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91.
92.
植物青枯菌LAMP检测方法的建立 总被引:5,自引:0,他引:5
【目的】由茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum,简称青枯菌)引起的青枯病(bacterial wilt of plants)是世界范围内危害最为严重的土传细菌病害之一,严重制约了多种经济作物的生产。建立高效、精准的早期诊断技术,是实现青枯病有效防控的基础。论文旨在建立一种能够特异检测青枯菌的环介导等温扩增方法(loop-mediated isothermal amplification, LAMP),实现青枯菌的田间快速检测。【方法】通过比对分析青枯菌的lpxC基因序列,并利用在线引物设计软件Primer Explorer Version 4.0得到4条LAMP特异性引物,F3(5′- CCTGTACGTGGTCGGCTAT-3′)、B3(5′-ACCGCAACACGGGATCA-3′)、FIP(5′-TACGCCGTTTCATCGGCCAGGTACACGGCGCACAAGT -3′)、BIP(5′-ATCGTCACGTTCGACAAGGTGGAATGCCGGCTGCAACTG-3′)。通过单因素变化试验对LAMP反应体系中的各参数进行优化,设置反应温度为60、61、62、63、64、65℃,设置镁离子浓度为2、4、6、8、10、12 mmol·L-1,设置内外引物浓度比为2﹕1、4﹕1、6﹕1、8﹕1、10﹕1、12﹕1,确定最优反应体系。以分离自不同寄主的24个青枯菌株为参试对象,5个非青枯菌株(Ralstonia mannitolilytica、Ralstonia pickettii、Enterobacter sp.、Acidovorax citrulli、Burkhoderia cepacia)为对照,验证LAMP检测方法的特异性。将青枯菌GMI1000菌株的基因组DNA进行10倍梯度系列稀释,以原液和101、102、103、104、105、106、107倍的稀释液为模板同步进行LAMP和普通PCR检测,比较两者的检测灵敏度。将马铃薯青枯病菌株Po41、姜青枯病菌株Z-Aq-1分别与马铃薯块茎和生姜根茎组织悬浮液混合,以LAMP检测方法对混合物进行检测,并以同样方法对表现典型萎蔫症状的人工接种番茄植株和健康植株以及田间马铃薯罹病块茎样品进行检测。反应结果直接通过观察产生的白色焦磷酸镁沉淀情况进行判定,或通过加入1 μL SYBR GreenⅠ荧光染料进行观察,阳性样品为绿色,阴性样品为橙色。【结果】建立了特异性检测青枯菌的LAMP方法,优化后确立了检测体系中FIP/BIP与F3/B3的浓度比为8﹕1(1.6﹕0.2 μmol·L-1),镁离子浓度为6 mmol·L-1,反应温度为63℃。特异性检测结果显示,仅参试青枯菌反应管中的反应液呈现绿色,表明建立的检测体系具有高度特异性。以青枯菌GMI1000菌株的DNA原液及不同梯度的稀释液为模板进行的LAMP和普通PCR检测结果显示,LAMP的检测灵敏度为1.42 pg,比普通PCR高10倍。能够快速准确地从植物组织悬浮液、罹病番茄植物组织及田间罹病样品中检测到青枯菌。【结论】建立的青枯菌LAMP检测方法,高效特异,操作简单,无需复杂仪器,肉眼可直接观察检测结果,适合基层和现场检测。 相似文献
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为明确干旱区栽培黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)抗旱生理对施氮(N)的响应,以尿素(含氮量46%)为氮源,于2018-2019年,设置0(CK)、50(N1)、100(N2)、150(N3)和200 g·株-1(N4)共5个施氮量梯度,在干旱胁迫0(土壤含水量30.8%和29.3%)、15(土... 相似文献
94.
[目的]研究选取稻飞虱为害后水稻叶片的有效特征波段,用于从大量成像光谱数据中快速识别和分类稻飞虱为害后的水稻叶片。[方法]实验采用多光谱成像系统对400-720 nm波段范围,每隔5 nm的稻飞虱为害后的水稻叶片进行多光谱成像。[结果]根据波段指数原理,计算得出波段515,510,710,555,630,535,505,530和595 nm具有较理想的波段指数值,这些波段信息量丰富、相关性小;实验通过两种分类方法分别对稻飞虱为害后的水稻叶片的分类精度予以计算,得出全波段和特征波段的分类精度均大于90.00%。[结论]这些选取的波段可以作为稻飞虱为害后水稻叶片的有效特征波段,可以用于从大范围农作物中快速识别和分类水稻叶片。 相似文献
95.
为寻求农田最佳废水利用模式,以当地习惯施氮量(冬小麦季施氮228 kg/hm2,夏玉米季施氮150 kg/hm2)为对照(CK),研究牛场废水灌溉与化肥配施对冬小麦和夏玉米轮作体系作物产量、吸氮量以及0~100 cm土层氮素分布的影响。结果表明,冬小麦越冬期废水灌溉与拔节期追施化肥处理冬小麦产量达到与CK同一水平,且冬小麦植株吸氮量超过了CK;冬小麦季土壤表层(0~20 cm)NO3--N量最高,20~100 cm土层NO3--N量随深度变化不明显,夏玉米收获后0~100 cm土层NO3--N量随深度增加先降低后升高,80~100 cm土层与0~20 cm土层NO3--N量达到同一水平。冬小麦越冬期灌溉废水与拔节期追施氮肥是养殖废水安全农田利用的最佳模式。 相似文献
96.
棉株体内几种生化物质与抗枯萎病之间关系的初步研究 总被引:34,自引:2,他引:34
棉花抗枯萎病品种86-1、陕1155,感病品种岱15、徐州142。在棉幼苗三叶期用采自河南王屯的棉枯萎菌7号小种接种,接种后12小时,各抗病品种的葡萄糖、核糖含量显著增加,而感病品种则相反。接种后抗病品种的苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性峰出现早于感病品种,相对酶活值也高于感病品种。接种后抗病品种蛋白质含量出现先低后高趋势,感病品种则始终保持较高水平。木质素含量的增加与棉花品种抗病性存在正相关性。伴随着PAL活性的增加,木质素含量也迅速增加。结果表明,棉花品种对枯萎病的抗性与PAL活性有密切关系,并通过代谢最终产物之一的木质素的增加得到表达。 相似文献
97.
冯洁 《新农村(黑龙江)》2010,(6):218-219
构建科学的中小城镇体系是我国中小城镇健康发展得关键。本文通过对广西壮族自治区浦北县现状城镇体系进行剖析,结合各乡镇经济条件和资源禀赋,明确各乡镇职能,进而构建浦北县城镇体系。 相似文献
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随着时代和社会的发展,计算机技术也在不断地进步,就目前来说,计算机领域的前景是相对理想的,但是可以看到的是,计算机虽然给人们的生活带来了很多好的变化,但是计算机也给人们的思想带来了一些不好的变化,但是无论如何,计算机一直以一种惊人的速度融入我们的生活,对学生的影响也在不断加深,文章就主要围绕计算机教学中的德育教育的渗透进行分析和研究。 相似文献
99.
农村居民主观幸福感指标体系的构建及其综合评价 总被引:2,自引:0,他引:2
一、前言
主观幸福感通过幸福指数加以衡量,幸福指数是指用以反映民众幸福感在某一时期内的数值和其在另一个作为比较标准的时期内的数值比较,它被视为体现主观生活质量的核心指标。2006年2月21日,中央公布了关于《中共中央国务院关于推进社会主义新农村建设的若干意见》的文件,将全面推进农村健康、可持续发展,统筹城乡经济社会发展作为促进我国经济发展的战略重点。 相似文献
100.