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猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆及在原核细胞中的表达 总被引:8,自引:0,他引:8
应用RT-PCR分两段扩增猪瘟病毒(HCV)石门株E2基因,然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一BglⅡ位点,将它们连接成为完整的E2基因,并克隆到PUC19质粒中,获得重 质粒PHCF2。另设计一对引物,以PHCF2为模板扩增出不含信号肽的E2基因,然后将其克隆到表达载体质粒pBV220和PET_28a(+)中,获得重组质粒PBVE2和PETE2,用酶切,PCR和序列分析鉴定E2基因插 相似文献
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减蛋综合征病毒末端片段的克隆及细胞内DNA重组 总被引:6,自引:0,他引:6
采用9~10日龄非免疫鸭胚增殖的减蛋综合征病毒(EDSV)AA-2毒株,经差速离心法浓缩纯化后,提取病毒基因组DNA。采用碱变性法除去病毒基因组共价结合的末端蛋白(TP)。用限制性内切酶HindⅢ水解纯化的EDSV基因组DNA。经低熔点琼脂糖凝胶电泳后,回收C、D、E片段。克隆到pUC19载体的HindⅢ和SmaⅠ双酶切位点及HindⅢ位点上,经蓝白斑筛选和单、双酶切鉴定,获得了pUHC、pUHD、pUHE重组质粒,其中pUHC含有末端片段。将EDSVSalⅠ水解产生并回收的大片段与pUHC在95℃水浴中变性,65℃复性后,用钙离子介导法,共转染50%~70%的单层鸭胚成纤维细胞,转染后36h开始产生细胞病变(CPE)。48h后将病变细胞反复冻融,经尿囊腔接种9~10日龄鸭胚,回收的尿囊液能凝集鸡红细胞,这种血凝性能被EDSV高免血清抑制,电镜下观察到腺病毒样颗粒。 相似文献
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抗原浓度与溶血面积成正比,应用SRH可以直接测定感染鸡组织中NDV抗原.其抗原含量顺序为脾>脑>肝>肺,未从血清中测到抗原,也未从接种La Sota弱毒四天后的各器官测到NDV抗原。 相似文献
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本文通过简述发展造林绿化的现状、目标和规划,进一步的提出对生态环境建设而言,造林绿化的意义,从而提出了一些推动造林绿化的措施建议。 相似文献
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减蛋综合征病毒33K蛋白基因克隆及结构分析 总被引:2,自引:0,他引:2
纯化的减蛋综合征病毒(EDSV)DNA经HindⅢ水解、0.8%琼脂糖电泳后,回收各DNA条带并克隆至pBluescriptKS载体,建立了EDSV基因文库,对33K蛋白基因进行了分析。本研究证实,EDSV33K蛋白基因含有2个外显子,与羊腺病毒(OAV)33K蛋白比较,N端编码产物的同源性为30.8%,C端的为60%。用RT-PCR扩增33KmRNA和cDNA克隆及序列分析证实,EDSV33K蛋白含有82碱基(nt)的内含子,去掉内含子33K蛋白基因能形成完整的ORF,其编码产物由177氨基酸(aa)组成,推测分子质量为2.06×104,与人5型腺病毒和OAV的同源性分别为28.1%和44.7%。 相似文献
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利用GIS分析技术、Voronoi图Cv值综合分析,探讨重庆市忠县农村居民点的空间机理,找出其分布的趋势性和规律性,为县、镇级土地规划和土地整治提供直观指导。根据聚落地理学的研究方法,建立Voronoi图、高程、坡度、坡向、道路、水系因子,通过空间分析法和定性定量分析法相结合的方法进行研究。结果表明忠县整体Cv值为85.52%,为集群分布,农村居民点在高程上主要分布在400~700 m;在7°—15°内分布最多,达到32.50%;在坡向影响下西北坡分布最多,达到14.95%;在道路因子下,农村居民点在50~100 m缓冲区内密度最高,达到64.38个/km2;农村居民点主要靠近在距离水源100~200 m。 相似文献
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减蛋综合征病毒全基因组DNA文库的构建及物理图谱分析 总被引:1,自引:0,他引:1
E D S V A A2 株纯化 D N A 经 Hind Ⅲ、 PstⅠ和 Sph Ⅰ水解后, 分别提取 D N A 片段并克隆至p Bluescript K S( + ) 和p G E M3 Zf ( + ) 载体, 构建了 E D S V 全基因文库。根据 E D S V D N A 片段和基因组 D N A 电泳迁移率计算, E D S V 基因组大小为329kb , 通过克隆片段酶谱鉴定, 杂交建立了 E D S V 限制性内切酶 Hind Ⅲ、 Pst Ⅰ和 Sph Ⅰ的物理图谱。 相似文献