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猪精子和睾丸组织RNA的初步分析 总被引:1,自引:0,他引:1
试验采用Trizol一次法提取猪精子和睾丸组织的总RNA,然后通过RT-PCR扩增的方法,检测精子和睾丸组织中Protamine-1(PRM-1)、Protamine-2(PRM-2)、Clusterin、Heat shock protein 90(HSP90)、C-myc基因的mR-NA是否存在;通过不同精子数量的使用,检测在本试验条件下扩增出清晰PRM-1带所需要的适宜精子数量;通过琼脂糖电泳检测精子与睾丸组织RNA的电泳特征.结果,猪睾丸组织中有PRM-1、PRM-2、Clusterin、HSP90、C-myc的mRNA,而射出的猪精子(上游处理)本试验只检测出PRM-1的mRNA;在使用RNA沉淀剂时,3.0×107~6.5×107精子可得到清晰的PRM-1条带;本试验首次得到猪精子总RNA的普通琼脂糖胶电泳图.初步研究的结果表明:射出猪精子中存在的RNA种类与睾丸组织中存在的RNA种类差异大;猪精子RNA的18S和28S片段与睾丸组织无明显差异.猪精子的RNA需要更多的研究. 相似文献
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猪精子RNA提取的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
实验采用Trizol一次法或试剂盒提取猪精子的总RNA,然后通过RT-PCR扩增的方法,检测精子和睾丸组织中鱼精蛋白(PRM-1)的mRNA;使用不同数量的精子,检测在本实验条件下能扩增出PRM-1带所需要的最小精子数量;通过OD260/280的测算,判断不同提取方法所得RNA的纯度;通过琼脂糖电泳得到精子RNA与睾丸、卵巢组织RNA的电泳图。实验结果表明:在使用RNA沉淀剂时,1.51×107精子可检测到PRM-1的mRNA,不使用沉淀剂则需要3.02×107精子才检测到;使用Trizol一次法提取的精子总RNA纯度较常规Mini试剂盒(W6221)高;本实验首次得到猪精子总RNA的普通琼脂糖凝胶电泳图。初步研究的结果表明,Trizol一次法可用来提取精子总RNA供进一步研究;猪精子RNA的28S和18S片段与睾丸、卵巢组织无明显差异。 相似文献
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乳腺肿瘤细胞的增殖及其预后具有一定相关性.Ki67、PCNA是最常用的衡量肿瘤增殖指数(Proliferation Index)的标记物[1].Ki67是一种非组蛋白核蛋白质,分子质量在345~395 kD之间,表达于细胞周期的G1、S、G2和M期,但在静止期不存在[2-3].Ki67蛋白半衰期很短,在有丝分裂后很快消失.有研究表明,Ki67蛋白的高表达与肿瘤的转移、预后密切相关.PCNA是一种分子量为36kD的蛋白质,为DNA聚合酶δ的辅助蛋白[4].PCNA在细胞周期的G1晚期开始升高,在S期达到最大值,由于PCNA与细胞DNA合成关系密切,在细胞增殖的启动上起重要作用,所以被作为反映细胞增殖状态指标[5],也成为近年来肿瘤研究的热点. 相似文献
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昆明小鼠胚胎干细胞建系的初步研究 总被引:2,自引:0,他引:2
以昆明小鼠(Mus musculus)为材料,利用超数排卵获得小鼠扩展囊胚、孵化囊胚。为了研究小鼠胚胎干细胞(Mouse Embryonic Stem Cells,mESC)分离和传代的影响因素,设计两个实验:(1)不同孕期(3.5d或4.5d)的囊胚对胚胎干细胞分离效率的影响;(2)第5代后,不同传代方法(机械法或酶消化法)对mESC传代的影响。结果显示:在3.5d孕期时,胚胎为扩展囊胚,在4.5d时为孵化囊胚,扩展囊胚在贴壁率、原代克隆形成率差异不显著,从在继代培养上显著高于孵化囊胚(P〈0.05);第5代后用机械法或胰酶消化法传代对mESC的维持没有明显差别,但从克隆的形态上看,酶消化法优于机械法。最后,本研究从扩展囊胚组中成功获得了一株mESC,该mESC碱性磷酸酶染色呈强阳性,经RT-PCR分析显示表达Oct4、Sox2,核型为正常40XY。 相似文献
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