吉林省牛瑟氏泰勒虫病分子流行病学调查

为了解吉林省牛瑟氏泰勒虫病感染情况,本试验根据牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因序列设计引物,应用聚合酶链式反应(PCR)方法对吉林省珲春、通化、安图、舒兰、龙井、辽源、白山共7个县市采集的247份血液样本进行了牛瑟氏泰勒虫病分子流行病学调查,并进行不同地区、不同饲养方式、不同性别及不同年龄之间的比较。结果显示,牛瑟氏泰勒虫总体阳性率为39.68%(98/247),其中通化阳性率最高为70.00%(14/20),龙井阳性率最低为20.00%(8/40),地区之间除安图和白山差异不显著(P>0.05)外,其他各地区之间均差异显著(P<0.05);散养牛阳性率64.44%(58/90)与规模化养殖牛阳性率25.48%(40/157)之间差异极显著(P<0.01);母牛阳性率38.46%(50/130)与公牛阳性率41.03%(48/117)之间差异不显著(P>0.05);1岁以内牛阳性率为56.67%(34/60),1～3岁牛阳性率为42.22%(38/90),3岁以上牛阳性率为26.80%(26/97),不同年龄间差异显著(P<0.05)。结果表明,吉林省牛瑟...     

牛瑟氏泰勒虫p23-IL-18融合基因的原核表达

为了研发牛瑟氏泰勒虫病基因工程亚单位疫苗,本实验将p23-IL-18融合基因克隆到pET-28a原核表达载体,构建pET-28a-p23-IL-18重组原核表达质粒,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定后在37 ℃用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果表明,成功构建牛瑟氏泰勒虫pET-28a-p23-IL-18原核表达质粒,目的基因在大肠杆菌中成功获得表达,融合蛋白的分子量约为48ku,并被牛瑟氏泰勒虫阳性血清所识别,具有良好的反应原性。本研究结果为牛瑟氏泰勒虫病基因工程亚单位疫苗的制备奠定了基础。     

天南地北郁葱葱---杭州新街新兴园艺发展之路

"致力绿化,造福人民,美化环境",这是杭州新街新兴园艺绿化有限公司的经营宗旨.虽然只是普普通通的12个字,却承载了公司掌门人董雪庆先生20多年的酸甜苦辣.     

乳汁的保存条件与脱脂乳中孕酮(P)浓度的关系

目前,用酶免疫测定法(EIA)测定血液中和乳汁中的P浓度的方法已在牛的发情鉴定、妊娠诊断及卵巢疾患的诊断等方面得到应用;以直肠检查为主的临床繁殖检查,因P浓度测定法的出现而更加提高了其精确度。但关于乳汁的采集及其保存方法的研究,尚未充分开展,因而在临床应用上常造成混乱。本试验对从采集乳汁到脱脂为止的保存温度与时间及P浓度的关系进行了探讨。同时,进行了脱脂乳中P浓度和血浆中P浓度的比较试验。     

表达猪附红细胞体ENO基因的质粒DNA的构建及免疫效果研究

试验旨在构建表达猪附红细胞体ENO基因的质粒DNA,并测定其免疫效果。将猪附红细胞体ENO基因克隆到PVAX1真核表达载体上,然后转染到Vero细胞中进行表达并测定其免疫效果。将18只BALB/c小鼠(雌雄各半)随机分为3组(PVAX1-ENO质粒DNA免疫组、PVAX1空载体对照组及PBS对照组),每组6只,每组小鼠对应免疫接种PVAX1-ENO质粒DNA、PVAX1空质粒和PBS。分离血清并通过ELISA方法测定血清中ENO蛋白抗体效价、IgG1和IgG2a抗体水平及IFN-γ和IL-4细胞因子水平。三免2周后每组选取3只小鼠检测CD4+和CD8+含量。结果显示,本试验成功构建了PVAX1-ENO质粒DNA,经PCR和酶切鉴定正确,并能在Vero细胞中成功表达。PVAX1-ENO质粒DNA免疫组ENO蛋白抗体水平、IgG1和IgG2a抗体水平、IFN-γ和IL-4细胞因子水平及CD4+和CD8+含量均显著高于PVAX1空载体对照组及PBS对照组(P0.05)。结果表明,PVAX1-ENO质粒DNA可显著提高BALB/c小鼠的体液免疫水平,并在一定程度上刺激BALB/c小鼠细胞免疫。     

不同药物及给药途径对消灭牛体表寄生蜱的研究

消灭、控制传播媒介蜱是防治牛瑟氏泰勒虫病的关键．在蜱活动的季节中,畜体灭蜱更是直接保护牛只避免或减轻蜱危害的重要措施．以往畜体灭蜱的方法很多,如药浴、喷洒、浇泼、局部涂擦和手捉等,采用这些方法进行灭蜱麻烦、劳动强度大、药效期短,又常受到牧地条件所限制...     

牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆与原核表达

本研究根据GenBank牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因设计1对引物,利用全血基因组DNA提取试剂盒提取牛瑟氏泰勒虫全血基因组DNA,PCR扩增得到了大小为786 bp的基因片断,测序分析证明,它与已报道序列的核苷酸同源性可达99%.将该基因与pET-28a(+)载体进行连接,经酶切和PCR鉴定,证明成功构建了含有目的基因片段的重组表达载体pET-28a-P33.将此质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,用IPTG进行诱导.结果证实,该基因在大肠杆菌中用IPTG诱导4 h时表达量达到高峰,表达产物为分子质量约30.3 ku的融合蛋白,其表达量占菌体总蛋白的43%,以包涵体形式存在;Western blotting试验证明,表达蛋白P33可被牛瑟氏泰勒虫阳性血清所识别,表明该融合蛋白具有较好的反应原性.     

牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因表达条件的优化

将已构建并测序正确的含有牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因的pGEX-4T—P23转化菌用IPTG进行诱导表达,经SDS—PAGE电泳可检测到相对分子量为46．0ku的融合蛋白．根据SDS—PAGE确定融合蛋白的最佳表达条件,结果显示诱导时机和时间是影响表达的主要因素,诱导温度和IPTG浓度次之;确定最佳诱导时机为转接种后2．0h,最佳诱导温度34℃,最佳诱导时间6．0h,最适IPTG浓度0．08mmol／L．表达产物主要以包涵体存在,在优化条件下融合蛋白的表达量经Bandscan5．0软件分析约占菌体总蛋白的31．7％．     

基于DEM的三维空间分析

使用可视化编程语言IDL开发了三维空间分析模块Analysis3D,系统实现了部分三维地理信息系统的功能,并进一步使三维地理信息系统迈向了虚拟现实。在系统的实现过程中利用IDL坐标系统的转换功能,成功地将外部数据可视化;实现了三维数据的实时获取,并解决了三维实体空间编辑与操作的实际问题,实现多视角多分辨率的观察。根据地理信息系统空间分析的相应算法,实现空间分析与立体量测,所有过程均在三维空间中完成;同时完成了三维空间中提取等高线,以及自动标注等高线功能。最后,实现了三维交互式浏览,得到良好的视觉效果。