1型鹅星状病毒ORF2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

[目的] 利用原核表达系统表达1型鹅星状病毒（Goose astrovirus 1,GAstV-1）结构蛋白ORF2,并制备其多克隆抗体。[方法] 根据GAstV-1 TZ03株基因序列,对ORF2基因序列进行大肠杆菌密码子偏爱性优化和合成,将其克隆至原核表达载体pET-30a（+）,构建重组质粒pET-ORF2,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,IPTG诱导表达重组蛋白,通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白;将鉴定正确的重组蛋白纯化后免疫家兔制备多克隆抗体,以间接免疫荧光试验鉴定多克隆抗体的特异性。[结果] 酶切和测序结果显示,成功获得重组质粒pET-ORF2;SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白分子质量约为70 ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果表明,该蛋白能与抗His标签鼠单克隆抗体发生特异性反应。间接ELISA检测制备的兔抗ORF2蛋白多克隆抗体效价达1：128 000;间接免疫荧光试验结果显示,制备的多克隆抗体能与GAstV-1发生特异性反应。[结论] 原核表达的GAstV-1 ORF2重组蛋白具有良好的免疫原性,制备的兔源多克隆抗体具有较高的效价和特异性,为研制GAstV-1相关诊断试剂奠定了基础。     

应用多性状动物模型及DFREML法对罗曼褐壳蛋鸡纯系的遗传分析

采用多性状动物模型BLUP和非求导约束最大似然法（MTDFREML）估计了引进罗曼蛋鸡纯系配套组合中4个品系9个性状的方差组分和遗传参数,并估计了固定效应的BLUE值和动物个体的加性遗传效应值（育种值）,分析了测定性状的世代间遗传趋势和表型趋势。结果表明,4个系各性状的遗传力基本一致,体重、蛋重以及不同周期的产蛋量之间存在显著的正相关。蛋重与产蛋量存在较强的遗传负相关。六个世代选育后,各品系蛋重、产蛋量的平均育种值均有提高,表明对产蛋量和蛋重的选择是有效的。     

持续高温应激对肥育猪生产性能、胴体性状、背最长肌营养物质含量及肌纤维特性的影响

本试验旨在研究持续30℃的环境高温应激对肥育猪生产性能、胴体性状、背最长肌质构分析、营养物质含量及肌纤维特性的影响.试验选取8窝共24头体重为(79.0±1.5) kg的“杜长大”三元阉公猪,其中每3头来自同一窝的猪只随机分到3组,每组8个重复,每个重复1头,3组分别为对照组(22℃适温+自由采食)、高温应激组(30℃高温+自由采食)和采食量配对组(22℃适温+采食量配对),试验期21d.结果表明:1)持续高温应激显著降低肥育猪平均日增重(ADG) (P＜0.05),极显著降低肥育猪平均日采食量(ADFI) (P＜0.01).2)3组之间的肥育猪胴体重、胴体长、平均背膘厚和皮厚均差异不显著(P＞0.05),高温应激组肥育猪背最长肌大理石花纹评分在宰后24 h有低于对照组的趋势(P＜0.10).3)高温应激组肥育猪背最长肌的剪切力极显著高于对照组和采食量配对组(P＜0.01).与采食量配对组相比,高温应激组肥育猪背最长肌胶黏性和硬度有降低的趋势(P＜0.10).4)高温应激组和采食量配对组肥育猪背最长肌粗蛋白质含量显著高于对照组(P＜0.05),且2组的背最长肌肌内脂肪(IMF)含量极显著低于对照组(P＜0.01).5)高温应激组肥育猪背最长肌Ⅰ型肌纤维含量有低于采食量配对组的趋势(P＜0.10),采食量配对组的Ⅱx型肌纤维含量显著低于对照组(P＜0.05).由此可见,肥育后期高温应激会改变猪表观肉品质和肌肉营养物质含量.     

Preparation of Monoclonal Antibody Against Lasalocid and Deveopment of Indirect Competitive ELISA Detection Method

To prepare monoclonal antibodies (MAb) against lasalocid (LAS) and establish an indirect competitive ELISA (Ci-ELISA) detection method,conjuaction of LAS-BSA and LAS-OVA were synthetized as the immunogen and coating antigen by using active ester method in this experiment. After 6 times of immunization,the spleen cells of mice and myeloma cells were fused. Finally,a hybridoma cell line that could stably secrete specific MAb against LAS was screened.The immunological subtype of the MAb was identified as IgG1,and its light chain was κ type.The titer of the ascites was 1:16 000, which showed no cross activity with monensin sodium, salinomycin sodium,maduramycin,cefalotin sodium and streptomycin sulfate. Ci-ELISA method was established based on the MAb against LAS with the linear equation was y=0.376x-0.2374(R²=0.9914), and the linear range was 5 to 1 000 ng/mL and the IC₅₀ was 90.22 ng/mL. The method was used to detect LAS in spiked samples and the recovery rate was 81.76% to 102.41% within the detection range,indicating that the method was successfully established with good accuracy and high sensitivity. The preparation of MAb against LAS and the establishment of Ci-ELISA method laid the foundation for the development of LAS detection kit.     

磷酸二酯酶在猪卵巢的表达与相关中药对其活性的影响

为了测定猪卵巢组织磷酸二酯酶（PDE）同工酶基因表达类型与活性规律，研究相关中药的作用机理，为繁殖障碍性疾病治疗积累资料。作者提取中国实验用小型猪卵巢组织总RNA，应用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定PDE同工酶在其中的表达。选取催情散等复方及单味药，运用高效液相色谱法（HPLC）根据作用前后cAMP/cGMP含量的变化，分析对PDE活性的影响。结果检测的18个PDE亚型中除PDE4C外，PDE 1A、1B、1C、2A、3A、3B、4A、4B、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A、10A、11A mRNA在卵巢组织中均有表达。卵巢组织PDE活性较强，其中cGMP-PDE活性大于cAMP-PDE活性。催情散对卵巢组织cGMP-PDE活性均有较强的抑制作用，其中单味药淫阳藿作用最强。研究结果表明卵巢组织含有丰富的PDE同工酶，在通过环核苷酸水平卵巢机能调节中发挥着重要作用，中药催情散的作用与显著抑制cGMP-PDE活性有关。     

象草幼穗离体培养植株再生研究

以象草幼穗为外植体材料、改良的MS为基本培养基,研究了不同外源激素组合对不同发育时期幼穗愈伤组织诱导和植株再生能力的影响.结果表明,象草幼穗离体培养最适长度为2～5 cm;愈伤组织诱导培养基中添加4.0 mg/L 2,4-D 0.05 mg/L KT和4.0 mg/L 2,4-D 0.10 mg/L KT时,颗粒状愈伤组织诱导率分别为79.0%和72.6%;转入添加3.0 mg/L 2,4-D 0.2 mg/L 6-BA的继代培养基,分别有40.9%和74.0%的愈伤组织保持颗粒状结构;在添加2.0 mg/L CPPU 0.01 mg/L NAA和0.50 mg/L KT 0.5 mg/L IAA的分化培养基上,经过继代培养后的颗粒状愈伤组织的成苗率分别为36.4%和38.5%,总成苗率达50.2%和43.9%.3片叶大小的幼苗转入附加NAA 0.50 mg/L的1/2 MS壮根培养基,试管苗移栽成活率达95%以上.在继代培养过程中逐代选择外表呈白色、干燥、紧密、颗粒状的愈伤组织,是提高其植株再生能力的有效方法.     

中草药复方“健肝散”中水飞蓟宾含量的高效液相色谱法测定

采用十八烷基硅烷键合硅胶柱Welchrom-C18(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱,柱温30℃,流动相为乙腈-甲醇-5mL/L醋酸溶液(体积比为16∶26∶58),流速为1.00mL/min,检测波长287nm,进样量10μL。结果表明,水飞蓟宾的进样量在0.219μg～5.475μg(r=0.999 999,n=6)范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系,平均加样回收率为101.211%(n=6)。表明建立的高效液相色谱法快速、准确,重现性和精密度均良好,可为中草药复方"健肝散"的质量控制和评价提供技术支撑。     

融合表达猪圆环病毒2型ORF1和ORF2基因真核质粒的构建及对小鼠的免疫原性

用PCR法扩增出猪圆环病毒2型的Rep蛋白基因（933bp）和Cap蛋白基因（705bp）,将其定向克隆于真核表达载体pcDNA3.1（＋）的多克隆位点上,构建真核表达质粒pcDNA-ORF1-ORF2。将构建好的重组质粒pcD-NA-ORF1-ORF2按100μg/只腿部肌肉注射BALB/c小白鼠,同时设pcDNA-ORF1、pcDNA-ORF2、pcDNA3.1-（＋）、PCV2全毒疫苗和PBS为对照,共免疫2次,间隔2周。分别于首免后第0、7、14、21、28、42天用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖效应,用ELISA法检测小鼠的抗体水平;并于首免后第0、7、14、21、28天测定脾淋巴细胞中各细胞亚群的比例,对该核酸疫苗的免疫原性进行初步评价。结果显示,重组质粒能诱导鼠体产生较强的细胞免疫和体液免疫,并从免疫后第7天起所测各组数据均显著高于（P〈0.05）或极显著高于（P〈0.01）其他试验组。结果表明,将ORF1和ORF2基因共同用于PCV2核酸疫苗的研发具有很好的前景,为研究新型猪圆环病毒疫苗奠定了基础。     

猪圆环病毒2型IgM抗体间接ELISA的建立

猪圆环病毒2型(PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合症的重要原发性病原,其感染的早期检测有助于及时采取防控措施。以重组衣壳蛋白(Cap蛋白)作为包被抗原,通过对反应条件的优化,建立了PCV2 IgM抗体间接ELISA,其最适抗原包被浓度为1.25 μg／mL,最适血清稀释度为1∶100,临界值为0.35。该检测方法与其他5种常见猪疫病阳性血清无交叉反应,特异性良好。批内、批间重复试验的变异系数均在2%~6%,重复性好。对100份临床样本的检测结果表明,该检测方法与国外同类试剂盒相比,敏感性为90.3%,特异性为92.8%,总符合率为92%。试验结果表明,所建立的PCV2 IgM间接ELISA特异性好和敏感性高,适用于PCV2感染早期的流行病学调查。     

复合微生态制剂与饲用抗生素对肉雏鸡免疫性能和肠道微生物菌群的影响

试验选取240只1日龄的黄羽肉雏鸡,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 4个组,其中Ⅰ组为对照组,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别添加复合微生态制剂、头孢类药物和氟苯尼考药物,研究添加复合微生态制剂和饲用抗生素对肉雏鸡免疫性能和肠道菌群的影响.结果表明:复合微生态制剂对肉雏鸡法氏囊的发育有明显促进作用,9日龄时复合微生态制剂组法氏囊指数分别高出对...