引发新型冠状病毒肺炎的病原2019新型冠状病毒(2019-nCoV),对2018—2019年收集自15个省份的2 658份生猪组织样品开展了追溯性检测,结果均为阴性。对2019-nCoV与猪源冠状病毒的亲缘关系进行了分析。基于全基因组的遗传进化分析表明:2019-nCoV与同为β冠状病毒属的PHEV核苷酸同源性仅为54%,与α、δ属猪源冠状病毒亲缘关系更远。基于以上数据与分析,可初步排除2019-nCoV来源于已知猪源冠状病毒的可能性。     

猪流行性腹泻新毒株的分离鉴定和致病性研究

为探明2011年我国猪群仔猪腹泻的病因,采用巢式RT-PCR方法对河南和辽宁省2个规模猪场采集43份出现腹泻的粪便进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和轮状病毒（PRoV）的检测,结果表明：43份腹泻样品均为PEDV,没有检测出TGEV和PRoV。对扩增的PEDV进行测序和分析显示,这些PEDV流行毒株均属于基因G2.3亚型,彼此之间的同源性高达99.2%～100%,与2011年韩国和2008年泰国流行的PEDV毒株同属于一个进化分支。将其中3份病料在Vero细胞传代后接种2日龄仔猪,结果发现接种后13～57h内仔猪全部死亡,接种仔猪呈现典型的腹泻症状和病理变化特征,提示了这些PEDV流行毒株具有较强的致病性。     

我国五省区部分猪场高致病性猪蓝耳病毒感染情况检测与分析

对2008年-2009年我国五省区发病猪场235份、屠宰场的218份样品进行了高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)RT-PCR检测,挑选具有代表性的HP-PRRSV阳性样品进行HP-PRRSV ORF5基因扩增、测序及分析.结果表明,这五个省区发病场蓝耳病的检出率平均74.6%.屠宰场的检出率平均44%,混合感染主要以二重感染为主,且发病场较屠宰场严重.对获得的13株HP-PRRSV ORF5进行测序分析,发现序列长度均为603 bp,未见缺失或插入,仅在9 aa～29 aa存在点突变;序列比较发现,与普通株标准序列VR-2332株核苷酸同源性达85.9%～87.2%;与高致病性毒株的同源性JXA1-06核苷酸同源性达96.0%～99.0%.而其推导氨基酸序列与普通型、高致病性毒株的同源性分别为87.1%～88.1%和97.5%～98.0%.从遗传进化以及变异情况看,获得的PRRSV ORF5序列均为与JXA1类似的高致病性PRRSV序列,与JXA1和HB-1同属美洲型中的一个亚群.     

我国部分猪场猪圆环病毒3型流行病学调查

猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV-3)是近2年从猪体内新检测到的病原。为了解我国猪群的PCV-3感染现状、临床症状和病变特征,在分析流行病学资料基础上,运用荧光PCR技术,对部分猪场采集的80份病料进行PCV-3检测。结果表明,我国至少已有山东、河南、福建、广西等4省份的猪群存在PCV-3感染;发病样品中的PCV-3个体感染率为27.50%,表明我国部分猪群中PCV-3感染较普遍;腹泻样品的感染率最高,为34.09%,而呼吸道症状、流产和高热样品的感染率分别为27.27%、22.22%和14.29%,提示腹泻可能与PCV-3感染的相关性最强,而腹泻样品可能是检测PCV-3的较佳采样器官;不同生长阶段仔猪的感染率不同,保育仔猪感染率最高(40.00%),其次是流产胎儿(20.00%),哺乳仔猪最低(12.50%)。这些结果为PCV-3的采样、监测和防控提供了依据。     

广西一株流行猪瘟毒株全基因序列的克隆和序列分析

本实验参照已发表的猪瘟病毒(CSFV)石门株、HCLV株、Paderborn株、GXWZ02株等的基因组序列设计合成了11对引物,通过RT-PCR方法从广西一株流行猪瘟病料中直接扩增得到了11个片段,将所得片段克隆至PGEM-Teasy载体上,经过测序、拼接,最终得到广西猪瘟GX54基因组全序列。序列分析表明,GX54基因组全长12296个碱基。与国内外已发表的10株猪瘟病毒系列进行同源性分析,结果表明,与各株核苷酸同源性分别为85.1%、85.0%、85.1%、84.7%、84.8%、94.4%、84.3%、94.3%、84.8%、84.5%。系统发育树分析发现,所比较的11个毒株可以分为2群,1群包括GX54,GXWZ02和Paderborn株,其余毒株属于2群,其中GX54株与GXWZ02株关系最近。