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菌寄生真菌的几丁质酶有很强的降解几丁质能力,在控制植物病害方面起着重要的作用.为克隆和研究菌寄生真菌黄蓝状菌(Talaromyces flavus)几丁质酶基因(tfchi1),本研究根据真菌几丁质酶基因的保守序列设计扩增基因中间片段的简并引物,采用RT-PCR、3'-RACE及5+-TAIL的方法获得了该基因的DNA和mRNA序列(GenBank:GU361769,GU361770).tfchi1长为2 561 bp,具有6个内含子,长度分别为129、78、68、65、53和59 bp,包含1 194bp的ORF,编码一个由397个氨基酸组成的蛋白.推导的tfchi1氨基酸序列以及蛋白质结构生物信息学分析表明,该蛋白具有典型的几丁质酶催化区保守序列SXGGW和DGXDXDWE,属于糖苷水解酶18家族几丁质酶,与柄篮状菌(Talaromyces stipitatus ATCC 10500)几丁质酶(XP_002480365)氨基酸序列同源性为96%,分子量为43.47kD,等电点为4.97.该蛋白无信号肽序列,有15个潜在的N-糖基化位点,Tfchi1的二级结构以无规卷曲和α-螺旋为蛋白的主要结构元件,三级结构中有(α/β)8的圆桶形结构.tfchi1转化毕赤酵母(Pichia pastoris )GS 115,酵母工程菌可分泌具几丁质酶活性的表达产物,重组蛋白的分子量与理论值相符.结果说明,本研究已从T.flavus中正确克隆了1个糖苷水解酶18家族几丁质酶基因. 相似文献
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HarpinXoo是水稻白叶枯病菌分泌的蛋白质,用harpinXoo注射烟草后20 h,可表现过敏性细胞死亡(hypersensitive cell death, HCD)。对harpinXoo诱导的烟草叶片用DNA特异染料(DAPI)染色后经荧光显微镜观察发现,烟草细胞在harpinXoo诱导后不同时间表现明显的染色质浓缩;对诱导后的烟草DNA经2%琼脂糖凝胶电泳发现,诱导后12 h烟草DNA开始出现弥散的条带,24 h后弥散的小片段大量增加;定量RT-PCR检测发现,harpinXoo诱导的烟草HCD早期即有标志基因hin1和hsr203J的诱导表达。这些结果表明,harpinXoo诱导的烟草细胞死亡,是植物的一种主动反应,具有细胞编程死亡的重要特征。 相似文献
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SCN侵染对不同大豆品种根系氨基酸/低分子肽类分泌物的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
利用聚酰胺薄膜层析技术研究了不同抗感SCN的大豆品种根系分泌物中氨基酸/低分子肽类物质。结果表明:大豆根分泌物中含有多种氨基酸类物质及谷胱甘肽等低分子肽类物质;大豆胞囊线虫侵染后, 大豆根的分泌活动增强, 根分泌物中氨基酸/低分子肽类物质增多;苗期大豆根分泌物中氨基酸/低分子肽类物质的种类和含量随苗龄有不同程度的变化, 运用SPSS软件对层析图谱进行聚类和相似性分析, 结果为出苗5和11 d, 各个品种根分泌物层析图谱差异显著, 其中Franklin和辽豆10的图谱相似, 5和11 d时, r分别为0.6683**和0.7581**(P=0.01), 且二者均为苗期线虫侵入型品种。因此, 以Franklin或辽豆10根分泌物层析图谱荧光点作参照, 聚酰胺薄膜层析法可检测大豆苗期是否抗线虫侵入。 相似文献
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串珠镰刀菌细胞壁多糖激活寄生菌纤细齿梗孢的孢子萌发 总被引:2,自引:0,他引:2
利用碱抽提法从串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)菌丝细胞壁得到多糖粗提物。该多糖提取物可以激活寄生于串珠镰刀菌上的活体寄生真菌纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)的孢子萌发,多糖浓度为0.2 mg/m L时,萌发率达80.5%。纤细齿梗孢的孢子仅在存在该多糖提取物的条件下才能萌发,在马铃薯-葡萄糖或葡萄糖-酵母液体培养基上不能萌发,一些糖、氨基酸、无机盐、维生素不能促使其萌发,光也不影响萌发。纤细齿梗孢孢子萌发最适p H是7.0,最适温度25℃。结果表明,串珠镰刀菌菌丝细胞壁多糖可能在激活纤细齿梗孢孢子萌发中起重要作用。 相似文献
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