杨树腐烂病拮抗细菌的筛选及其定殖研究

通过平板对峙培养,从1 013株分离于杨树干部的拮抗细菌中筛选出13株对杨树腐烂病病原菌(Valsa sordida)有较强拮抗作用的菌株;再结合发酵液的生长抑菌率测定,进一步筛选出了抑菌作用最强的JK-SH007和JK-SX001两株拮抗细菌.两拮抗菌株定殖的研究结果表明,JK-SH007、JK-SX001对杨树腐烂病病原菌的生长及孢子萌发具有较好的抑制作用,而对宿主无毒害作用,具有内生性,能在杨树体内较长期定殖,且对宿主具有显著的促生作用.     

浅述林木病媒昆虫检疫的重要性

在众多的有害生物中,林木病原物危害越来越为人们所关注.许多国家采取措施,严防外来病害入侵,以保护本国的绿色家园.     

应用特异引物组合检测松材线虫

采用特异引物组合对枯死松树内分离的松材线虫、拟松材线虫及其他线虫进行检测。结果表明,所有松材线虫株系均扩增出一条860 bp的清晰、明亮的条带,而拟松材线虫、其他线虫均无扩增产物。利用此特异引物组合构建了松材线虫检测试剂盒。采用本试剂盒可以在较短时间内对线虫进行鉴定。整个检测过程约需3 h,实现了对松材线虫的快速检测目标。检测结果便于判读,适合于生产上应用。     

松材线虫Bxpel2基因的克隆及RNA干扰载体构建

[目的]为了构建松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)果胶酶Bxpel2基因干扰载体.[方法]通过Trizol 法提取松材线虫总RNA,反转录合成cDNA,设计带T₇启动子的果胶酶Bxpel2基因引物,以cDNA为模板扩增出果胶酶Bxpel2基因片段,连接到RNA干扰载体,再以干扰载体为模板,PCR扩增出目的片段后进行测序鉴定,合成果胶酶Bxpel2基因双链RNA(dsRNA),采用RT-PCR检测松材线虫Bxpel2基因干扰后的表达情况.[结果]表明:1)提取的松材线虫总RNA完整性好,无降解;2)成功克隆出松材线虫果胶酶Bxpel2基因片段(790 bp)并将其连接至pMD19-T载体;3)以RNA干扰载体为模板合成dsRNA,浓度分别为1.313 mg·mL^-1和1.152 mg·mL^-1;4)RT-PCR结果显示,松材线虫经过dsRNA干扰后,Bxpel2基因表达基本受到抑制.[结论]成功构建松材线虫果胶酶Bxpel2基因干扰载体,为进一步研究Bxpel2基因在松材线虫致病过程中的作用和功能奠定了良好的基础.     

蜡样芽孢杆菌NJSZ-13中蛋白酶ATP-α与ClpX的杀线虫活性研究

【目的】阐明蜡样芽孢杆菌NJSZ-13中杀线蛋白酶ATP-α与ClpX的杀线分子机制,构建杀线蛋白酶ATP-α与ClpX的原核表达载体。【方法】克隆杀线蛋白酶编码基因atpA与clpX,利用基因工程手段对杀线蛋白酶编码基因进行PCR扩增,并与载体pET-21b连接构建重组载体,提取重组质粒转入蛋白表达载体大肠杆菌BL21(DE3)。利用菌落PCR和测序验证转化效果。加入IPTG诱导蛋白表达,使用Ni-NTA柱进行重组蛋白的纯化,利用SDS-PAGE与Western blot验证ATP-α与ClpX纯化效果并进行杀线活性测定。【结果】菌落PCR验证和测序表明,重组载体中含有蛋白酶编码基因atpA与clpX,且基因序列与参考序列一致,证明目的基因已经成功插入BL21(DE3)表达载体中。SDSPAGE与Western blot验证表明,重组蛋白得到正确诱导与纯化,成功构建杀线蛋白酶ATP-α与ClpX的原核表达载体。杀线活性测定结果表明ATP-α与ClpX均具有较强的杀线效果。ATP-α在72 h达到66.75%的杀线率,ClpX在72 h达到75.46%的杀线率。同时,两个蛋白酶共同作用...     

松材线虫细胞色素cyp-13A11基因RNA干扰载体的构建及其功能分析

[目的]构建松材线虫cyp-13A11基因RNA干扰载体,研究cyp-13A11基因的功能,为松材线虫病的生物防治提供理论依据.[方法]本文通过设计特异性引物,扩增松材线虫cyp-13A11基因片段,构建至pEASY-T1干扰载体上并转入Trans1-T1大肠杆菌菌株.采用浸泡法对松材线虫进行RNA干扰,通过qRT-P...     

外生菌根菌对抗性黑松和赤松不同家系生长影响

为了提高从日本引进的抗松材线虫病的黑松和赤松优良家系在引种地新环境下的成活和生长能力,2005～2006年对松树抗性家系开展了优良外生菌根菌肥的施用试验.连续跟踪调查发现,抗性赤松和黑松9个家系施用Be菌肥后,大部分家系的苗高和地径生长量比对照提高或显著提高;5种外生菌根菌剂(Ap、La、Be、Pt1和Pt2)对抗性黑松的促生作用显著,对地径的促生效果优于苗高,且各菌根菌肥间的促生作用差异不明显;对3种菌根菌(Be、La、Rl)的固体菌剂和泥浆菌刺进行施用效果比较,表明Rl使用泥浆菌剂蘸根施用效果优于固体菌剂直接施用;Be和La则因家系不同效果有所不同.总体来看抗性黑松和赤松采用菌根化造林明显提高了松树生长量.     

一种新型复配药剂2%阿维菌素·6%氟吡菌酰胺对松材线虫毒力药效

【目的】研究新型复配药剂2%阿维菌素·6%氟吡菌酰胺在防治松材线虫病方面的潜力,旨在探索一种可能替代阿维菌素和甲维盐的新药剂新配方。【方法】将复配药剂2%阿维菌素·6%氟吡菌酰胺与5%阿维菌素和5%氟吡菌酰胺进行毒力药效对比。通过浸虫法进行室内杀线效果试验,分析3种药剂对松材线虫的致死效果。分别用3种药剂LC₂₀(亚致死浓度)的药量均匀喷雾在灰葡萄孢上,观察在不同药剂处理下松材线虫在灰葡萄孢上的取食情况及松材线虫生长繁殖数量,计算亚致死浓度下松材线虫的繁殖速率。收集松材线虫卵于皿底,加入不同浓度药剂于培养皿,24 h后观察卵孵化情况,计算卵孵化率,并用蔡司荧光显微镜观察卵形态。将松材线虫与药剂混合置于梯度温度培养箱,分析不同温度条件下复配药剂2%阿维菌素·6%氟吡菌酰胺对松材线虫杀线效果。【结果】1) 3种药剂处理松材线虫24 h后,2%阿维菌素·6%氟吡菌酰胺、5%阿维菌素、5%氟吡菌酰胺的LC₅₀(致死中浓度)分别为2.020 8、51.153 6和21.607 1 mg·L^-1,LC₂₀分别为...     

松树脂溃疡病菌及其近缘种AFLP分析

利用AFLP分子标记技术对松树脂溃疡病菌及其近缘种进行DNA指纹分析,筛选出10对多态性较高的引物.上述引物在供试的9种17个菌株中共扩增出298条带,其中有多态性带283条,多态性位点百分率为94.97%.每对引物产生的多态性位点百分率在89.29%-100%之间,表明松树脂溃疡病菌及其近缘种间在DNA水平上存在广泛变异.根据AFLP标记结果计算松树脂溃疡病菌及其近缘种间的相似系数,对它们的亲缘关系进行定量描述.聚类分析结果表明,菌株间的聚类与生物学种分类的结果一致.分析引物E-AT/M-CAA绘制的镰刀菌AFLP指纹图谱遗传多样性,确定李瑟组镰刀菌各交配群的特异带、差异带,区分供试的7个交配群.     

松材线虫病病原学研究的几个问题

松材线虫病作为一种病原主导性病害,病原物在病害的发生、发展中具有主导地位。该文对松材线虫病的病原、致病机制及其病害流行等方面的研究进展进行了综述,并指出了松材线虫致病机制后续研究的关键问题。