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用RT-PCR法,以1株h5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,扩增了NP全基因cDNA.将cDNA克隆于pMD18-T载体,并对其进行测序.测序结果表明所克隆的1542个核苷酸的片段包含了核蛋白完整阅读框架,其中编码区为1497个核苷酸,编码498个氨基酸.将其序列与6株A型流感病毒NP基因序列进行比较,各毒株之间NP基因核苷酸序列同源性为92.5%~95.9%,编码的氨基酸同源性为97.0%~98.4%.本研究通过分子进化分析揭示了各毒株间的亲源关系. 相似文献
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PRRSV云南株的分离与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
从云南某猪场采取病料经RT-PCR检测为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS)阳性,将其处理后接种到猪肺泡巨噬细胞(PAM)和Marc-145细胞上。接种后3 d,猪肺巨噬细胞开始出现细胞病变(CPE);Marc-145细胞盲传3代后,细胞也出现了CPE。对出现CPE的细胞培养物,用RT-PCR法、间接免疫荧光试验进行检测,结果均为PRRSV阳性;细胞培养物经PEG初步浓缩后,接种到PRRSV阴性,PRV、CSFV抗体阳性的仔猪,15 d后猪只出现体温升高并伴有食欲减退,精神不振等症状。采血并用同上的RT-PCR法检测,结果为阳性;采血用同上的RT-PCR法检测,结果亦为阳性;用电镜对纯化后的病毒进行观察,可见有囊膜包裹的圆形病毒粒子,其直径约为50 nm;间接免疫荧光实验可见黄色荧光;TCID50测定其毒价为10-4.75/0.1 mL。该病毒对氯仿、紫外线、酸碱度变化(pH5.0或pH7.5)和热敏感;结果表明,已成功分离获得一株PRRSV云南地方流行毒株,命名为YN-1。 相似文献
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为了解云南省部分地区规模化猪场种公猪精液繁殖障碍病毒性病原的感染状况,应用PCR对2014年—2016年间云南省部分地区规模化猪场212份种公猪精液进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)5种与猪繁殖障碍有关的病原检测。结果表明,PPRSV阳性率为7.08%,CSFV阳性率为3.77%,PCV2阳性率为6.60%,PRV阳性率为3.30%,没有检测出PPV,PRRSV和PCV2的感染率呈上升趋势,其他疫病保持相对平稳态势。所有的混合感染样品中,均检测出了PRRSV,其中PRRSV和PCV2的混合感染最为常见。结果提示,控制猪场疫病发生的关键是控制PRRSV和PCV2的流行,有必要加强对种猪群的疫病病毒检测,推行种猪场主要疫病的控制与净化工作。 相似文献
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戊型肝炎病毒(HEV)研究多以灵长类动物为感染模型。由于灵长类动物价格昂贵,实验条件的控制和饲养管理较困难等原因,严重阻碍了HEV研究进展。本研究对应用树鼩(Tupaia belangeri)建立HEV感染模型的可行性进行了探索。从猪群中分离、鉴定HEV,经静脉注射途径感染树鼩,按计划采集粪便、血液以及器官组织,应用巢式RT PCR检测树鼩感染情况,观察感染后树鼩各器官组织病理学病化。结果发现,感染7d后血液、粪便、肝脏、小肠等样品可检测出HEV RNA,病毒血症持续约2周。组织病理学观察结果,人工感染HEV的树鼩肝脏可见静脉窦淤血、多发性淋巴细胞浸润、库普弗细胞增多等病变。研究结果表明树鼩对HEV具有易感性,感染后肝脏出现病毒性肝炎的病理学变化,具有作为戊型肝炎的感染模型的潜在价值。 相似文献
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鉴于牛流行热(BovineEphemeralFever,BEF)对养牛行业的危害以及荧光定量PCR技术高效、快速、精准的优点,本研究针对牛流行热病毒(Bovine Ephemeral Fever Virus,BEFV)G基因建立荧光定量PCR检测方法。并用所建立的荧光定量PCR检测方法对临床采集的样本进行检测。结果显示:在GenBank数据库中对BEFV全基因组序列进行比对分析,找出保守序列,设计1对扩增BEFV G基因片段的引物,通过分子克隆构建重组质粒制备标准曲线,扩增效率是95.1%,用所建立的方法检测临床样本,阳性15份,阳性率为75%。该试验成功建立了检测BEFV的荧光定量PCR检测方法,证明云南省的牛场中广泛存在BEFV,建立的荧光定量PCR检测方法对BEFV的临床诊断和流行病学调查等具有应用价值。 相似文献
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生产中,种公猪多种疫病会通过水平或垂直传播给种母猪或仔猪,造成种猪群繁殖障碍和呼吸道疾病暴发.为了解云南地区规模种猪场公猪疫病的感染情况,于2014年对云南10个地区63个种猪场4个品种的101头公猪血液和78头公猪精液进行了相关血清学和抗原检测.血清学检测结果显示:公猪血液中含有猪支原体、猪布氏杆菌病、猪弓形体病、猪传染性胸膜肺炎的抗体,其比例分别为32.67%、6.93%、8.91%、28.71%;其中,单独感染某一疫病30头占29.7%,二重混合感染有21头20.8%,三重混合感染2头1.98%,未见四重混合感染.对公猪精液进行PRV、CSFV、PRRSV、PCV-2、PPV和JEV的PCR检测发现:PRRSV感染检出率为12.82%,CSFV+PRRSV2二重混合感染检出率3.85%,PRRSV+PCV-2+JEV三重混合感染检出率2.56%.通过血清学和病原学共检测的179头种公猪,75头单独或混合感染以上10种病原,感染率42.13%,阳性猪场52家,占82.53%. 相似文献
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为建立蜜蜂黑色王台病毒RT-qPCR检测方法,以蜜蜂黑色王台病毒(BQCV)衣壳蛋白基因部分序列作为目的基因,构建标准质粒并作为模板,建立标准曲线,且对所建立方法的灵敏度和特异性进行分析。结果表明:所建立的RT-qPCR检测方法,扩增效率E=1 08%,可信度R2=0.997。该方法灵敏度高,最低检出量为101个拷贝;该方法特异性强,仅能检出BQCV,而不能检测出蜜蜂囊状幼虫病毒、畸翅病毒。以上结果表明已成功建立了针对BQCV灵敏、特异的RT-qPCR检测方法。 相似文献
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对昆明某犬场2例死亡犬的死亡原因进行实验室鉴定。采集犬肠内容物分别做细菌和病毒检测。细菌检测包括:犬肠内容物划线培养,纯化,分离,革兰氏染色,镜检,生化试验,血清试验,药敏试验。病毒检测包括:提取病料的总DNA,用犬细小病毒的特异引物进行PCR扩增,扩增产物经胶回收后克隆到pMD18-T载体,转化受体菌DH5α,挑取阳性克隆质粒进行序列测定,并与已知参考毒株序列进行比对,分析核苷酸的同源性。分离到一株有部分耐药性的侵袭性大肠埃希菌;检测到一株犬细小病毒,由引物P1/P2扩增的基因与参考毒株CPV-b同源性为98.58%,由引物P3/P4扩增的基因与参考毒株CPV-b同源性为92.1%。结果表明,2例死亡犬的死亡原因分别为侵袭性大肠埃希菌感染和犬细小病毒感染。 相似文献