抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库的构建及筛选

为了构建抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体库,从中筛选抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库特异性单链抗体,试验提取患者外周淋巴细胞总RNA,以总RNA为模板,通过RT-PCR技术分别扩增出H链和L链可变区基因,采用SOE-PCR方法将VH和VL片段随机拼接成ScFv片段,然后将ScFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转E.coil TG1,构建抗乙肝病毒人源单链抗体库,并从中筛选阳性克隆抗体。结果表明:经过5轮筛选,获得2株能与乙肝病毒抗原特异性结合的阳性克隆。说明利用噬菌体抗体技术可不经免疫制备抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体。     

抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌鼠源化噬菌体抗体库的构建及筛选

用灭活的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌免疫小鼠后,取出小鼠脾脏提取总RNA,以RT-PCR扩增小鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,以重叠延伸PCR(SOE-PCR)法将VH和VL拼接成ScFv基因,克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中,转化大肠杆菌E.coli TG1,构建鼠源抗金黄色葡萄天然噬菌体抗体库。研究结果表明,构建的鼠源性抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库库容为3.2×106,多样性良好,共筛选出8个阳性克隆。说明已成功构建抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库,为筛选有效治疗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌奠定了基础。     

蛔虫抗原基因ALAg克隆及序列分析

为了确定蛔虫基因工程疫苗的候选基因,试验以蛔虫幼虫的RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增出ALAg基因,扩增产物克隆到pMD18-T载体,筛选阳性克隆测序并进行Blast分析。结果表明:该基因与GenBank公布的猪蛔虫As37抗原基因(AB078971)的同源性为95%,与西式贝蛔虫Ag3抗原基因(EU927450)的同源性为92%。说明ALAg基因是线虫特有的抗原基因。     

4种杨树新品种人工林碳储量研究

通过在不同区域的银中杨、小黑杨、青山杨、迎春五号杨人工林设置标准地,利用生物量法对这4种林分的碳储量进行了计量研究。结果表明：4种杨树新品种人工林碳储量与生物量成正比,以树干、树枝、树根、树叶的顺序由高到低排列;4种杨树新品种人工林年净固碳量分别为银中杨4.04t·hm-2·a-1、青山杨3.06t·hm-2·a-1、迎春五号杨2.46t·hm-2·a-1、小黑杨1.98t·hm-2·a-1。     

蛔虫抗原基因ALAg克隆及序列分析

为了确定蛔虫基因工程疫苗的候选基因,试验以蛔虫幼虫的RNA为模板,利用RT - PCR方法扩增出ALAg基因,扩增产物克隆到pMD18 -T载体,筛选阳性克隆测序并进行Blast分析.结果表明:该基因与GenBank公布的猪蛔虫As37抗原基因(AB078971)的同源性为95％,与西式贝蛔虫Ag3抗原基因(EU927...     

抗重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库的构建及筛选

为了构建重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库,试验用重组蛋白AD41抗原免疫接种Balb/c小鼠,提取小鼠脾脏总RNA,以总RNA为模板经RT-PCR合成cDNA,再以cDNA为模板,用小鼠免疫球蛋白重链和轻链设计引物,分别扩增重链和轻链可变区基因,利用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成单链抗体(ScFv)片段,将其克隆入质粒表达载体pCANTAB5E中,转化于大肠杆菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07援救构建噬菌体单链抗体库。结果表明:从30个噬菌体克隆中筛选到25个阳性克隆。说明成功地构建了抗重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库。     

凤冈野生天麻抗真菌肽基因(gaf)的克隆与序列分析

为了克隆凤冈野生天麻的抗真菌肤基因(gaf),以凤冈野生天麻的RNA为模板,采用RTPCR技术扩增抗真菌肤基因(guf),经克隆和测序结果显示:RT-PCR产物电泳扩增的目标条带长度为545 by;经测序和序列分析,该基因与Genebank中公布的序列编码天麻抗真菌蛋白的基因序列(AY032588)同源性达97%.此研...     

黑龙江省林木种质资源平台建设与构想

林木种质资源是林业行业和生态环境建设的物质基础.林木种质资源平台建设关乎林木种质资源创新、保护及开发利用等综合作用的发挥.文章从林业发展战略高度出发,介绍了黑龙江省林木种质资源现状,建设林木种质资源平台的意义及具体设想,对黑龙江省的林木种质资源的发掘、保护及利用具有重要的指导意义.