犬传染性肝炎病原、诊断与实验免疫研究

首次应用原代和传代犬肾细胞从临床疑似犬传染性肝炎(ICH)和狐狸脑炎(FE)的犬、狐病料中分离获得4株腺病毒。经形态学、理化学、生物学等系统鉴定,证明为犬1型腺病毒(CAV-1),即犬传染性肝炎病毒ICHV)和狐狸脑炎病毒(FEV).以往对 ICH 犬肝测不出HA 效价的原因,是因为其中含有大量不耐热的非特异 HI 物和可与完整病毒竞争红细胞 HA 受体的单价游离血凝素.通过加热和加犬2型腺病毒(CAV-2)免疫血清的方法,可检出其中的 CAV-1血凝素而确定 ICH 诊断.用 ICH 犬肝中的游离血凝素免疫 ICH 易感犬,可使其产生抗 CAV-1HI抗体,获得 ICH 免疫.研究了用于检测 ICH 犬血清、腹水和肝脏样品的处理方法,首先建立了 ICH 微量补反诊断法;在对 ICH 犬肝 HA 特性研究的基础上,应用新鲜或醛化人0型红细胞和犬抗 CAV-1与 CAV-2血清,又研究成既可用于临床诊断又可用于抗体调查的微量血凝诊断法.进行了 CAV-1和 CAV-2弱毒苗的复制和实验免疫试验,证明 CAV-2弱毒复制苗对各类犬、狐均安全有效.而且对 CAV-1母源抗体有较强的抵抗力.通过回忆反应和特异淋转试验,汪明 CAV-2弱毒对 ICH 的免疫主要在于细胞免疫.     

2型犬腺病毒DNA不同酶酶切片段E_3区定位研究

从2型犬腺病毒的MDCK细胞培养物中提取线状双链病毒基因组DNA,利用限制性内切酶Pst Ⅰ、Bgl Ⅰ和Hind Ⅲ分别进行酶切,在1％琼脂糖凝胶上电泳,随后Southern印迹到尼龙膜上,利用Digoxin标记的2型犬腺病毒E_3区PCR产物与膜上DNA杂交,结果发现,E_3区探针分别与病毒DNA的PstIB片段、BglIAl片段和Hind ⅢA2、B2片段呈现阳性杂交反应。该结果为E_3区的克隆及犬腺病毒载体构建奠定了基础。     

凌源县犬病毒病的调查

在凌源地区五个品种的犬中,德国黑背犬的发病率最高.达65.3%;2～3月龄幼犬发病率(82.6%)高于其它年龄组的犬.抽样检查的11份样品,有10份血清为犬细小病毒(CPV)血凝抑制抗体阳性;10份粪便的CPV血凝阳性或疑似阳性,经电镜观察见有典型的细小病毒和冠状病毒颗粒,1份脏器样品见有典型犬瘟热病毒。从2份粪便样品中分离出CPV.     

犬传染性肝炎微量HA诊断研究

作者对犬传染性肝炎(ICH)微量血凝诊断法(MHA)从试剂、术式和样品处理方面进行了研究。肝脏样品采用60℃加热,3000 r/min离心的处理方法。术式采用总量为0.1mL的3排微量法,即血清样品的第1、2排分别加4单位1型犬腺病毒(CAV-1)和2型犬腺病毒(CAV-2)HA抗原,第3排加稀释液作为血清对照,同时测定CAV-1和CAV-2的HI抗体;检测肝脏和培养物样品HA效价,则用HA增强法,即第1、2排分别加稀释液和CAV-2血清为测定排,第3排加CAV-2和CAV-1两种血清为特异性抑制排。结果60份肝脏样品、80份细胞培养物和60份血清样品全部正确检出,与微量补反(MCF)检验结果全部相符。另外进行了新鲜和醛化人O型RBC比较试验,结果两者完全一致。