博落回叶肉组织原生质体的分离条件筛选

博落回(Macleaya cordata)是一种罂粟科博落回属的多年生草本植物,其体内的血根碱(sanguinarine,SAN)具有抗炎、调控肠道菌群和促进动物生长的作用,因此长期以此作为饲用抗生素的天然源替代品在全世界70个国家和地区广泛销售。随着全世界越来越多的国家限用甚至禁止饲用抗生素,博落回资源的需求逐年增加。因此,通过育种等方法来提高博落回中血根碱的含量具有十分重要的意义。而利用原生质体技术进行品种改良是一个快速高效的方法,其中制备原生质体是第一步。本研究以博落回无菌苗叶片为材料,进行了原生质体分离和纯化。在一定条件下,通过比较不同的酶解渗透压、温度、时间和pH值,得到最适甘露醇浓度为0.6 mol/L,最适温度为30℃,最适时间为6 h,最适酶液pH值为5.8,在该条件下的产量可达到6.03×10^5个/mL,活力为87.3%。该研究为未来博落回的种质资源创新提供了前期研究依据。     

7种花茶中微量元素的研究

[目的]为花茶的生产、流通和进一步开发利用等环节提供试验基础和科学依据。[方法]以康乃馨、黄山贡菊、金银花、白菊花、茉莉花、玫瑰花、七彩菊7种市售花茶为原料,采用电感耦合等离子体发射光谱法（ICP-AES）测定待测样品中Pb、Cu、Cr、Cd、As等微量元素的含量。[结果]检测花茶样品中Cu、Cr、Cd 3种金属元素含量均未超标;金银花和茉莉花茶中Pb含量比标准偏高;康乃馨、黄山贡菊、玫瑰花和七彩菊花茶中As含量存在超标问题;白菊花茶中所有微量元素均未超标,适宜饮用。该检测方法的加标回收率为90.43%-99.40%,相对标准偏差为0.49%-3.02%,具有良好的精密度和准确度。[结论]为花茶的质量控制和花茶饮品的合理开发利用提供了重要的依据。     

柿果实多酚含量变化规律研究

系统地研究了湖南省主要柿品种果实的生长发育过程和多酚种类含量变化规律.结果表明:柿果实生长发育过程呈双S曲线;涩柿和甜柿各时期总酚的变化趋势基本一致,但涩柿的总酚含量比甜柿高,且涩柿多酚的下降速度慢于甜柿;以柿果实多酚的利用价值而言,9月上旬采集本地品种柿果实深加工比较合适,冷藏保存,时间不宜超过7 d.     

如何保证中成药饲料添加剂的作用效果并减少其毒副作用?

饲料中添加抗生素具有吸收快、生物利用度高、见效快的特点,但抗生素的残留又会影响动物健康和畜产品安全,而中成药作为饲料添加剂如何保证具有相同的效果?另外,在使用过程中应该注意哪些细节,才能够减少中成药的毒副作用?近年来,抗生素滥用导致的各种危害,如不良反应、过敏反应、细菌耐药、菌群失调以及畜产品安全等问题,日益受到人们关注。开发一些新型的、多功能的、无残留、毒副作用小的可替代抗生素饲料添加剂已成为现代养殖业健康发展的必然需     

博落回抗生素敏感度筛选与植物表达载体构建

采用不同浓度抗生素对博落回组培苗叶片外植体处理,并对比不同浓度的卡那霉素、潮霉素、头孢和特美汀的筛选效果。结果表明,卡那霉素比潮霉素更适合用于博落回外植体的筛选,其最适宜浓度为40 mg/m L。特美汀比头孢更适合用于农杆菌的抑制,其最适宜浓度为400 mg/m L。除此以外,还利用In-Fusion技术将线性载体与博落回BBE基因片段连接,测序结果与预期序列一致,表明成功构建了p CAMBIAD-BBE植物表达载体。该工作为优化博落回遗传转化体系和构建过表达博落回植株提供研究依据。     

博落回愈伤抗除草剂Bar基因的转化以及抗性功能的检测

本研究成功建立了一个全新的以博落回愈伤为外植体的遗传转化体系。该遗传体系将抗草丁膦的Bar基因整合到pcambia2301质粒,构建植物载体,通过农杆菌介导转染博落回愈伤,选用Bar基因为筛选标记,采用PPT进行筛选,对转染的愈伤和组培苗用PCR、RT-PCR、GUS染色等方法验证为阳性,获得了抗除草剂的博落回植株。该遗传体系相比以叶片为外植体、抗生素为筛选标记的遗传体系,更能加快转化时间,缩短转化周期,而且假阳性更低,对于博落回生物学研究具有一定帮助。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时检测肉鸡组织中4种异喹啉类生物碱

【目的】试验旨在建立一种同时测定肉鸡组织中原阿片碱、别隐品碱、白屈菜红碱和血根碱含量的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）检测方法,以便更好地监测博落回散和博普总碱散活性成分在肉鸡组织中的分布与残留情况。【方法】对肉鸡组织进行前处理方法优化,以0.1%甲酸水和乙腈为流动相,在Agilent Zorbax SB-C₁₈上梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为35℃,进样量为1 μL,在正离子模式下通过多反应监测模式采集数据,采用内标校正和外标法测定生物碱含量,并对方法线性、检测限与定量限、基质效应、回收率、批内与批间精密度、准确度及稳定性进行考察。【结果】白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱的线性范围为0.5~200 μg/L,血根碱为2~200 μg/L,相关系数均≥0.999,线性关系良好;白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱的检测限与定量限分别为0.2和0.5 μg/L,血根碱检测限与定量限分别为1和2 μg/L。4种生物碱在高、中、低浓度下方法回收率达到86.61%~111.17%,批内与批间精密度和准确度均≤14.93%,基质效应为81.73%~120.78%,稳定性的相对标准偏差均≤13.55%。【结论】本试验建立了同时检测肉鸡心脏、肝脏、肾脏、胸肌和腿肌中4种异喹啉类生物碱的超高效液相色谱-串联质谱法,方法符合各项方法学考察要求,具有专属性强、灵敏度高、方便快捷等特点,可实现对肉鸡组织中痕量生物碱的精确、快速定量。     

基于网络药理学和转录组学方法探究博普总碱散改善蛋鸡肠道炎症的机制

为探究博普总碱散改善蛋鸡肠道炎症的作用机制,将试验鸡分为对照（Control）组和博普总碱散（BP）组,结合q RT-PCR检测十二指肠、空肠和回肠的TNF-α、IL-1β、NF-κB、IL-8和IL-10基因相对表达量,并结合网络药理学和转录组学联合分析。试验发现：BP组产蛋率显著升高（P<0.05）,料蛋比显著下降（P<0.05）;BP组十二指肠IL-8相对表达量显著下降（P<0.05）,TNF-α、IL-1β、和NF-κB基因相对表达量极显著下降（P<0.01）,IL-10基因相对表达量显著升高（P<0.05）,空肠NF-κB基因相对表达量显著下降（P<0.05）,TNF-α、IL-1β和IL-8基因相对表达量极显著下降（P<0.01）,回肠IL-1β基因相对表达量显著下降（P<0.05）,TNF-α、IL-8基因相对表达量极显著下降（P<0.01）;十二指肠网络药理学和转录组学的KEGG通路富集结果均包含PI3K-Akt信号通路。结果表明：博普总碱散可通过抑制PI3K-Akt信号通路,改变肠道炎症因子的表达量从而改善蛋鸡肠道...     

肉鸡对博落回散的耐受性评价

为了评价肉鸡对博落回散的耐受性,确定肉鸡耐受的剂量范围,试验将200只1日龄健康艾维茵肉鸡随机分为5组,每个组5个重复,每个重复8只。20,100,200,300 mg/kg组分别在每千克日粮中添加相应剂量的博落回散(相当于推荐临床剂量的1,5,10,15倍),对照组日粮中不添加任何药物,连续饲喂试验肉鸡49 d,考察博落回散对肉鸡生长性能、血常规和血液生化指标、脏器指数和组织病理学的影响。结果表明：试验期各组肉鸡精神和食欲无异常,未出现发病和死亡现象。1～49日龄,与对照组相比,20 mg/kg组日采食量显著提高(P<0.05),日增重极显著提高(P<0.01),料重比极显著降低(P<0.01),血常规、血液生化指标和脏器指数差异不显著(P>0.05)。100,200 mg/kg组的日增重、料重比与对照组差异不显著(P>0.05);100 mg/kg组49日龄的淋巴细胞比例显著高于对照组(P<0.05);200 mg/kg组21日龄的浆细胞比例显著低于对照组(P<0.05),肝脏指数极显著高于对照组(P<0.01)。300 mg/kg组...     

饲用植物姜黄粗提物HPLC特征图谱的建立

研究建立饲用植物姜黄粗提物的高效液相色谱(HPLC)特征图谱.采用Sunfire C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm,Waters)色谱柱,以乙腈和0.1％甲酸水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min、柱温35℃、检测波长254 nm、进样量10 μL.成功建立30批姜黄粗提物的HPLC特征图谱,确...