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将orf216基因克隆到含有组氨酸标签的原核表达载体pET-30a(+)中,得到重组质粒pET-30a(+)-orf216,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)plys菌株感受态细胞,经IPTG诱导后,SDS-PAGE和Western Blot检测分析表达产物。通过Ni-NTA亲和层析系统纯化获得高纯度目的蛋白。研究结果表明,成功构建了pET-30a(+)-orf216原核表达载体并转化大肠杆菌。SDS-PAGE和Western Blot结果显示30 ku处有单一条带,确定其能高效表达并且诱导表达产物为ORF216蛋白。同时对利用Ni-NTA层析系统纯化高纯度高含量ORF216融合蛋白的条件进行了优化。 相似文献
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基于P-糖蛋白基因表达评价尼罗罗非鱼体内恩诺沙星代谢“首过效应” 总被引:1,自引:0,他引:1
为从药物酶的角度建立一种客观评价鱼类"首过效应"的方法,利用荧光定量PCR法测定尼罗罗非鱼(Oreochomis niloticus Linn)肝、肾组织中P-糖蛋白(P-gp)基因表达量,分析了单剂量(40 mg.kg 1)口服给药恩诺沙星(enrofloxacin,ENR)后,尼罗罗非鱼肠道、肝组织中mRNA水平的相对表达量与ENR血药浓度的时实相关性。实验结果显示:在尼罗罗非鱼肠道、肝组织中,P-gp基因在分子量127 bp处出现了与预期大小相符的特异性扩增片段。对尼罗罗非鱼口灌给药ENR后,ENR能迅速通过肠道进入血浆,其在肠道、肝和血浆中的消除速度较快,其药物时量曲线关系符合一级吸收的二室开放动力学模型。当血浆中ENR浓度达到最高达峰时(1 h),实验组肠道和肝中P-gp基因的相对表达量相对于对照组均表现出显著性差异(P<0.05);当肠道中ENR浓度达到最高峰时(2 h),实验组肠道P-gp基因的相对表达量则表现出极显著差异(P<0.01);当肝中ENR浓度达到最高峰时(2 h),实验组肝P-gp基因的相对表达量与对照组相比则表现出显著性差异(P<0.05)。该结果证实了鱼类P-gp基因参与药物代谢过程,提供了一种从分子水平揭示水产动物体内药物代谢规律的思路。 相似文献
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生物信息学课程教学改革和实践 总被引:1,自引:0,他引:1
分析了生物信息学的课程特点和教学中的问题,从课程教学内容、教学方法和考核手段等方面进行了改革,达到了提高教学质量、激发学生的学习兴趣,改善教学效果的目的。 相似文献
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运用博弈论对订单农业违约风险中的道德风险进行了分析。结果表明,如果农户和企业之间存在着无限次重复博弈,就能够得到最优的帕累托均衡点,形成农户与企业之间良性的合作关系。但由于农户与企业存在信息不对称,使得农户与企业的无限次重复博弈变为一次博弈,违约便成为农户和企业的理性选择,就此提出了几点建议。 相似文献
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<正>活塞环未装入气缸前,其外径是大于气缸的内径的,活塞环被弹性压缩后安装在气缸内,在活塞环弹力的作用下,环外圆表面紧贴在缸壁上形成弹性密封。当活塞环随着活塞在气缸内作上下往复高速运动时,环与缸壁及环与环槽不停地摩擦而发生磨损,活塞环的磨损造成活塞环与活塞环槽、气缸壁密封不严,产生漏气和机油窜烧,使柴油机机油、燃油消耗量增加,功率下降,工作无力。磨损使活塞环无法满足工作要求而提前报废。活塞环的工作条件很差,在高温、高压和润滑不良 相似文献
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从烟草中克隆到1个受甲基茉莉酸和水杨酸双重诱导的糖基转移酶基因GT-MS,将其翻译起始位点5'上游800+1启动子序列取代pCAMBIAl301质粒的35S启动子,构建GT-MS启动子与Gus基因融合的植物表达载体,采用花序浸染法转化拟南芥,得到阳性植株.对转基因植株进行组织化学染色,结果表明,GT-MS启动子在拟南芥不同生长发育时期及不同器官均有表达,但主要是在维管组织表达,且韧皮部的表达高于木质部.MeJA和SA诱导后GUS活性增强,Gus基因RNA表达量成倍增加.表明GT-MS启动子与在烟草中相似,在拟南芥中也受MeJA和SA诱导. 相似文献
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水稻HL-CMS中2个雄性不育候选基因表达模式的初步研究 总被引:2,自引:1,他引:1
采用实时荧光定量PCR技术,比较了水稻红莲型细胞质雄性不育(HL-CMS)不育系粤泰A(YTA)中的2个雄性不育候选基冈HLsp和orfH79在根、茎、叶以及减数分裂期小穗和三核期花药中的表达模式.结果表明,HLsp和orfH79均在减数分裂期小穗中表达最高,而在营养生长的根、茎、叶及成熟花粉中表达很低.HLsp在粤泰A不同组织中的表达均低于orfH79,但HLsp在减数分裂期小穗中的表达量与在其它组织中的表达鼍的差异明显比orfH79大.2个不育候选基因HLsp和orfH79在HL-CMS不育系YTA不同组织及发育时期的表达差异,暗示二者在水稻HL-CMS的发生中可能行使不同的功能. 相似文献