一例猪痘病的中西结合诊治

猪痘是由猪痘病毒引起猪的一种急性、温和的皮肤损伤性传染病，在农村养猪场的发病率较高，特别是在夏季天气炎热、高温高湿的环境里，蚊子、苍蝇和有害昆虫大量滋生，极易发生此病。猪痘虽然死亡率不高，但传播速度快，负面影响大，严重影响猪的正常生长发育，增加养猪成本，给养殖户带来很大困惑，笔者在长期的教学和生产实践中，对一例猪痘病的病因、诊断和综合防治进行了深入全面的探讨，以供广大养殖户参考。     

PK-15细胞的THBS3基因缺失抑制PRV复制

为探索猪血小板反应蛋白3(thrombospondin 3,THBS3)在PRV复制中的功能，利用CRISPR/Cas9系统构建THBS3基因缺失的PK-15稳定细胞株。首先，根据THBS3基因序列和CRISPR/Cas9靶点设计原则设计并合成2对sgRNA序列，退火后连接到Lenti-CRISPRv2慢病毒表达载体；与慢病毒包装质粒共转染人胚肾细胞(HEK293T)获得重组慢病毒，收集细胞上清并离心去细胞碎片后转导PK-15细胞，进行嘌呤霉素筛选获得THBS3敲除的PK-15细胞株；将重组病毒rPRV-GFP接种至野生型和缺失型细胞评价病毒复制差异。结果显示，表达sgRNA的重组质粒构建成功；将收获的慢病毒转导细胞后通过筛选获得1株无THBS3蛋白表达细胞株(PK-THBS3-KO),通过测序发现外显子3有1个碱基的插入；感染试验显示，THBS3基因缺失后抑制了PRV复制。结果表明，通过CRISPR/Cas9系统成功构建了PK-15的THBS3基因敲除的稳定细胞株，PRV感染试验显示基因缺失后抑制了病毒复制。