四年制动物医学专业校外实践教学基地的建设及研究

实践教学是实施教育教学活动中的关键环节,实践教学运行的成功与否直接关系到学生掌握专业技能程度的高低,也关系到学生走向社会后适应能力的强弱,同时也是培养创新、创业人才的突破口.     

阴离子盐对围产期奶牛低钙血症的预防作用

奶牛围产期是奶牛泌乳、繁殖和疾病发生的关键时期.低钙血症(hypocalciemia)是围产期最常见的疾病之一.由于该病常继发生产瘫痪、前胃弛缓、真胃变位、胎衣不下、子宫复旧缓慢及子宫内膜炎等疾病,给奶牛带来巨大的经济损失,因此各国均十分重视奶牛围产期低钙血症的防治工作.     

基于网络药理学探讨中药复方治疗奶牛子宫内膜炎的作用机制

【目的】 通过网络药理学对丹参、益母草、黄芩、连翘组成的中药复方进行分析,研究其有效成分治疗奶牛子宫内膜炎的潜在作用靶点,并对靶点作用通路的机制进行阐述。【方法】 利用TCMSP数据库筛选药物成分作用靶点,通过NCBI、GeneCard、geneMap、TTD、DrugBank查找奶牛子宫内膜炎的相关靶点,筛选出药物成分靶点与奶牛子宫内膜炎相关靶点的共有基因靶点,作为该中药复方治疗奶牛子宫内膜炎的预测靶点,并上传到STRING数据库建立蛋白互作(PPI)网络,通过Cytoscape 3.8.2软件根据连接度对PPI网络进行筛选,找到其核心靶点。运用Metascape数据库对核心靶点进行GO功能与KEGG通路富集分析。【结果】 从该中药复方中筛出有效活性成分133种,主要包括槲皮素、山奈酚、黄芩素、丹参酮ⅡA等,通过药物成分找到对应靶点蛋白292个,通过数据库找到奶牛子宫内膜炎的相关靶点130个,筛出中药复方治疗奶牛子宫内膜炎的预测靶点24个,其中核心靶点7个,包括肿瘤坏死因子、蛋白激酶、前列腺素内过氧化物合酶2等。GO功能富集分析得到生物过程20个条目、分子功能6个条目及细胞组分6个条目,生物过程包括脂多糖的反应、白细胞-细胞黏附的正向调节、对无机物的反应等;分子功能包括信号受体活性调节、转录辅激活子的结合、血红素结合等;细胞组分包括细胞膜筏、薄膜侧面、颗粒分泌腔等。KEGG通路富集分析涉及20个基因,参与调控的通路有9条,其中涉及基因较多的包括AGE-RAGE信号通路、癌症蛋白聚糖通路、血流剪切应力与动脉粥样硬化通路及Th17细胞分化通路。【结论】 该中药复方可能是通过调控肿瘤坏死因子、蛋白激酶、前列腺素内过氧化物合酶2等靶点,通过参与AGE-RAGE信号通路及Th17细胞的分化对奶牛子宫内膜炎产生治疗作用。     

RHIGF-Ⅰ对体外单层培养的肝细胞PEPCK mRNA 丰度的影响

根据牛肝细胞中持家基因表达的恒定性,选用β肌动蛋白（β-actin）作为内参照,检测外源性添加不同质量浓度的重组人胰岛素样生长因子（RHIGF-Ⅰ）对体外培养牛肝细胞磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）mRNA表达水平的变化情况。选用体外培养的犊牛单层肝细胞为实验模型,当细胞贴壁后在无血清培养液中添加RHIGF-Ⅰ,其终质量浓度分别为0、5、10、15、20、30、40、50、60、100、150μg/L,待添加8h后,提取总RNA,反转录,用相同的模板扩增PEPCK基因及β内参,再比较各梯度目的基因与内参的灰度。结果表明,随着添加RHIGF-Ⅰ质量浓度的升高,PEPCK mRNA表达呈下降趋势,且均低于对照组。     

应用SELDI-TOF-MS技术对患脂肪肝奶牛血浆差异蛋白的分离鉴定及生物学分析

【目的】脂肪肝是围产期奶牛主要代谢性疾病之一,50%产后奶牛受其影响。产后奶牛生产力降低、繁殖性能低下、免疫功能减弱、肝功能衰竭和过早死亡都与脂肪肝有关。表面增强激光解析/电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）是一种对生物样本蛋白质研究的新型高敏感性蛋白质组学方法,文章旨在探讨脂肪肝奶牛血浆蛋白质组学特征。【方法】于黑龙江某集约化养牛场选择产后7-28d,1-2胎次荷斯坦奶牛40头。清晨空腹尾静脉采血10mL,应用肝素抗凝（150U）迅速离心（3 000 r/min,5 min）分离血浆,置于-80℃冰箱冷冻保存。依据血浆甘油三酯（TG＞0.20 mmol·L^-1）, 血浆β-羟丁酸（BHBA＞1.2mmol·L^-1）浓度和临床症状,将其分为试验组（T）20头和健康对照组（C）20头。应用SELDI-TOF-MS技术测得血浆蛋白质谱,利用Ciphergen Protein Chip Software (Version 3.1.1)对在试验组和对照组所有样品中得到的峰图进行分析,得到原始数据。将两组之间的数据峰值做wilcoxon sum rank test统计检验,用计算出的P值判断峰在两组中是否有显著差异。以0.01作为P值的阈值,筛选出P值小于0.01的差异峰。在得到的差异峰中,将差异峰的m/z值与Swissport蛋白数据库中多肽的理论荷质比 (mass to charge ratio,m/z)进行比较,找到最相似的蛋白作为差异峰可能检测蛋白的预测结果。【结果】与对照组相比,试验组奶牛血浆蛋白质谱存在39个差异峰,在得到的39个差异峰中,将差异峰的m/z值与Swissport蛋白数据库中多肽的理论荷质比值进行比较,最终获得26个可预测的差异峰,预测蛋白11种。结果显示,相对于C组,11种预测蛋白在T组中均表达下调。通过生物信息学（Network,GO,Pathway）分析,应用Cytoscape软件对获得的11种蛋白进行牛类基因网络搜索,得到Networks分析结果图。在数据库中搜索到了试验结果中的淀粉样肽前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)和纤维蛋白原α链(fibrinogen alpha chain, FGA)两种差异蛋白,并得到其相关的Networks分析结果。应用Cytoscape软件中BinGO插件对11种蛋白进行GO分析,并得到GO分析结果。对这些蛋白质经软件搜库得到已经注释的差异蛋白有9种,分别为FGA、血清淀粉样蛋白A (serum amyloid A protein, SAA)、血浆蛋白酶c1抑制剂（plasma protease c1 inhibitor, SERPING1 or C1INH）、血清载脂蛋白-CⅢ（apolipoprotein c-Ⅲ,ApoCⅢ）、海帕西啶（hepcidin, HAMP）、骨桥蛋白（osteopontin, OPN or SPP1）、 甲状腺素运转蛋白（transthyretin, TTR）、胱蛋白酶抑制剂C （cystatin-c, CysC or CST）、神经分泌血管生长因子蛋白（neurosecretory protein, VGF）。应用KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）pathway数据库搜索。搜索结果显示只有6种蛋白质可在数据库中搜到,分别是FGA、SERPING1、APO-CⅢ、APP、CysC、SPP1。并得到其相关的Pathway分析结果。这些蛋白可能是与奶牛脂肪肝发病机制相关的物质。【结论】应用SELDI-TOF-MS技术有效的分离了健康牛与患病牛之间的血浆差异表达蛋白,均在肝脏代谢或脂肪肝疾病发生发展过程中起重要的调节作用,对探究奶牛脂肪肝发病机理及其对机体生物学功能的影响具有重要的理论价值。差异蛋白对奶牛脂肪肝的发病机理的影响尚待进一步研究。     

牛奶中孕酮直接竞争ELISA检测方法的建立

采用直接竞争ELISA方法检测牛奶中孕酮含量.采用碳化二亚胺法,应用辣根过氧化物酶(HRP)标记11-α羟基孕酮琥珀酸酯(11α-OH-P4-HS),制备孕酮酶标抗原;酶标抗原与牛奶样品中的孕酮共同竞争结合固相包被的孕酮单克隆抗体,建立直接竞争ELISA反应体系.试验结果表明,最佳抗体包被浓度为1∶2 000,最佳酶标抗原工作浓度为1∶16 000,建立的标准曲线为y=-2.4598x+0.999(R2=0.996),牛奶中孕酮检测范围0.12～40 ng/mL,最低检测量为0.12 ng/mL,批内和批间变异系数分别为1.63%和2.49%.成功建立了可用于牛乳中孕酮快速检测的直接竞争ELISA方法.     

应用竞争PCR检测丙酸盐对体外培养牛肝细胞丙酮酸羧化酶mRNA水平的影响

根据牛肝细胞内PC(丙酮酸羧化酶)基因组与PCcDNA相比多含有一个内含子序列．在其中再插入一外源DNA序列．从而使最终构建的突变体片段的长度大于PCcDNA的长度，成功构建了PCcDNA的竞争DNA模板，然后应用竞争PCR方法研究了丙酸盐对体外培养新生牛单层肝细胞PCmRNA水平的影响。使单层肝细胞培养液中丙酸钠浓度分别为0、1．5、2．5、3．5、4．5、8．5、11．5mmol／L，处理24h，提取总RNA、逆转录，在同一体系中用相同引物扩增目的带和竞争模板带。结果表明．随着丙酸钠浓度的升高．PCmRNA水平呈上升趋势，提示肝细胞内PCmRNA的表达水平受培养液中丙酸钠浓度的影响。     

奶牛隐性酮病的研究概况

本文将黑龙江省规模化奶牛场隐性酮病的多年研究进行小结,根据奶牛隐性酮病的发病特点,并结合国内外的文献,概述了黑龙江省奶牛隐性酮病的发生情况、病因学、临床病理学特征和检测及防治方面的研究状况,提出一些问题,旨在为今后的研究提供新的思路和方向,从而创造良好的经济价值.     

黄曲霉毒素B1研究进展

AFB1饲料污染以及动物AFB1中毒方面的研究已经成为国内外关注的科学问题,通过查阅文献就AFB1研究进展并且重点针对AFB1的危害和防控的基础性研究进行概述,并对今后益生菌在黄曲霉素中的研究方向进行探讨,以期望为目前霉菌由于缺乏特异性的临床防治的方法从而造成畜牧业重大经济损失的瓶颈性问题提供理论参考资料。     

奶牛屈腱断裂的手术治疗

屈腱断裂(rupture of the digital flexor ten-dons)是指(趾)浅屈肌腱、指(趾)深屈肌腱与悬韧带发生的开放性或非开放性断裂,三者有的单独断裂,也可同时发生断裂[1].