秤锤树嫩枝扦插繁殖研究

秤锤树作为珍稀植物已被列入中国植物保护红皮书,需要采取苗木繁殖扩大其种群数量。试验通过采取不同植物激素种类、植物激素浓度、处理时间对比扦插,结果表明:采用河沙扦插基质和塑料小拱棚保湿,NAA+IBA(1∶1)1 000倍液处理60 s,扦插生根率为79%,生根数量16条,平均根长10.01 cm,实践操作简便易行,可在秤锤树扦插繁殖中偿试应用。     

核酸水平检测犬副流感病毒方法的建立

根据GenBank中与犬副流感(CPIV)同源性较近的SV5病毒N基因保守序列,利用DNAStar软件设计了一对特异性引物,能扩增265bp大小的片段,并以此建立了检测CPIV的RT-PCR方法,实验证明该对引物特异扩增CPIV;不扩增犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬腺病毒和狂犬病病毒犬的四种病原的核酸。检测临床病料20份,其中2分为CPIV阳性。此法敏感性较高。是检测犬急性传染性呼吸道疾病(CIRD)中CPIV的有效的方法。     

犬细小病毒VP2蛋白的表达及间接ELISA方法的建立

以犬细小病毒(Canine parvovirus virus,CPV)VP2基因的原核表达产物为抗原建立检测CPV抗体的间接ELISA方法.在分析CPV VP2基因稀有密码子(大肠杆菌系统)的基础上,克隆去除5'和3'端的稀有密码子的VP2基因,构建了VP2蛋白原核表达载体pET28a-VP2和pET32a-VP2,利用HIS标签对融合表达产物进行纯化.经SDS-PAGE和Western-blot检测证实该基因获得表达,并存在低相对分子质量产物,其中纯化后的pET28a-VP2具有良好的免疫学活性.以pET28a-VP2蛋白为基础,建立检测VP2抗体的iVP2-ELISA方法:抗原包被质量浓度为17.8 mg/L,血清最佳稀释度为1:20,阳性判定标准初步定为:待测样品D值>0.367,且待测样品D值/阴性样品D值>2.0.采用iVP2-ELISA对20份背景清晰的犬血清样品进行检测,结果显示,iVP2-ELISA与HI试验的阴阳性符合率一致,但不呈现正比关系.本试验为犬场CPV抗体水平检测和进行CPV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法.     

紫花苜蓿花粉生活力测定方法研究

为找到快速而有效地测定紫花苜蓿(Medicago sativa L.)花粉生活力的方法,本文通过碘-碘化钾染色、氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、红墨水染色以及花粉离体培养萌发4种方法测定紫花苜蓿花粉的生活力。结果表明:前3种染色的方法不能准确快速的测定肇东苜蓿花粉生活力,离体培养萌发法中的琼脂法和悬滴法可以快速而准确的测定肇东苜蓿花粉的生活力。琼脂法和悬滴法培养花粉1.5h其萌发率最高,平均萌发率为55%,但悬滴法更加快捷方便,萌发率是54%,最适宜的浓度为蔗糖10%,硼酸0.015%。     

紫外可见分光光度法同时测定水中铬（Ⅵ）和锰（Ⅶ）的含量

[目的]同时测定水中铬（Ⅵ）和锰（Ⅶ）的含量。[方法]在波长为440和545 nm下,以硫酸作为参比测定水的吸光度,根据吸光度的加和性,用紫外可见分光光度法同时测定水中铬（Ⅵ）和锰（Ⅶ）的含量。[结果]在440和545 nm适宜波长下测定铬（Ⅵ）和锰（Ⅶ）的吸光度,对数据进行回归处理,得线性回归方程和相关系数,表明线性关系均良好。[结论]此方法反应灵敏,操作简单,适合天然水或工业废水中铬（Ⅵ）和锰（Ⅶ）含量的同时测定。     

应用电位滴定法测定海带中碘的含量

本试验采用电位滴定法测定海带中碘含量,该方法反应灵敏,操作简单,专一性强,符合测定结果和分析的技术要求.本试验同时讨论了由E-V曲线、△E/△V-V曲线、△2E/△V2 -V曲线确定电位滴定终点的方法.     

去除紫花苜蓿叶片高丰度蛋白的方法及其应用

紫花苜蓿叶片中大量的高丰度蛋白(核酮糖-l,5-二磷酸羧化/加氧酶,Rubisco)干扰了蛋白质的动态分辨率,严重影响蛋白质组学研究中功能蛋白的检测与鉴定。为了探究去除高丰度蛋白的适宜方法,本研究利用Mg/NP-40与聚乙二醇(PEG)预分离紫花苜蓿叶片蛋白,通过双向凝胶电泳法比较了不同浓度PEG对叶片高丰度蛋白的分离情况。电泳图谱显示0,15%,17.5%,20%PEG处理的蛋白质中分别可以检测到(335±17),(417±3),(445±7),(459±11)个蛋白质点,0,15%,17.5%处理组间差异显著(P<0.05),17.5%和20%PEG 处理组间没有差异(P<0.05)。然而,17.5%PEG能够检测到更多的差异蛋白质点,证明其更能有效沉淀高丰度蛋白,便于检测被Rubisco遮盖的蛋白质点。将该方法应用于紫花苜蓿叶片响应低温胁迫的蛋白质组学研究中检验其应用效果,与三氯乙酸/丙酮法提取的全蛋白相比,去除高丰度蛋白后鉴定出8个新的蛋白质差异点,证明该方法适用于实际的蛋白质组学研究。可见,Mg/NP-40与17.5%PEG法是最适宜去除紫花苜蓿叶片高丰度蛋白的方法。     

犬细小病毒CPV-2c型亚洲株分离鉴定及VP2基因序列分析

为探明北京某犬场犬的死亡原因,从患有肠道出血的犬肛拭子中分离出1株犬细小病毒,试验通过PCR、血凝和间接免疫荧光试验方法对毒株进行鉴定,并对VP2基因进行克隆测序和序列分析,确定其遗传分支。结果表明,该分离株属于犬细小病毒CPV-2c型,命名为CPV-BJ21株。应用犬细小病毒单克隆抗体进行间接免疫荧光检测,结果为阳性;基因序列分析表明,分离株与犬细小病毒为同一进化分支,VP2基因核苷酸序列与中国四川的CPV-2c(MH476581.1)同源性达99%,与亚洲分离的犬细小病毒之间亲缘关系较近。VP2氨基酸序列在第A5G、S297A、D426E位出现了氨基酸突变;在F81细胞上传3代后,病毒液的血凝效价稳定于210。本研究可为犬细小病毒的流行情况及新疫苗的研究提供参考依据。     

水貂肠炎细小病毒结构蛋白VP2基因的克隆和序列分析

对水貂肠炎细小病毒SMPV-11株结构蛋白VP2基因进行扩增,获得了基因序列全长为1755bp的SMPV-11株VP2基因,其编码584个氨基酸;应用DNAStar分析软件对该序列进行同源性分析发现,SMPV-11株VP2基因与其他6株水貂肠炎细小病毒株核苷酸和氨基酸均有较高的同源性,分别为99.2%～99.4%和98.6%～99.1%,与猫泛白细胞减少症病毒标准株CU-4株同源性为99.3%和99.1%,系统发生树分析表明它们属于同一个分支。本研究为水貂肠炎细小病毒分子流行病学调查和新型疫苗的研究奠定基础。     

狐IFN-α、IL-6、IL-10及貉IFN-α基因首次扩增成功

2007年4月中国农业科学院特产研究所人兽共患病研究室应用RT-PCR方法扩增出北极狐IFN-α、IL-6、IL-10及貉IFN-α基因序列,其中狐IFN-α、貉IFN-α基因为世界首次扩增序列,狐IL-6、IL-10基因为国内首次扩增序列.