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【目的】对香蕉果实非特异性磷脂酶C基因(MaNPC1)开放阅读框(ORF)进行原核表达,并制备其多克隆抗体,为深入探究MaNPC1在香蕉果实抵御炭疽病中的作用机制提供理论依据。【方法】克隆MaNPC1基因ORF序列,对其进行生物信息学分析及抗原性预测,并通过双酶切法构建其原核表达载体,利用热激法转入大肠杆菌Rosetta 2(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,重组蛋白经Ni-NTA树脂层析柱纯化后免疫新西兰兔,以制备多克隆抗体。同时,运用Western blotting和实时荧光定量PCR分别检测香蕉果实贮藏过程中在炭疽病侵染胁迫下MaNPC1蛋白表达水平及MaNPC1基因相对表达量。【结果】重组质粒pGEX-6p-3-MaNPC1经双酶切后得到1650 bp的特异性条带,说明原核表达载体构建成功,将其转入大肠杆菌Rosetta 2(DE3)感受态细胞后成功表达。MaNPC1蛋白分子式为C2747H4249N769O793S10,分子量为61.06 k D,理论等电点(pI)为8.96;丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和丝氨酸含量较高,分别占氨基酸总数的8.7%、8.2%、7.8%和7.7%;不稳定指数为47.14,表明其为不稳定蛋白;蛋白抗原区段丰富且亲水性氨基酸数目明显高于疏水性氨基酸,有利于后续抗体的制备。制备的多克隆抗体效价较高,为1∶2048000。Western blotting检测发现,香蕉果实贮藏过程中MaNPC1蛋白表达水平呈上升—下降—上升的变化趋势;炭疽病侵染组MaNPC1蛋白除贮藏15 d时的表达水平比对照组低外,其他贮藏时间均略高于对照组。实时荧光定量PCR检测结果表明,MaNPC1基因相对表达量在香蕉果实贮藏过程中呈逐渐上升趋势;贮藏3~15 d,炭疽病侵染组MaNPC1基因相对表达量均显著高于对照组(P<0.05)。【结论】炭疽病侵染能提高MaNPC1蛋白表达水平,故推测MaNPC1蛋白参与香蕉果实抵抗炭疽病侵染。 相似文献
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广东桑桑枝总黄酮含量测定及与体外抗氧化活性的相关性研究 总被引:5,自引:0,他引:5
为了探讨桑枝抗氧化作用的物质基础,进一步开发桑枝的药用功能,采用比色法对广东桑不同品种及不同生长季节桑枝的总黄酮含量、总抗氧化活性、.OH和O2-.清除作用进行了测定,结果表明:品种和生长季节对桑枝总黄酮含量和体外抗氧化活性有显著的影响(P<0.05)。分析结果还显示:染色体倍数性对桑枝总黄酮含量和体外抗氧化活性无显著的影响(P>0.05);桑枝总黄酮含量与抗氧化活性间呈现显著的正相关关系(P<0.01)。 相似文献
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[目的]探讨仲丁醇(2-butanol)对龙眼采后品质、抑制褐变和衰老的影响,为维持龙眼采后品质和延长贮藏期提供理论依据.[方法]以石硖龙眼果实为试验材料,研究0.05%仲丁醇处理对龙眼低温(4℃)贮藏过程中果实失重率、果皮失水率、褐变指数、果肉自溶指数、可溶性固形物含量、可定量酸含量、呼吸强度和乙烯释放量等指标变化的影响.[结果]仲丁醇处理能抑制龙眼果实失重和果皮水分损失;从贮藏的第5d开始,仲丁醇处理可延迟果皮褐变和果实自溶;在第15 d后,仲丁醇处理显著抑制可溶性固形物的分解和可滴定酸的产生(P<0.05);此外,仲丁醇处理能延缓龙眼果实呼吸作用和乙烯释放.[结论]适当浓度的仲丁醇有助于维护龙眼采后果实品质,延缓果实衰老褐变. 相似文献
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【目的】探索壶瓶碎米荠中粗黄酮提取的最佳工艺、硒对壶瓶碎米荠粗黄酮提取率的影响以及硒对粗黄酮成分的影响.【方法】通过单因素试验法和正交试验法探索乙醇体积分数、提取温度和时间以及料液比对粗黄酮提取率的影响,采用微波消解-原子荧光法检测硒含量,液-质联用法测定黄酮成分变化.【结果】壶瓶碎米荠粗黄酮提取最佳工艺为乙醇体积分数45%、提取温度65℃、提取时间5 h、料液比为1∶20,在此条件下粗黄酮提取率达到1.902 5%.不同质量浓度硒处理下的壶瓶碎米荠粗黄酮提取率不同,硒质量浓度为0~50μg/mL时黄酮提取率呈上升趋势,大于50μg/mL时,粗黄酮提取率呈下降趋势,但粗黄酮中硒含量呈上升趋势.主效成分分析(PCA)结果表明,高质量浓度硒处理壶瓶碎米荠对其叶和根黄酮类物质有显著影响.根中五甲氧基黄酮含量呈上升的趋势,单宁和5,7-二羟基-2-苯并吡喃-4-酮5-O-己糖苷衍生物的含量呈下降趋势.叶中木犀草素C-sinapoyl己糖苷的含量呈上升的趋势,单宁、五甲氧基黄酮等6种黄酮类物质含量呈下降趋势.【结论】研究结果为壶瓶碎米荠粗黄酮提取以及进一步深入研究提供依据. 相似文献