CRISPR/Cas9技术高效制备山羊SOCS2基因编辑胚胎

旨在设计、筛选高效编辑山羊胚胎生长负调控因子SOCS2基因的sgRNA,为通过SOCS2基因编辑创制快长型山羊奠定技术基础。本研究利用在线网站对山羊SOCS2基因SH2结构域保守序列设计2条sgRNA,构建表达载体,体外转录获得sgRNA及Cas9 mRNA;体外检测sgRNA+Cas9蛋白切割靶DNA的效率;在此基础上将屠宰场山羊卵巢分离培养的442个孤雌胚胎进行分组,2个试验组显微注射sgRNA和Cas9 mRNA混合物,对照组注射超纯水,以单个囊胚全基因组DNA扩增产物为模板,PCR扩增靶区域并测序鉴定,发生编辑的样本进行T-A克隆测序检测编辑形式;根据在线网站预测,每条sgRNA选择5个错配数最少的潜在脱靶位点进行脱靶检测。结果表明,在SOCS2基因83和96号氨基酸密码子附近区域获得2条sgRNA并成功构建表达载体,体外转录获得高质量sgRNA和Cas9 mRNA;两条sgRNA均可引导Cas9蛋白在体外完全切割靶DNA;SOCS2-sg-83对胚胎的编辑效率为94.1%,160个T-A克隆中有152个在靶位点出现插入、缺失或替换,概率为95.0%,其中81.3%发生了移码突...     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp1蛋白锌指结构1(ZF1)突变体的构建及活性鉴定

本试验旨在构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)SX-1株非结构蛋白Nsp1的真核表达质粒,并对Nsp1蛋白锌指结构1(ZF1)进行定点突变,检测其在真核细胞中的表达活性。利用TRIzol法提取总RNA,RT-PCR扩增Nsp1目的基因,经双酶切构建pCI-neo-Nsp1真核表达质粒后对Nsp1蛋白锌指结构1的8C、10C、25C和28C的4个位点进行定点突变,成功获得分别突变为A和S的8个突变体。转染HeLa细胞,通过间接免疫荧光方法(IFA)和Western blotting检测Nsp1蛋白的活性。IFA结果显示,Flag抗体检测时蛋白质主要分布在细胞质和细胞核中,Myc抗体检测时蛋白质主要分布在细胞核中。Western blotting结果显示,Flag抗体检测时,S突变体出现大小约为44和20 ku条带,A突变体出现约为44 ku条带;Myc抗体检测时,S突变体出现大小约为44和27 ku条带,A突变体出现大小约为44 ku条带。试验结果表明,本试验成功构建了Nsp1突变体的真核表达质粒,证实其能在真核细胞中表达,为进一步研究Nsp1蛋白的锌指结构是否对机体Ⅰ型IFN产生起下调作用提供基础。     

施肥对毛竹林土壤水溶性有机碳氮与温室气体排放的影响

森林生态系统作为生物圈的重要组成部分,维持着全球植被碳库的86%和土壤碳库的40%(Houghton et al.,2001;胡会峰等,2006).因此,森林在调节全球气候、维持全球碳平衡方面起着非常重要的作用(Fang et al.,2001;Woodbury et al.,2007;Hu et al.,2008).然而,森林土壤也是温室气体排放源之一.     

小根蒜的研究进展与利用前景

综述了小根蒜的植物学特征、营养和医疗保健价值、高产栽培技术及今后的开发利用前景。     

PCV2ORF1、ORF2截短基因原核表达载体的构建及表达

采用PCR方法,从PCV2双拷贝DNA感染性克隆中扩增出PCV2 ORF1和ORF2截短基因,与pQE30原核表达载体分别经KpnI和HandIII双酶切,连接,经鉴定后证明成功构建pQE30-ORF1、pQE30-ORF2原核表达载体,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot检测到目的蛋白表达,为研究蛋白功能和单克隆抗体的研制打下了基础.     

不同猪瘟免疫程序对仔猪母源抗体水平的影响

本研究采用猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒,对应用不同猪瘟免疫程序的猪场进行仔猪母源抗体水平检测。结果显示,在20日龄以内仔猪母源抗体的OD630平均值和阳性率均维持较高的水平,仔猪能够获得较好的母源抗体保护,避免猪瘟病毒的早期感染。随着日龄增长,仔猪母源抗体逐渐下降,尤其在断奶后一周(30~40日龄)下降趋势最为显著。本研究可为本地区规模化猪场猪瘟免疫程序的制定尤其是仔猪首免日龄的确定提供参考依据。     

多抗霉素研究现状与市场前景

本文阐述了多抗霉素产品的特点、技术研究现状以及市场前景。     

猪圆环病毒2型毒株的分离鉴定

猪圆环病毒2型(PCV2)可引起断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、繁殖障碍等相关疾病[1],其中以PMWS最为严重.该病主要侵害6～12周龄仔猪,引起渐进性消瘦、呼吸困难、腹泻和黄疸等,给世界养猪业造成了巨大的经济损失.     

猕猴桃早熟品种果实采后高温下的营养代谢和耐藏特点

猕猴桃早熟品种黄皮果实采后在２０．０～３３．３℃高温下，７ｄ左右即达最佳食用状态，其时果实的糖酸比为１１．７６～１３．２３，固酸比为２５．００～２６．５０。在气温３３．３℃时出现呼吸高峰，二氧化碳值为７６．２５１２ｍｇ·ｋｇ－１·ｈ－１。此后可溶性固形物增速快于可溶性糖含量，而总酸量下降轻快。采后果实蛋白质和维生素Ｃ递降最快的气温条件是２８～３３℃，至最佳食用时蛋白质为１．５８％，维生素Ｃ５２５ｍｇ·ｋｇ－１。在室温贮藏下，多糖类保鲜液处理效果好于单糖类保鲜液。果体失重率达（５．５±０．５）％时是果皮开始皱缩的数量指标，对照样品３ｄ后果皮即皱缩，多糖类保鲜液处理的样品可保鲜１４ｄ。１～３℃低温下，用多糖类保鲜液和单糖类保鲜液处理果实并摊放在不封口的聚乙烯塑料袋内，有较好的贮藏效果。     

浅析苍南县林场经营方式的转变

在介绍了浙江省苍南县林场基本情况和木材经营局限性的基础上，阐述了林场的经营方式从木材经营转向以大力发展森林旅游业，实施森林景观改造，为社会提供森林生态服务的生态经营，并提出了生态经营的管理措施。