一株猫免疫缺陷病毒的亚型鉴定

为了解哈尔滨地区猫免疫缺陷病毒(FIV)流行的亚型情况,试验于2016年1—4月份在哈尔滨市香坊区采集流浪猫全血40份进行血清学检测和分子生物学检测,通过ELISA抗体检测鉴定出一株FIV,从阳性血液样品中提取基因组DNA,通过巢氏PCR扩增得到目的片段env V3~V5高变区,并对该样品进行了序列分析及亚型鉴定。结果表明:该阳性样本为FIV A亚型。     

肉食动物肠道中芽孢杆菌的分离和降胆固醇能力的测定

为筛选、鉴定出降胆固醇芽孢杆菌,试验从健康狮、虎、狼等肉食动物粪便中分离得到3株菌,分别命名为L1、L2和L3。经形态学、染色特性和16S r DNA序列测定,鉴定出L1和L3为枯草芽孢杆菌,L2为蜡样芽胞杆菌。3株菌均具有良好的芽孢形成能力,芽孢形成率分别为82%、93%、91%。应用硫磷铁比色法对3株菌的体外降胆固醇能力进行测定,结果显示L1降胆固醇能力较弱,而L2、L3具有较强的胆固醇降解能力,其中L2在48 h内胆固醇降解率可达50%以上,这为相关降胆固醇药品和保健品的开发奠定了良好的基础。     

猫免疫缺陷病毒p24基因原核表达载体的构建及表达

为了研究猫免疫缺陷病毒(Feline immunodeficiency virus,FIV)的核衣壳蛋白(core nucleocapsid protein)——p24蛋白的免疫活性,试验根据Gen Bank中FIV的p24基因序列设计了1对引物,对FIV检测阳性的猫血液样本提取总RNA并进行反转录,PCR扩增p24基因,将此目的片段克隆到原核表达载体p ET-28a(+)中,构建获得重组质粒p ET-p24,并热转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,诱导蛋白表达后用SDS-PAGE和Western-blot进行鉴定,用FIV感染的猫阳性血清和重组p24蛋白免疫小鼠得到的多克隆抗体对表达蛋白的免疫原性和反应原性进行检测。结果表明:RNA反转录成c DNA后成功扩增出大小为622 bp的p24基因和构建出原核表达载体;构建成功的含p ETp24重组质粒的大肠杆菌诱导后能大量表达FIV-p24蛋白,并且p24蛋白以包涵体形式存在;p24蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。说明p24蛋白是具有生物学活性的蛋白,在猫免疫缺陷病的诊断和防治中具有重要意义。