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根据GenBank中已发表的猪链球菌2型38000蛋白基因核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,采用PCR方法,以四川分离株猪链球菌2型基因组DNA为模板扩增38000蛋白主要功能区基因。将PCR产物纯化后与pMD18-T连接转化宿主菌DH5α,提取阳性质粒,进行PCR和酶切鉴定。将目的片段定向克隆到表达载体pET32a中,经测序正确后,重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),于37℃、0.8mmol/LIPTG条件下进行诱导表达,结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子质量约为35000的重组蛋白,表达产物经纯化后,免疫印迹法(Western blotting)证实该重组蛋白可以与猪链球菌2型阳性血清发生特异性反应。 相似文献
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2005年在山东地区部分肉鸽养殖场出现鸽子大量死亡现象,从死亡鸽中分离到三株鸽Ⅰ型副粘病毒(SD05027,SD05028,SD05029),其鸡胚平均死亡时间(MDT)分别为69h,69.6h,81.6h;鸡脑内接种指数(ICPI)为1.31,1.43,1.48,证明此次分离的三株病毒株均属速发型新城疫病毒。应用RT-PCR技术对F基因重要功能区片段扩增后进行序列测定,分析表明,F蛋白裂解位点处的序列(112R/K-R-Q-K-R-117F)与新城疫强毒在这一区域的序列相符。与多株已报道的NDV参考株相应片段进行序列比对和基因进化树分析,将其鉴定为基因VIb型。 相似文献
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PRRS ELISA试剂盒检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
利用重组杆状病毒表达的PRRSV核衣壳蛋白作抗原制成ELISA诊断试剂盒,检测人工感染PRRSV猪血清、疫苗免疫抗体和田间血清,并与IDEXX公司生产的试剂盒进行比较。结果表明,该试剂盒在PRRSV感染后8天内就可检出感染性抗体,而用IDEXX公司生产的试剂盒在感染后的18天才检测到感染性抗体,对弱毒疫苗的免疫检测也基本能反映出疫苗的免疫应答状况。对华东地区PRRSV流行病学调查结果表明,PRRSV在国内普遍存在,同时也证明研制的试剂盒,是客观科学调查我国PRRS流行情较理想的检测工具。 相似文献
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为建立口蹄疫(FMD)快速检测方法,本研究以纯化的FMD病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3ABC作为捕捉抗原.金标FMDV抗原作为金标试剂,建立了检测FMD NSP 3ABC抗体的胶体金免疫层析试纸条(ICS).应用FMD ICS试验与UBI FMD NSP酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对反刍动物、猪的FMD标准阳性血清的不同滴度进行测定,结果表明ICS在检测反刍动物血清时的检测下限(1:64)与ELISA(1:128)接近,而检测猪血清时的检测下限(1:8)低于UBI NSP-ELISA试剂盒(1:64).同时用ICS和UBINSP-ELISA检测313份牛血清和111份羊血清,结果ICS检测牛血清时的敏感性和特异性分别为81.81%和96.69%,检测羊血清时敏感性和特异性分别为88.88%和95.10%;ICS与UBI NSP-ELISA用于检测牛血清时符合率为95.52%,用于检测羊血清时的符合率为94.59%.结果表明ICS适合在基层单位或养殖场进行自行检测. 相似文献
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猪生殖与呼吸综合征油乳剂灭活疫苗的制备及安全性试验 总被引:1,自引:0,他引:1
用本中心分离鉴定的猪生殖与呼吸综合征(PRRS)强毒株接种Marc-145细胞,制备病毒抗原液,毒价不低于10^-7.0TCID50/0.1mL。经一定浓度的甲醛溶液灭活后与油佐剂乳化制成油乳剂灭活疫苗3批。经对该制品的安全性能测定,结果表明该品对初生仔猪、断奶仔猪及妊娠母猪3倍剂量注射,均未出现不良反应,安全性良好;对母猪的繁殖性能不产生影响。 相似文献
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