绿色荧光蛋白基因银耳表达载体构建及表达

以银耳芽孢为材料,由载体pEGFP、pCAMBIA1300经过Hind III和EcoRⅠ双酶切、连接、转化,重组质粒酶切验证,笔者成功构建了由双孢蘑菇gpd启动子调控EGFP基因的银耳真核表达载体,命名pCB-BEGFP。采用电击转化法将携带EGFP基因的银耳表达载体pCB-BEGFP转化到银耳芽孢。提取4个转化子基因组DNA,用EGFP基因特异引物 PCR扩增,电泳结果表明有与EGFP基因大小一致的特异带出现;荧光显微镜观察在再生培养基上的转化子可看到很强的绿光;其中一个转化子蛋白SDS-PAGE电泳,结果发现在大约27kD处有一明显的蛋白条带出现,与预期的蛋白分子量相近。以上结果证明EGFP基因转入银耳芽孢中,双孢蘑菇启动子可以调控外源基因的在银耳芽孢中正确表达。     

套种不同牧草的果园土壤对铵的吸附特性研究

以套种不同牧草的果园土壤为研究对象,通过室内等温吸附实验,分析比较了各个处理对氨态氮的吸附特性,并将结果用不同的数学模型拟合进行分析.结果表明:当土壤的氨浓度超过一临界值时,其对氨离子的吸附量会出现明显上升,而在此临界值以下则变化不明显;套种不同牧草可不同程度地提高土壤的铵吸附能力,具体表现为圆叶决明＞百喜草＞平托花生＞宽叶雀稗＞CK(自然生日本草);各处理土壤铵等温吸附与多项式拟合效果最佳,与Freundlich、Temkin方程拟合达显著水平,Langmuir方程的拟合结果较差.     

生草栽培方式对坡地果园氮磷流失的控制效果

采用径流小区法,研究自然生草和低、中、高不同施肥水平下人工生草的栽培方式对果园土壤流失量、径流量及氮磷面源污染的控制效果．结果表明：（1）自然生草和人工生草处理均可极显著降低果园径流总氮、可溶性总氮、氨态氮和硝态氮的含量及流失量,且自然生草与人工生草处理问的差异显著,而不同施肥水平下人工生草处理间的差异不显著;（2）自然生草和人工生草处理均可极显著降低果园径流总磷和可溶性磷的含量,不同施肥水平下人工生草处理均可极显著降低径流总磷和可溶性磷的流失量,且低、中、高肥处理间的差异不显著;（3）人工生草和自然生草处理的土壤流失量分别只有清耕处理（对照）的2．44％-2．96％和13．26％,均可极显著降低土壤流失量,人工生草处理的保土效果不同施肥水平间的差异不显著;（4）人工生草处理对于减少坡地果园的水土和养分流失有着显著或极显著的效果,人工生草和自然生草处理的全年径流量,土壤流失量,总氮、总磷含量分别为538．91m3·hm-1·a-1、22．7t·km-2·a-1、1．36kg·hm-2·a-1和0．18kg·hm-2·a-1。     

果园生草栽培水土保持效应研究进展

为了研究果园生草在水土保持中的作用,综述了国内外近年来果园生草对果园水土保持的相关因子研究,如土壤水分、结构、肥力、地温等果园小气候、水土流失综合、生草品种筛选等诸多方面,发现果园生草在水土保持作用方面研究还有待进一步开拓,特别是对成熟果园面源污染控制效果的研究还存在不足,今后还需从生草方式、生草品种筛选与应用、果园生草的配套技术、对土壤水分、地下水及水质的影响等方面进一步加强研究。     

福建省平和县琯溪蜜柚果园土壤磷环境风险评价研究

开展土壤磷环境风险评价对指导果园合理施肥和管理,减轻果园面源污染具有重要意义。采用土壤室内培养法,研究了平和县琯溪蜜柚果园土壤磷素环境敏感临界值,并据此划分了果园磷环境风险等级。结果表明:平和县琯溪蜜柚山地果园土壤磷素环境敏感临界值为96.3 mg?kg?1,耕地果园为62.3 mg?kg?1;提出平和县山地和耕地两类琯溪蜜柚果园土壤磷环境3级风险(高、中、低)划分标准;根据风险划分标准对果园0~30 cm土层土壤和果园剖面(0~100 cm)土壤有效磷进行评价,得出全县50.5%果园(48.4%山地果园,52.7%耕地果园)处于磷素环境高风险状态,12.2%果园(10.6%山地果园,13.8%耕地果园)处于磷素环境中风险状态,37.3%果园(41.0%山地果园,33.4%耕地果园)处于磷素环境低风险状态;供试42.1%果园剖面0~40 cm土层的磷环境处于高风险等级,甚至部分果园0~100 cm土层土壤都有流失风险。为减少面源污染危害,可对不同土壤磷环境风险状态琯溪蜜柚果园,采用不同的磷肥施用策略;过量施用磷肥易引起面源污染。     

琯溪蜜柚黑斑病菌分离鉴定及其致病性测定

为分离鉴定发生在福建省平和县的琯溪蜜柚黑斑病的病原菌,从果园中采集具有典型症状的病果,分离获得一种形态特征和rDNA-ITS序列与柑桔黑斑病菌不同的病菌分离物,并鉴定为柑桔叶点霉亚洲种。使用病菌分离物的无性世代的分生孢子及菌饼培养物,并以柑桔黑斑病菌作对照,接种柚果测定致病性。结果表明,病菌分离物回接产生与果园中病果相同的症状,并从接种发病的果实中重新分离到该病菌。因此,研究通过柯赫氏法则证实了柑桔叶点霉亚洲种是引起琯溪蜜柚黑斑病的病原菌。而对照菌株柑桔叶点霉也可以侵染琯溪蜜柚果实产生相同症状,有可能共同存在于琯溪蜜柚果园中为害。     

套种不同牧草的果园土壤对磷的吸附与解吸特性

采用恒温培养法研究了蜜柚果园自然生草和套种不同牧草后土壤对磷的吸附和解析特性。结果表明：果园土壤对磷的等温吸附、吸附量-解吸量曲线分别与常规的Langmuir方程、二次函数方程吻合。几种牧草果园土壤的最大吸附磷量依次为：圆叶决明＞百喜草＞自然生草CK、平托花生＞宽叶雀碑;供试的5种土壤中,人工生草的果园土壤对磷的解吸率均小于自然生草,表明人工生草能改善果园土壤对磷的缓冲能力。     

巢式PCR检测琯溪蜜柚黑斑病病原菌

利用特异性引物从琯溪蜜柚黑斑病菌基因组DNA中扩增出一条分子量为487 bp的特异性条带,准确地与疮痂病、炭疽病和黄斑病菌等蜜柚常发性真菌病害区分开.采用巢式PCR对该引物的检测灵敏度进行测定,结果显示,对于黑斑病菌基因组DNA,巢式PCR的检测灵敏度为100 fg/μL,灵敏度比常规PCR至少提高100倍;对于发病组织,巢式PCR可从病斑组织含量为100 μg的DNA样品中检测到黑斑病菌.采用巢式PCR检测技术,可从蜜柚的黑斑病显症组织和未显症组织特异性地检测到病原菌,且检出率分别为96.67％和90％.     

洛巴伊口蘑子实体抗氧化活性分析

采用分光光度法研究洛巴伊口蘑菌株Tr0005和Tr0013子实体的抗氧化活性,测定它们沸水提取液的还原能力和对羟基自由基的清除能力。结果表明：洛巴伊口蘑子实体的沸水提取液具有较强的抗氧化性。菌株Tr0005的还原能力高于Tr0013,也高于灵芝、香菇、金针菇和杏鲍菇;对羟基自由基的清除率测定发现,Tr0013的清除率为82.23%,Tr0005的为68.37%,均高于灵芝、金针菇和杏鲍菇。     

平和县琯溪蜜柚山地果园径流氮磷含量变化

为了解决平和县琯溪蜜柚过度种植,化肥、农药滥用导致环境污染的问题。通过实地调查与室内分析相结合的方法,调查了平和县琯溪蜜柚不同施肥状况山地果园径流氮磷含量情况。结果表明:(1)一年间果园径流磷含量(总磷和可溶磷含量)和氮含量(总氮、可溶性总氮、硝态氮、氨态氮含量)都有逐渐降低的态势,分别大于不同试验区汇水含量(山塘水、沟水、溪水和九龙江水);(2)径流N/P都大于6.5,果园径流磷含量为富营养化限制因素;果园径流硝态氮含量低于饮用水限制含量(10 mg/L);(3)试验区汇水全年总磷含量分别为0.403、0.280、0.503、0.417 mg/L,基本大于Ⅲ类水质要求(0.3 mg/L),全年氨氮含量分别为0.14、0.20、0.44、0.10 mg/L,达到Ⅱ类水质要求,总氮含量分别为3.77、3.49、3.89、3.38 mg/L,都大于Ⅴ类水质要求2.0 mg/L。果园径流总体上都达不到地表水环境质量标准要求,直接排放会产生水体富营养化。