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1.
H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对高致病力禽流感病毒攻击的免疫保护 总被引:5,自引:0,他引:5
对H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5的免疫效果进行了研究。pCAGGoptiHA5分别以100和10μg剂量一次或两次免疫3周龄SPF鸡,首次免疫后4周以同样剂量和途径进行第二次免疫,一次免疫后4周、两次免疫后2周分别用100LD50的HPAIV A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7天采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、NT抗体以及AGP抗体的动态变化。结果,100μg pCAGGoptiHA5一次免疫、100μg pCAGGoptiHA5两次免疫以及10μg pCAGGoptiHA5两次免疫均可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),10μg剂量pCAGGoptiHA5一次免疫可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),结果表明,pCAGGoptiHA5作为疫苗效果良好、成本低廉,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。 相似文献
2.
3.
为探索构建禽流感双价或多价DNA疫苗的可行性,本研究以本实验室前期研制的禽流感DNA疫苗p CAGGopti HA5为基础[其中含有禽流感病毒(AIV)A/Goose/Guang Dong/1/96(H5N1)的HA基因],将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因作为第二个目的基因,利用双启动子启动、内部核糖体进入位点(IRES)介导以及通过蛋白Linker编码序列连接融合表达两个目的基因的形式,构建了双启动子重组表达质粒pH5-eGFP、IRES介导的重组表达质粒pHIE以及融合表达重组质粒pH6E。并采用脂质体介导将这3种重组质粒分别转染293T细胞,通过间接免疫荧光试验和western blot方法检测HA和eGFP这两种目的蛋白的瞬时表达情况。结果显示,这3种重组质粒均能够正确表达AIV的HA蛋白和eGFP。其中pH5-eGFP表达出两个独立的目的蛋白,而且互相不影响各自的表达和细胞定位;pH6E则以融合形式表达两种目的蛋白,由于HA蛋白具有膜定位信号,所以融合蛋白主要定位于细胞膜上。本研究结果表明,双启动子表达质粒和双目的蛋白融合表达质粒适合用于构建AIV以及其他相关病原的双价DNA疫苗。 相似文献
4.
为实现对H7N9禽流感病毒(AIV)感染过程的动态可视化示踪,本研究构建了重组报告质粒pHH21-NS-Venus、pHH21-NS-Apple和包含H7N9 AIV CK/SD008株的8个基因节段的重组质粒pHH21-PB2-627E、pHH21-PB2-627K(来自CK/SD008-627K株)、pHH21-P... 相似文献
5.
表达H5亚型禽流感病毒HA基因的DNA疫苗免疫保护效力研究 总被引:5,自引:1,他引:5
表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA5和油苗1次免疫后,其免疫保护率分别为12.5%(1/8)、58.3%(7/12)、72.7%(8/11)、50.0%(6/12)、66.7%(8/12)和100%(12/12),其中70和100g剂量组的病毒分离结果 相似文献
6.
指出了为了提高城市园林在城市运行发展过程中所起到的窗口作用、生态作用,可以结合当地实际绿化情况引进经济林树种,以此在提升城市园林绿化观赏效果的同时,提高绿化园林经济效益。并且通过对经济林树种的科学引进,既可以提升城市园林绿化总量,又能丰富绿化植物种类。基于此,针对经济林树种在园林绿化中的运用进行了分析研究,提出了相应的建议,以期促进城市的可持续发展。 相似文献
7.
应用带有His6尾的pET原核表达系统对禽流感病毒血凝素蛋白进行表达,将禽流感A/Turkey/Wisconsin/66(HgN2)的HA基因克隆至原核表达载体pET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入,并且阅读框正确,获得重组质粒pET30a-H9.将此重组质粒转化到宿主菌BL21中,用诱导剂异丙基硫代... 相似文献
8.
一株禽流感病毒全基因的序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对禽流感病毒A/Turkey/Wisconsin/1/66(H9N2)的8个基因片段即PA、PB1、PB2、NS、NP、M、HA、NA分别进行扩增,然后将其克隆到PMD18-T载体后进行序列测定和拼接;并将克隆到的8个基因片段与以下毒株各个基因的相应序列进行比较分析:Duck/HongKong/Y280/97(DHKY280/97)、Duck/HongKong/YT439/97(DHKY439/97)、Quail/HongKong/G1/97(QHKG1/97)、A/Chicken/Beijing/1/94(CBJ1/94)、Chicken/HongKong/G9/97(CHKG9/97)、A/Turkey/California1/66(TC/1/66).结果表明:我们克隆到的TW1/66株的8个基因片段均含有相应病毒基因的完整开放阅读框架:TW1/66的各基因与TC/1/66株相应各基因同源性最高(NS基因除外,同源性只有(67.4%).与其它各毒株各基因同源性均较低,但与DHKY439/97各基因同源性高于与DHKY280/97、QHKG1/97、CBJ1/94、CHKG9/97各基因同源性. 相似文献
9.
为研究双顺反子DNA疫苗对禽流感病毒(AIV)的保护作用,将H5和H7亚型AIV的HA基因克隆到同一表达栽体上,构建了双顺反子HA基因表达质粒pCI—H5HA—H7HA。以此质粒肌注免疫4周龄SPF鸡,首次免疫后3周加强免疫,同时设pCI—H5HA和pCI—H7HA联合免疫组及空白对照组,每周采血用微量血凝抑制法检测HI抗体。加强免疫后3周分别以100LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)和A/FPv/Rostock/34〈(H7N1)进行致死性攻击。结果显示各免疫组均可刺激鸡体产生H5、H7特异性抗体,pCI—H5HA—H7HA诱导产生的抗体对H5N1和H7N1的攻毒保护分别为50%和10%,而pCI—H5HA和pCI—H7HA联合免疫的攻毒保护均为70%。表明双顺反子质粒可诱导鸡产生较好或一定的保护,但免疫效果不够理想,推测与DNA的摄取及其体内表达有关,可望通过调整DNA疫苗的多种因素提高免疫效果。 相似文献
10.
鸡传染性支气管炎是由传染性支气管炎病毒引起的鸡的一种急性、高度接触性疾病,主 要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统,可引起不同日龄的鸡发病,表现出广泛的 组织嗜性和高度的遗传变异性。 S1蛋白作为鸡传染性支气管炎病毒的重要免疫原,能刺激机体产生血凝抑制抗体和病毒 中和抗体,引起了许多学者的极大关注。随着现代生物技术的发展,有关S1蛋白的研究不 断地深入,并已取得了一定的进展。 1 IBV S1蛋白的分子生物学研究 1.1 IBV S1蛋白的结构特征 S蛋白包括两种糖多肽S1和S2,分子量约为180~200 KD,Cavanagn 的研究表明,它是由2~3个相同的单体以非共价键连接构成的聚合物,每个单体有两个等 摩尔分子的亚单位S1、S2构成,S1约为90 KD,由520~538个氨基酸组成,S2约 84 KD,由625个氨基酸组成,Cavanagn证实,S蛋白翻译后经过裂解产生S1的 N端和S2的C端,两者之间由二硫键连接,S1在外形成一个泡状结构,S2通过一个小的疏水跨 膜 片段嵌入病毒膜中,形成S1的柄,将S1蛋白锚定在膜上,裂解处的氨基酸序列模式为:- Arg-Arg-X-Arg-Arg-(C)(其中,X为任一氨基酸)。 相似文献