溃疡病菌Botryosphaeria dothidea粗毒素产生的条件及特性

为了研究溃疡病菌的致病机制,以葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea产生的毒素对北京杨Populus×beijingensis愈合组织的褐化程度为评价指标,时溃疡病菌产生粗毒素的条件和粗毒素的基本特性进行了初步研究.结果表明,溃疡病菌在改良Fries No.3液体培养基,25℃温度,光照,振荡培养,21 d后所得的粗毒素毒性最强;该病原菌在偏酸性和中性条件(pH 5.60和7.00)下易于产毒;产生的粗毒素对热不稳定,经121℃高温,0.11 MPa压力处理15 min后,其生物活性丧失;这种粗毒素对酸碱具有一定的稳定性,pH 4.69及8.69时,粗毒素的生物活性虽有一定程度的下降,但与自然pH条件下的粗毒素的生物活性差异不显著.图5表3参18     

树木溃疡病菌Botryosphaeria dothidea不同菌株致病力分化与产毒强弱的关系

为了研究溃疡病菌致病力分化与其产毒强弱间的关系,以来源于不同地区、不同寄主上的13个葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea菌株及其毒素原液（培养滤液）对北京杨Populus × beijingensis的 30 cm长枝条的致病程度及毒害程度为评价指标,对供试13个溃疡病菌菌株致病力分化、产毒强弱以及致病力分化与产毒强弱间的关系进行了研究。结果表明:供试13个溃疡病菌菌株致病力分化和其产毒强弱差异均极显著,达到0.01显著水平。聚类分析将13个菌株分成强、中、弱等3种不同的致病类群和强、中、弱等3种不同的产毒类群。不同溃疡病菌菌株产毒强弱与其致病力强弱有明显的正相关性,相关系数为0.854。图7表3参13     

松针褐斑病的发生与防治

湿地松(Pinus elliottii)和火炬松(P.taeda)自30年代引进我国南方一些地区试种以来,表现良好,干形通直,早期生长迅速,对松毛虫的抵抗性强,深为群众喜爱。1973年以后,我国每年都进口湿地松和火炬松种子,在南方各省广为栽培。1978年,我们首先在福建省顺昌县洋口林场和沙县官庄林场的湿地松幼林中发现松针褐斑     

农杆菌介导的异角状拟盘多毛孢菌T-DNA转化子生物学特性分析

从根癌农杆菌介导的异角状拟盘多毛孢菌菌株的转化子库中筛选出15株形态特征变化显著且遗传稳定的转化子,并从中挑选3株转化子进行Southern blot检测,证实了转化子基因组DNA中含有T-DNA插入片段.分别对15株转化子的菌落形态、菌落生长速度、产孢量、致病性等进行分析,结果表明,部分转化子的生物学特性发生了显著变化,为探讨异角状拟盘多毛孢菌的致病机制和致病基因克隆等提供了理论依据.     

黑松13个抗病家系对松材线虫的抗性反应及组织病理学观察

 为评估自日本引进的抗性黑松对松材线虫(Pine Wood Nematode,PWN)的抗病性,选用3个不同来源的PWN强毒和中强毒虫株采用皮接法接种,对1.5年生的黑松13个优良家系进行抗病性测定。结果表明,引进的黑松大部分家系对3个PWN虫株都表现出一定的抗病性,但针对不同虫株,抗病各家系间差异明显,其中有7个家系(3、4、5、6、9、11和12号)表现良好。同时,为探讨引进黑松家系感染PWN后的组织病理反应,对12号抗性家系进行组织病理学研究。观察表明,松材线虫在抗性黑松和普通黑松中的纵向扩散速度差别不明显,但其在抗性黑松内的横向扩散速度比在普通黑松内要慢,且抗性黑松体内木射线细胞和围绕树脂道泌脂细胞的薄壁细胞,出现病变要比普通黑松晚;在接种后同一时间取茎段的同一部位发现,抗性松苗组织解剖结构及细胞的病变和破坏程度要比普通松苗轻。     

蜡样芽孢杆菌NJSZ-13对松材线虫生理生化指标的影响

使用蜡样芽孢杆菌NJSZ-13的菌悬液、发酵液、发酵滤液分别处理松材线虫AMA3虫株6、12、24、36 h,以无菌水和营养肉汤(NB)液体培养基处理作为对照，对处理后松材线虫体内的蛋白质质量浓度、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性和丙二醛(MDA)质量摩尔浓度进行检测。结果表明：经蜡样芽孢杆菌NJSZ-13处理后，松材线虫体内可溶性蛋白质质量浓度和POD、CAT、AchE活性在整个处理时间内均低于对照组，且均呈下降趋势；SOD和GSH-Px活性先升高后降低；MDA质量摩尔浓度逐渐上升。其中，菌悬液、发酵液和发酵滤液对松材线虫各种生理生化指标均有影响，其中发酵液的影响更大。通过蜡样芽孢杆菌NJSZ-13处理后线虫的各个生理效应可以推测，蜡样芽孢杆菌NJSZ-13对松材线虫的致死作用是综合性的，其中包括蛋白代谢、保护酶系统和神经系统等方面共同的作用。     

松材线虫侵染后马尾松几种生化物质质量分数的变化

以2年生马尾松(Pinus massoniana)盆栽苗为研究对象，对接种松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)AMA3虫株后马尾松营养物质(可溶性蛋白、可溶性糖和总糖)、次级代谢产物(总酚和黄酮)以及有机酸(苯甲酸和水杨酸)质量分数进行测定。结果表明：接种松材线虫后，马尾松茎干可溶性蛋白的质量分数呈现先升高后降低再升高的趋势，接种松材线虫后1.0 d,可溶性蛋白的质量分数显著高于对照组(P<0.05),在4.0～10.0 d均低于对照组；马尾松茎干可溶性糖的质量分数总体上呈现较低水平；马尾松茎干总糖和总酚的质量分数均呈现先升高后降低的趋势，总糖的质量分数在0.5 d达到峰值，而总酚的质量分数在4 d达到峰值，随后下降。马尾松茎干黄酮、苯甲酸和水杨酸的质量分数总体上呈现较高水平，且在7 d达到峰值，随后下降。因此，松材线虫的侵染对松树体内营养物质、次级代谢产物及有机酸的质量分数均有影响，其中，马尾松苗茎干苯甲酸和水杨酸的质量分数对病害的早期诊断具有潜在应用价值。     

抗松材线虫病马尾松种源的抗性相关基因分析

为了从转录组水平探讨抗病马尾松种源对松材线虫的响应机制。以抗病马尾松GD5种源为试验材料，普通马尾松SX1种源为对照，利用RNA-seq技术通过Illumina高通量测序平台对松材线虫诱导前后的试验材料进行转录组测序和差异基因表达分析。试验共获得65 889条unigenes，平均长度为906.85 bp，其中40 478条（61.43%）unigenes基于Nr、GO、COG、KEGG等多个公共数据库获得了功能注释。抗病马尾松GD5种源在接种松材线虫后差异表达基因数量为3 247条，包括2 308条基因表达显著上调，939条基因表达显著下调。其中有1 961条（60.39%）差异表达基因被注释到GO数据库中，有504条（15.52%）差异表达基因被注释到233 条pathway。普通马尾松SX1种源在松材线虫诱导过程中产生了更多的差异表达基因。两个马尾松种源富集的GO条目和pathway差异也较大。抗病马尾松GD5种源体内编码醛脱氢酶的5条基因和编码超氧化物歧化酶、过氧化物酶体原蛋白以及细胞色素b2的基因表达均显著上调，醛脱氢酶基因不仅富集于抗坏血酸和醛酸代谢途径中，还参与β-丙氨酸、赖氨酸、色氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、组氨酸、精氨酸和脯氨酸等氨基酸的代谢途径；参与氨基糖和核苷酸糖代谢途径的6条几丁质酶基因表达均显著上调；参与单萜生物合成的短链脱氢酶/还原酶2b及参与倍半萜和三萜生物合成的长叶烯合酶基因表达均显著上调，而参与二萜类生物合成的1(10),5-格玛吖啶-4-醇合酶、萜烯合酶、α-松油醇合酶、异丙二烯合酶以及2-甲基-3-丁烯-2-醇合酶等表达均显著下调。抗病马尾松GD5种源对松材线虫的胁迫响应是多基因和多信号途径共同参与调控的复杂防御反应，是全局性系统性的响应模式。与抗性相关的醛脱氢酶、几丁质酶等编码基因为后期相关抗性基因的研究提供了参考。     

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和抗生素混合药剂对松材线虫病的防治效果

为进一步弄清细菌在松材线虫病中的作用,探明甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和抗生素联合应用防治松材线虫病的效果,从松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)携带的细菌中筛选出能显著促进松材线虫存活、繁殖和加重病害发生的菌株,通过药敏试验,在30种抗生素中筛选出对病害相关细菌有较强抑菌活性的高效抗生素,研究甲维盐(甲氨基阿维菌素苯甲酸盐)对松材线虫携带致病细菌的抑制作用,并将高效抗生素和甲维盐混合,采用浸渍法测定混合液对松材线虫的毒杀性以及采用灌根法测定混合液对6月生马尾松苗(Pinus massoniana)松材线虫病防治效果。结果显示,相比菌株AMA3-2和AMA3-3,菌株AMA3-1对松材线虫的存活、繁殖和病害发生方面具有更好的促进作用。环丙沙星和米诺环素对AMA3-1有较好的抑菌活性,而甲维盐对AMA3-1没有抑制作用。当混合液或甲维盐质量浓度为500 mg/L时,松材线虫的致死率可达80%以上。不同浓度的高效抗生素处理下,松材线虫的校正死亡率维持在较低水平(0.74%～2.43%)。当药剂质量浓度是500mg/L时,在混合接种松材线虫和菌株AMA3-1前2 d及当...