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本研究以豚鼠作为哺乳动物模型,评价了6株H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的复制和水平传播能力。经滴鼻接种后,检测到6株病毒中有5株病毒在豚鼠上呼吸道和下呼吸道复制,病毒滴度为0.8LogEID50/mL~3.5LogEID50/mL(或g),豚鼠在感染后第2d至第10d可排出病毒。另外一株病毒A/duck/GX/22/02则仅能在豚鼠的下呼吸道低水平复制。在传播实验中,6株病毒中只有A/duck/GX/35/01能够在豚鼠间水平传播。上述研究结果表明,豚鼠适用于作为高致病性AIV哺乳动物水平传播的模型,而且H5N1亚型AIV在哺乳动物间的水平传播能力不同。本研究为进一步研究AIV在哺乳动物间水平传播的分子机制奠定了良好的基础。 相似文献
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禽脑脊髓炎病毒VP1基因的克隆及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
应用RT-PCR方法,扩增出AEV Van-roekel株结构蛋白基因VP1,测序结果表明VP1基因全长810bp,编码270个氨基酸;和AEV 1143株相比,核苷酸同源性为94.2%,氨基酸同源性为99.26%.将VP1基因定向克隆到pGEX-6p-1载体谷胱苷肽转移酶基因的下游,并把重组质粒转入宿主菌BL21中,经IPTG诱导后,VP1基因得以表达.表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,确定表达的融合蛋白大小约为58Ku,且具有良好的反应原性.将表达产物纯化后免疫试验兔,琼脂扩散试验显示免疫血清能与禽脑脊髓炎琼脂扩散标准阳性抗原呈特异反应,表明重组VP1蛋白保留了天然蛋白的部分活性. 相似文献
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本文利用生物信息学软件分析了鲤(Cyprinus carpio)基因组中同源框基因Hoxa3a与多种鱼类及其它生物的同源性,构建了分子进化树。结果表明:鲤与斑马鱼(Danio rerio)的序列同源性最高为95%,与大西洋鲑(Salmo salar)等四种鱼类的同源性次之为84%,与米氏叶吻银鲛(Callorhinchus milii)和鳐(Leucoraja erinacea)的同源性最低为74.5%,与三种鸟类的同源性为75%左右。这结果也说明,Hox同源框基因序列在进化上高度保守。在序列比较的同时发现了2个鲤的SNP位点,T101C和A213G。上述研究结果,对于保护生物多样性(尤其是遗传多样性)的研究,揭示生物进化历程及机理具有十分重要的意义。 相似文献
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禽白血病劳斯肉瘤病毒衣壳蛋白P27基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备 总被引:6,自引:0,他引:6
从人工感染禽白血病劳斯肉瘤病毒的SPF鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物中提取RNA,通过RT-PCR方法扩增出720bp的gag P27基因片段,克隆至pMD18-T载体,酶切鉴定后进行序列测定和分析,表明该片段编码序列与国外RSV分离株(JO2342)的同源性达97.3%.将该片段亚克隆至pGEX-6 P-1原核表达载体,转化受体菌BL-21,经IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,证明目的基因得到高效表达,所表达蛋白是大小为56kD的融合蛋白,占菌体总蛋白的23%.表达产物经Glutathion Spharose4 B树脂亲和层析法纯化后,每100 mL菌液最终可获得5 mg重组t27蛋白,蛋白纯度在90%以上.用兔抗自然P27蛋白阳性血清进行Western blot检测,表明重组P27蛋白有抗原反应活性.用纯化的重组P27蛋白免疫兔子制备多克隆抗体,产生的抗体与禽白血病全病毒抗原可以发生特异性反应.所制备的重组P27蛋白和多克隆抗体将为禽白血病的诊断及ELISA试剂盒的研制奠定基础. 相似文献
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禽脑脊髓炎病毒VP3基因的克隆与序列测定 总被引:1,自引:0,他引:1
根据已发表的禽脑脊髓炎病毒(AEV)序列设计了1对引物,利用RT-PCR技术,从AEVVR株感染的SPF鸡胚脑以及内脏器官组织中成功扩增出了VP3基因,回收、纯化后克隆到T载体中,用常规方法转化JM109感受态细胞。阳性重组质粒经酶切及PCR鉴定后测定核酸序列。结果表明,VR株VP3基因全长735bp,共编码245个氨基酸,与AEV-1143标准毒株相应片段的核苷酸和氨基酸同源性分别为93.0%和97.0%;并将其与其他小RNA病毒进行了比较。 相似文献