深圳世界大学生运动会市民社会心理调查研究*

北京奥运会、广州亚运会以及深圳世界大学生运动会的成功举办，是举国体制的产物，更多体现为政府的意志。而老百姓们怎么看、怎么想的呢？从老百姓的视野去看我国举办的一系列大型国际体育赛事，是一个自下而上的视野。以深圳市市民为研究对象，运用社会心理学和社会学关于社会分层的理论，通过问卷调查和R型因子分析为主要方法，了解深圳市民对第26届世界大学生运动会的社会心理状态。为中国体育事业谋划后北京奥运时代迈向体育强国的发展战略，提供来自民众真实的社会心理反应。     

桑蓟马两种不同田间调查方法的对比试验

运用虫口数调查法和分级调查法两种方法,对2008年云南省蒙自县草坝镇湖桑32号品种桑园桑蓟马的为害程度作了调查,调查结果基本一致,但分级调查法更适合桑园虫口调查。     

黄瓜上甜瓜黄斑病毒寿光分离物的初步鉴定及序列分析

在山东寿光黄瓜保护地种植区采集到疑似感染甜瓜黄斑病毒(Melon yellow spot virus,MYSV)的黄瓜病叶,采用RT-PCR对其进行检测,将扩增产物连接到pEASY-T1 Simple克隆载体后进行测序,结果显示目的片段的大小为505bp,与预期结果一致;序列同源性比对分析结果表明,黄瓜上MYSV寿光分离物与中国三亚的MYSV-Sanya分离物(甜瓜-GQ397254)和中国台湾MYSV-TW(西瓜-FJ386391)亲缘关系较近,同源性可达到98%。     

番茄黄化曲叶病毒CP基因的原核表达载体构建选择

[目的]筛选出目的蛋白能够高效表达的重组质粒。[方法]利用原核表达载体pET-32a(+)和pET-28a(+)成功构建了番茄黄化曲叶病毒(Tomato Yellow Leaf Curl Virus,TYLCV)外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因的重组质粒p32a-CP和p28a-CP,并通过PCR和双酶切鉴定了序列连接的正确性;再分别将2个载体转化至BL21(DE3)中,采用不同浓度的IPTG对其进行诱导表达,并进行SDS-PAGE电泳检测。[结果]测序结果显示TYLCV-CP基因已定向插入p32a-CP和p28a-CP中;SDS-PAGE电泳结果显示分子量约为50 kD的目的蛋白在重组载体p32a-CP中得到了高效表达,而在重组载体p28a-CP中未表达。[结论]为下一步的抗体制备及TYLCV的免疫学检测奠定了基础。     

RT-PCR克隆广谱抗病基因NPR1及其蛋白表达载体构建

[目的]克隆植物广谱抗病基因NPR1并构建其蛋白表达载体。[方法]提取拟南芥总RNA,设计相关引物,采用反转录PCR方法克隆NPR1基因;利用酶切连接方法,将该基因正向导入蛋白表达载体。[结果]经过相关检验,将NPR1正向插入pMXB10载体中,得到了pMXB10-NPR1蛋白表达载体。[结论]成功构建了包含NPR1的蛋白表达载体。     

云果1号果桑初夏大田硬枝扦插试验

为了提高果桑扦插育苗成活率,降低育苗成本,探索育苗的实用技术,于初夏运用头年生采果后的果桑枝条,采用地膜覆盖、遮阳网遮荫2种处理方式进行大田扦插试验,结果显示,遮阳网覆盖处理的扦插成活率和出苗率更高,地膜覆盖处理的扦插成活率较低,但其苗木生长势更好。     

番茄黄化曲叶病毒Rep基因植物表达载体的构建及对番茄的遗传转化

克隆番茄黄化曲叶病毒的复制酶基因(TYLCV-Rep),并构建其植物表达载体,通过农杆菌介导法转入番茄子叶外植体。经过共培养、潮霉素筛选和分化再生,获得21株潮霉素抗性植株。PCR检测和Southern Blot检测结果表明,有3株呈阳性检测反应,说明TYLCV-Rep基因已整合到番茄基因组中,阳性率为14.3%。烟粉虱接种试验结果表明,番茄转基因植株较非转基因植株对番茄黄化曲叶病毒的抗性明显增强。     

瓜类褪绿黄化病毒在山东省的流行调查及西葫芦分离物全基因组扩增与序列分析

瓜类褪绿黄化病毒(cucurbit chlorotic yellows virus, CCYV)给我国葫芦科作物造成了严重的经济损失。2014—2019年持续调查山东葫芦科作物产区CCYV的发生情况。调查结果表明：CCYV可以自然侵染西瓜、甜瓜、南瓜、黄瓜和西葫芦,样品检出率由2014年的1.7%增加到2019年的29.1%,西葫芦地块发病严重有进一步蔓延的趋势。利用RT-PCR结合RACE技术扩增CCYV西葫芦分离物全基因组序列。结果表明：CCYV西葫芦分离株的基因组RNA1和RNA2与GenBank分离株的相似性均为99.6%～100%,基于CCYV全基因组的系统发育进化树均聚类在一个分支上,与各个蛋白的进化树和相似性分析结果一致,CCYV在传播的过程中与寄主无关但可能跟地理位置有关。本研究扩增分析了CCYV西葫芦分离物的基因组序列,对CCYV的变异现状和进化趋势研究具有一定的参考价值。     

20%噻唑锌悬浮剂对桑树及家蚕的安全性评价

噻唑锌是一种新型的杂环类杀菌剂。配制20%噻唑锌悬浮剂4个浓度梯度100X(2000mg/L)、50X(4000mg/L)、25X(8000mg/L)、12.5X(16000mg/L)和CK(清水对照),采用添食毒叶法对3~5龄期家蚕进行急性毒性试验;配制3个浓度梯度100X(2000mg/L)、200X(1000mg/L)、400X(500Mg/L)和CK(清水对照)进行田间用药,观察对桑树及家蚕的安全性。结果表明20%噻唑锌比推荐浓度高出20倍(即8000mg/L)时才出现家蚕急性中毒症状;田间使用比推荐浓度高出1倍、2倍、4倍浓度对桑树和家蚕都比较安全,属低毒型杀菌剂,是一种可在桑树上推广使用的新型广普杀菌剂。     

番茄褪绿病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法

根据番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)热激蛋白70(Hsp70)的基因序列,设计ToCV实时荧光定量PCR特异引物。利用重组质粒ToCV-1为标准品建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量方法。针对引物浓度、退火温度、特异性、灵敏度、重复性和稳定性进行系列优化。结果表明,最适退火温度为63℃,最适引物浓度为0.3μmol·L~(-1)。熔解曲线为特异性单峰,表明其特异性良好。建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR较常规PCR灵敏100倍,且具有良好的重复性和稳定性。基于SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR技术建立的ToCV检测方法,速度快、特异性强、灵敏度高、重复性好,可以用于ToCV的定量检测。