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研究旨在探讨组蛋白赖氨酸去甲基化酶(JHDM2A)对猪成纤维细胞诱导为多能干细胞效率的影响,并对其内在的分子机制进行探究。以猪成纤维细胞为材料,采用多西环素(DOX)诱导的慢病毒生产诱导多能干细胞(iPSCs)体系,在此基础上过表达JHDM2A,通过碱性磷酸酶染色和绘制诱导时间轴检测其对诱导效率的影响;普通PCR技术检测克隆的多能性;免疫荧光检测多能因子的蛋白表达;实时荧光定量PCR检测JHDM2A在形成克隆后以及克隆分化过程中对多能因子、组蛋白甲基化相关基因表达的影响。结果表明,JHDM2A过表达组细胞在第3天发生形态变化,第8天形成iPSCs克隆,相比于对照组分别提前了1和2 d。碱性磷酸酶染色结果显示,与对照组相比,JHDM2A过表达组克隆形态明显改善,染色着色更深,诱导效率提高8倍。普通PCR结果显示,JHDM2A过表达组iPSCs、对照组iPSCs以及猪成纤维细胞(PFF)均表达内源性Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc、Nanog,且iPSCs的Oct4表达量高于PFF。免疫荧光结果显示,JHDM2A过表达组iPSCs表达Oct4、Sox2、Stat3、JHDM2A,弱表达SSEA1、SSEA4。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组和猪成纤维细胞相比,JHDM2A过表达组iPSCs的Sox2、Klf4、c-Myc、Nanog、Oct4、Tcl1的表达显著升高(P<0.05),Tfcp2l1和Zfp57的表达显著降低(P<0.05);JHDM2A过表达组P5代iPSCs培养基去除DOX后,随着代数的增加,Sox2、Nanog的表达逐渐降低,Klf4、c-Myc的表达先升高后降低,Oct4、Tcl1、Tfcp2l1、Zfp57的表达先降低后升高。以上结果表明,过表达JHDM2A通过促进组蛋白去甲基化提高猪成纤维细胞的诱导效率。 相似文献
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对赣南树木园内521个引种树种物候、生长动态长期观测所积累的资料进行多元统计分析.如用聚类分析揭示物种间物候期与生长的相似性并进行数量分类;用典范相关分析揭示两组物候期变量之间的相关性,为物候期预报与控制提供信息参考;对一些物种苗期进行生长节律分析与月生长建模,为物种苗期田间管理进行有价值技术储备;对物种测树指标进行数学建模,有利于了解物种生长特性,为引种与推广提供有价值的技术资料.统计分析手段以简取繁,除引用多元统计分析方法外,还藉助于灰色系统理论中的灰色建模与关联分析. 相似文献
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本研究旨在通过对意大利水牛精液品质分析、睾丸周径测量、精浆中的氧化应激水平检测和精子活力相关基因表达情况来探究影响精液质量的相关因素。试验检测了6头意大利水牛精液的活力、畸形率、采精量,并在测量其阴囊周径后进行相关性分析;检测了意大利水牛精浆中氧化应激水平指标(丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px))并进行了相关性分析;分析了意大利水牛精子β-微管蛋白-2c(TUBB2C)、外周致密纤维2(ODF2)、筑丝蛋白2(TEKT2)、筑丝蛋白4(TEKT4)基因的表达定量及相关性。结果显示,意大利水牛阴囊周径与精液产量、活力、畸形率之间相关系数分别为0.423(P>0.05)、0.750(P<0.01)、-0.827(P<0.01),即阴囊周径与精子活力呈显著正相关关系、与畸形率呈显著负相关关系;意大利水牛精子活力与MDA、T-SOD、GSH-Px指标之间相关系数分别为-0.522(P<0.05)、0.333(P>0.05)、0.474(P<0.05),即精子活力与MDA含量之间存在显著负相关关系,与GSH-Px活性之间存在显著正相关关系,与T-SOD活性相关性不显著;意大利水牛精子活力与TUBB2C、ODF2、TEKT2、TEKT4基因指标之间相关系数分别为0.930(P<0.01)、0.726(P<0.01)、0.924(P<0.01)、0.839(P<0.01),即精子活力与以上基因表达量存在显著正相关关系。本研究结果为了解影响意大利水牛精液质量的因素提供参考,也为意大利种公水牛的筛选提供理论依据。 相似文献
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旨在研究VRTN(vertebrae development homolog)基因在巴马香猪群体中的编码区序列特征、组织表达情况、脊椎数性状因果突变位点ins291的等位基因频率及其与乳头数和产仔数性状的关联。本研究采集3头0日龄巴马香猪组织,利用cDNA克隆技术获得VRTN基因编码区全长序列并进行生物信息学分析,利用荧光定量PCR技术检测VRTN在心、肝、脾、肺、肾、背最长肌和皮下脂肪组织中的表达情况;采集279头经产巴马香猪母猪血液,检测ins291位点在该群体中的频率分布,并与乳头数、产仔数性状进行关联分析。结果表明,巴马香猪VRTN基因编码区全长2 097 bp,其编码的氨基酸序列在不同物种间存在大量保守区域;VRTN基因编码698个氨基酸,预测为亲水性蛋白质,存在1个螺旋转角螺旋域超家族结构功能区、2个低复杂度区域和2个内部重复结构,并与核受体辅抑制子1(NR6A1)、果蝇同源框基因Prospero的脊椎动物同源蛋白2(PROX2)和富亮氨酸重复序列74亚基(LRRC74A)等蛋白具有相互作用;VRTN基因在0日龄巴马香猪各组织中均有表达,其中在背最长肌组织中表达量最高;巴马香猪保种群体中VRTN基因有利突变位点ins291的等位基因频率为21.15%,不同基因型个体之间平均产仔数、总乳头数、左侧乳头数、右侧乳头数和单侧最大乳头数性状均无显著差异(P>0.05),但纯合突变型(ins/ins)个体的乳头数性状均高于其他基因型个体。结果提示,在巴马香猪产业化生产中可通过分子育种手段提高VRTN ins291有利等位基因频率,但不影响其产仔数性状。 相似文献