不同早实核桃品种的生殖特性研究

[目的]研究不同早实核桃品种生殖特性。[方法]以“绿早”、“绿岭”、“香玲”、“辽1”和“辽3”5个早实核桃品种为试材,研究了开花物候期、孤雌生殖能力和花粉形状与大小等生殖特性。[结果]雄先型品种“绿岭”、“香玲”、“辽3”和“辽1”雄花花期（自雄花散粉初期至散粉末期）分别为14、16、11和12d,一般为12—16d,雌花花期（雌花开放初期至未花期）分别为9、9、11和8d,一般为8—11d;雌先型品种“绿旱”雄花花期一般为15～17d左右,雌花花期为10～12d。在所测定的不同早实核桃品种中“绿岭”的孤雌生殖率最高,为42．10％,“绿早”的孤雌生殖率最低,仅为11．64％;“绿早”和“辽3”的花粉生活力均在93．00％以上,“香玲”的花粉生活力极显著低于其他品种．有生命力的花粉仅占62．72％。[结论]为进一步研究旱实核桃的生殖特性提供借鉴。     

PiggyBac转座子介导的诱导细胞永生化转基因载体的构建及其整合效率的检测

【目的】构建在小鼠水平上实现多个目的基因的表达以及标记基因安全删除的转基因载体。【方法】以载体为模板,分别扩增SV40P neo、IRES、tk-PloyA,通过overlap PCR连接,并在两端添加方向相同的LoxP序列,构建转基因基本载体PB-NIT;然后通过overlap PCR扩增获得Tet-CMV-SV40 T-T2A-p 53-PolyA基因表达盒,将其插入PB-NIT中,构建载体PB-NIT-STP;最后将转录因子激活域 rtTA 通过同尾酶连接插入PB-NIT-STP,构建载体PB-rtTA-NIT-STP。【结果】经酶切和测序等鉴定,以上载体均正确;经转座活性鉴定,共转染转座子载体PB-rtTA-NIT-STP和转座酶载体比只转染转座子载体获得的阳性克隆数提高了20倍。【结论】得到了基于PiggyBac转座子的可用于正负向筛选和诱导目的基因表达的转基因载体。     

温湿度对双纹须歧角螟生长发育和繁殖的影响

双纹须歧角螟(Trichophysetis cretaceaButler)是为害茉莉花的重要害虫。本文于室内就温度、湿度及极端高温对其生长发育和繁殖的影响进行了研究。结果表明,在15~30℃范围内,双纹须歧角螟的发育速率随着温度的升高而加快;当温度超过30℃时,发育速率减慢。在各虫态中,蛹期的存活率受温度变化的影响最大。卵、蛹在温度持续高于35℃时不能存活。40℃高温处理4~8h能显著缩短卵发育历期,延长成虫寿命,提高产卵量。在适宜的温度下(23~25℃),湿度对双纹须歧角螟各虫态生长发育及繁殖的影响不大。     

山羊KAP9.2基因多态性研究

KAP基因家族角蛋白相关蛋白9.2(KAP 9.2)是超高硫角蛋白相关蛋白基因家族中的一员,可能在连接中间微丝角蛋白中起重要作用.研究通过DNA测序和PCR-RFLP技术对KAP9.2基因进行了研究.结果表明:KAP9.2基因在286位存在T/C突变,该突变位点能够被Pst Ⅰ识别并切割,在785个内蒙古白绒山羊、212个陕北白绒山羊及239个奶山羊个体中均出现TT、TC、CC三种基因型,其频率分别为0.047,0.519,0.434;0.180,0.592,0.228;0.431,0.544,0.025 1.T和C的等位基因频率分别为0.307,0.476,0.703和0.693,0.524,0.297.X2检验表明3个山羊品种在KAP9.2位点上均处于HardyWeinberg不平衡状态(P＜0.05),T和C等位基因的频率在绒山羊和奶山羊中差异显著(P＜0.05),C等位基因为绒山羊的优势基因,揭示该等位基因可能与绒性状有关.     

睾丸注射慢病毒生产转基因鸡的研究

【目的】采用睾丸注射慢病毒的方法生产转基因鸡以提高转基因效率,使转基因鸡的批量生产变得简单可行。【方法】用磷酸钙沉淀法包装慢病毒,对慢病毒包装体系中的质粒总量和HN Buffer的pH值进行优化,以包装出滴度较高的慢病毒;然后将慢病毒注射到受精鸡蛋的胚胎中验证其活性;最后,将慢病毒注射到8日龄公鸡的睾丸内,待其性成熟以后,将精液DNA呈阳性的公鸡与非转基因母鸡进行交配生产出转基因鸡。【结果】当90mm培养皿中质粒总量为50μg、HN Buffer的pH值为7.05时慢病毒的包装效率最高,在该条件下包装出的慢病毒滴度高达7.5×107 TU/mL;采用慢病毒胚胎注射途径成功地生产出增强绿色荧光蛋白(enhanced Green Fluorescent Protein,eGFP)转基因鸡;采用慢病毒睾丸注射途径生产的转基因鸡后代中能检测到eGFP目的基因,但未检测到其相关的表达。【结论】慢病毒睾丸注射途径能够将外源基因整合到精原干细胞中,并遗传给后代。     

沧州红枣产业存在问题及对策

围绕沧州红枣产业发展现状以及存在问题,找出加快红枣产业健康发展的相关对策,以期促进沧州地区红枣产业的更好发展。     

陕北白绒山羊KAP9.2基因腺病毒载体的构建及包装

研究旨在构建能够表达KAP基因家族角蛋白相关蛋白9.2(KAP9.2)基因的腺病毒载体,为研究KAP9.2在绒山羊绒毛生长中的功能奠定基础。通过外科手术采集陕北白绒山羊皮肤组织,采用酚/氯仿法提取其基因组,设计引物,通过PCR技术扩增KAP9.2基因。通过酶切连接构建pAdTrack-KAP9.2穿梭载体。将该穿梭载体经Pme I线性化后与pAdEasy-1载体共转化到BJ5183细菌中进行重组,经过卡那霉素抗性筛选获得重组腺病毒载体pAdEasy-KAP9.2。将pAdEasy-KAP9.2经Pac I酶切线性化后转染HEK293人胚肾细胞,培养7d后收集细胞,反复冻融破碎细胞,离心收集病毒。在病毒扩增4次后,采用LaSRT法测定其滴度。最终测得病毒滴度为1.34×108 GFU/mL。研究成功包装KAP9.2基因重组腺病毒颗粒。     

高效PiggyBac转座酶的构建与筛选

【目的】构建能够定点转座的高效PiggyBac转座酶系统。【方法】以野生型PiggyBac转座酶为模板,通过易错PCR方法随机突变转座酶基因,构建转座酶突变库,并将其与能够靶向识别并结合DNA序列的锌指蛋白(ZFP)融合表达,构建ZFP-PiggyBac转座酶突变库系统。将转座酶载体突变库、转座子载体和报告载体共转到酿酒酵母JMY1中,通过Ura-5FOA酵母筛选系统筛选高效定点作用的转座酶。【结果】成功构建ZFP-PiggyBac转座酶突变库系统,经过3轮系统筛选获得5个高效作用的突变转座酶。【结论】新构建的ZFP-PiggyBac转座酶突变库系统具有在锌指蛋白ZFP靶向识别域Rosa26BS位点处进行高效转座的能力。     

"冀星冬枣"主要病虫害防治措施

<正>"冀星冬枣"是沧州市林科所选育的冬枣优良品种,2008年通过河北省林木新品种审定。该品种平均单果重16.55g,可食率97.3%,总糖24.67%,果形美观,果皮薄,果肉细脆多汁、甜味浓、口感好。一般栽后3~5a即可结果丰产,在一般管理条件下,盛果期树,株产可达37kg以上。但