鸭病毒性肝炎的病毒分离与鉴定

鸭病毒性肝炎是雏鸭的一种高度致死性、迅速传播和以肝炎为主要特征的病毒性疾病。本病是由三种不同类型的病毒引起的，称为１型、２型、３型鸭肝炎病毒，其中以１型鸭肝炎病毒引起的发病率和致死率最高，也是发现最早的鸭肝炎病毒，危害性也最大。现将２０００年春季，发生在２６天龄雏鸭的高发病率和高死亡率的鸭肝炎病毒的分离与鉴定过程报道如下。 一、材料与方法 １．材料 （１）病料来源：山东潍坊某县市，发病率１００％、病死率８７％的２６天龄发病雏鸭群病死鸭的肝脏。 （２）９～１０天龄鸡胚：种蛋购自山东省六一农场，自孵。 …     

新城疫（ND）—减蛋综合征（EDS76）蜂胶二联灭活疫苗的研制Ⅰ．制苗工艺、疫苗安全性和免疫原性试验

将新城疫病毒（NDV）Colon-30株和减蛋综合征病毒（EDS76AV）－127株分别接种于非免疫鸡胚和鸭胚，制备抗原液。抗原液经甲醛灭活后，与纯化的天然免疫增强剂蜂胶乳化，制成鸡新城疫（ND）－减蛋综合征（EDS76）蜂胶二联灭活疫苗，对疫苗的安全性和免疫原性进行了测定。对3－6周龄易感雏鸡以2倍使用剂量肌内注射，安全性良好；对1日龄雏鸡接种1个使用剂量进行急性毒性试验。15d生长曲线表明，对雏难 影响。对6周龄雏鸡注射1个使用剂量，每批疫苗免疫10只鸡，免疫后5－32d，鸡血清中EDS76血凝抑制（HI）抗体的几何平均滴度（GMT）为6．5－11．8log2,ND血凝抑制（HI）抗体的几何平均滴度（GMT）为4．8－9．8log2；对ND免疫攻毒试验表明，3批疫苗，每羽份含有的半数保护量（PD50）分别为≥127、≥131和≥127。     

禽多杀性巴氏杆菌强毒株与弱毒株制备的蜂胶灭活疫苗免疫原性的比较试验

用禽多杀性巴氏杆菌强毒株(C48-1)与弱毒株(G190E40和B26-T1200)制备的蜂胶灭活疫苗的免疫原性对比试验结果表明,强毒株C48-1制备的禽霍乱蜂胶灭活疫苗的免疫效果显著高于弱毒株G190E40和B26-T1200,近期保护率相差20%～40%,3个月后相差40%～80%.强毒株C48-1的免疫原性显著高于弱毒株G190E40和B26-T1200,说明禽多杀性巴氏杆菌荚膜上的毒力蛋白可能具有免疫原性.     

3株猪胸膜肺炎放线杆菌山东株的分离及鉴定

从山东省几个猪场的疑似猪传染性胸膜肺炎病例中,采集病猪的肺脏、气管和扁桃体等病变组织,经细菌分离得到3个分离株BZ1株、BZ2株、BZ3株。经过革兰氏染色镜检、菌落形态观察、培养特性试验、生化试验、药敏试验、动物感染试验等一系列细菌学鉴定方法,可将3株分离菌鉴定为猪胸膜肺炎放线杆菌。     

兔瘟的诊断与防控技术探讨

兔瘟又名兔病毒性出血症,是由兔出血症病毒引起的一种急性、热性、败血性和毁灭性的传染病,是兔业养殖的头号杀手。近年来,随着养兔业的不断发展,兔瘟的发病情况也随之出现了多元化现象,呈现出早龄化、非典型性与散发性等特点。笔者通过对多年临床经验的总结,从该病的流行病学特点、临床症状、病理剖检变化、实验室诊断及免疫防控等方面进行阐述,以期能够对该病进行更好的防控有所指导和帮助。     

产气荚膜梭菌B型C58-1株β1毒素基因的克隆表达

利用PCR技术,从B型产气荚膜梭菌中国标准株C58-1株扩增出β1毒素基因,连接pMD18-T 载体筛选阳性克隆,然后用限制性核酸内切酶BamHⅠ和SalⅠ对其进行酶切,回收927 bp的β1毒素基因片段,将其定向克隆到载体pET-32a中,获得重组质粒pETβ927。将pETβ927转化至受体菌BL21(DE3)中,其表达产物经His-Trap FF预装柱纯化、SDS-PAGE 检测目的蛋白大小和分布及Western blotting检测其反应原性。结果表明,完整的β1毒素基因大小为1 011 bp,与GenBank发表的B型和C型产气荚膜梭菌β1毒素蛋白序列同源性达99.4%以上;SDS-PAGE结果显示重组目的蛋白在大肠杆菌中成功表达,融合蛋白大小为 54 ku,在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但以包涵体为主。Western blotting检测结果显示表达的重组蛋白可与特异性血清抗体发生免疫反应,表明β1毒素蛋白具有较好的反应原性。     

鸭黄病毒SDbz株的分离与初步鉴定

鸭黄病毒病为近年来新发的鸭病,给养鸭业带来了极大的经济损失。为了深入研究本病的防制,本试验对鸭黄病毒(duck flavivirus,DFV)进行了分离鉴定。取疑似感染DFV的病鸭病料,经细菌分离初步排除细菌感染后,应用RT-PCR检测呈现DFV阳性,处理后将其接种到鸭胚成纤维细胞(DEF)和健康鸭胚上进行病毒分离传代。结果显示,在DEF细胞上第1代48 h就开始出现CPE,随着时间的延长CPE更加明显,通常在72~96 h产生典型CPE;接种鸭胚每一代均出现死亡,且死亡时间多集中于接种后60~72 h,死亡鸭胚胚体水肿、出血、发育不良、胚肝严重出血、肿胀或斑驳样坏死等病变。将病毒DEF细胞和鸭胚分离物应用血凝试验、毒价测定、病毒中和试验、RT-PCR及人工感染试验进行检测鉴定,证明所分离到的病毒为DFV,并将其命名为DFV SDbz株。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌分离株的分子生物学鉴定

根据已有的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP) dsbE基因序列,合成了一对特异性引物,从3株APP分离菌(BZ1株,BZ2株和BZ3株)均扩增出预期342 bp的DNA片段.分别将扩增的目的基因连接到pMD18-T载体中,构建重组质粒,转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞,提取质粒并进行序列分析.结果表明BZ1株dsbE基因与所有14种血清型APP参考株dsbE基因的同源性达98%～100%,BZ2株dsbE基因与所有14种血清型APP参考株dsbE基因的同源性达98%～99%,BZ3株dsbE基因与所有14种血清型APP参考株dsbE基因同源性达97%～98%,证明3株分离菌均为APP.     

鸡大肠杆菌地方菌株的分离培养与药敏试验

由于鸡大肠杆菌血清型（群）比较复杂 ,且变异性较强 ,很难用疫苗得到有效的预防 ,并且对抗生素容易产生耐药性 ,在临床防治工作中 ,要取得较好的治疗效果 ,就需要选择对大肠杆菌比较敏感的药物 ,来进行预防与治疗 ,才能达到控制该病的目的。本文针对这一方面作了有益的探讨。１材料１．１病料采自黄河三角洲部分县市。１．２试剂ＭＲ、Ｖ -Ｐ、靛基质、明胶液化、氧化酶、过氧化氢酶、尿素酶试验培养基及反应试剂由本所自制。１．３普通琼脂平板按照常规 ,由本所自制。１．４麦康凯琼脂、伊红美兰琼脂、三糖铁琼脂均购自山东省卫生防疫站 ,…     

兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

山东枣庄某大型兔场送检死亡幼兔病例,经过病原菌的分离鉴定、PCR 检测、药物敏感性试验、敏感动物致病性分析及临床综合治疗等,成功分离到一株对小鼠有一定的致病性的兔败血性波氏杆菌,该菌株对氟苯尼考、多西环素、红霉素等高敏,临床上采取疫苗紧急防疫结合药物治疗的综合防治措施顺利控制了该病的发生。