中国明对虾组织蛋白酶L 的原核重组表达及其组织分布

组织蛋白酶L属于半胱氨酸蛋白酶中的木瓜蛋白酶超家族,在哺乳动物中它与抗原提呈、肿瘤入侵和转移、骨质吸收、细胞凋亡等许多生命活动有关。但对其在无脊椎动物中的功能了解的不多。从中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)中克隆得到了组织蛋白酶L基因,为了进一步研究组织蛋白酶L的组织分布及其功能,对该基因进行了重组表达。将中国明对虾组织蛋白酶L基因的酶原片段亚克隆进原核表达载体pET30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),再进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳检测,其分子量在40kD左右,与期望的中国明对虾组织蛋白酶L的分子量一致。表达产物形成包涵体,经过对包涵体变性和复性,并进行His-tag柱亲和纯化,得到了纯化的蛋白。利用重组蛋白制备了的兔抗血清。Western实验表明,组织蛋白酶L在中国明对虾的肝、胃、肠中有表达,而在卵巢中没有表达。     

棉铃虫卵内蛋白酶性质研究

研究棉铃虫卵内存在何种蛋白酶、蛋白酶性质、受何种因子抑制、活化及调控等生物化学和分子生物学过程及机理,可为杀卵农药研制提供理论依据。但因棉铃虫成虫在取食后卵巢才发育,交配后分批产卵,卵粒很小,胚胎发育时间短,给卵内蛋白酶研究带来很大困难,国内外均未见研究报道。 尽管在其他鳞翅目昆虫中已开展了这方面的研究,但目前结果表明不同昆虫卵内的蛋白酶并不完全相同,如家蚕卵内存在半胱氨酸蛋白酶类的组     

低酚棉区田鼠发生种群优势及其危害的研究

通过3年4个县市试验，明确了我省低酚棉区田鼠发生的种群优势，田间消长、繁殖、危害的动态规律，为低酚棉区田鼠的综合防治提供了科学依据。     

棉铃虫法胱氨酸蛋白酶底物特异性研究

为了研究棉铃虫（Helicoverpa armigera）半胱氨酸蛋白酶的底物专一性，进一步阐明该蛋白酶的性质和应用前景，从棉铃虫卵巢中 化了该蛋白酶，用电泳方法检测了该蛋白酶对牛血红蛋白（Hb）、牛血清蛋白（BSA）、卵黄磷蛋白（Vn）、明胶（gelatin）等4种动物蛋白，及大事产、玉米、马铃薯、豇豆、向阳花种子及棉籽蛋白等6种植物蛋白的水解作用，结果显示该酶对4种埃6种植物蛋白都有明显水解活性。用吸光度测定法测定了棉铃虫半胱氨酸蛋白酶对牛血红蛋白，牛血清蛋白、卵磷蛋白、明胶等4种底物的米氏常数（Km）值。结果显示棉铃虫半胱氨酸蛋白酶对牛血红蛋白和卵磷蛋白的水解产物的吸光度值较高，而对牛血清蛋白和明胶的水解产物的吸光度值较低。 测得该蛋白酶对牛血红蛋白、牛血清蛋白的水解产物的吸光度值较高，而对牛血清蛋白和明胶的水解产物的吸光度值较低。测得该蛋白酶对牛血红蛋白、牛血清蛋白、卵黄磷蛋白、明胶的Km值分别为10、0.91、0.08μmol/L和250mg/L，其中对卵黄磷蛋白的Km值最小，说明棉铃虫半胱氨酸蛋白酶与卵黄磷蛋白的亲和力量大，即卵黄磷蛋白是棉铃虫半胱氨酸蛋白酶的最适底物，同时用电泳方法检测了该蛋白酶对粗提的棉铃虫卵黄磷蛋白的水解作用，结果显示该酶对其有明显水解活性，由此推测该酶可能参与棉铃虫胚胎发育中卵磷蛋白的水解。     

RH—2485对棉铃虫的室内药效试验

利用Rohm and Haas公司1996年推出的一种非甾醇类蜕皮激素竞争物RH-2485,用点滴法和喷雾法对棉铃虫防治效果进行了室内研究。结果表明,RH-2485可以引起棉铃虫非正常蜕皮。用25、50、100和150mg/L的RH-2485异丙醇溶液对2龄幼虫进行喷雾,阳性反应率为43.6％～94.9％。用RH-2485异丙醇溶液对6龄初蜕皮幼虫(进入6龄不超过1h)进行点滴,剂量为1、30、60、100和200ng/头,24h后阳性反应率为0～83.33％,而15d后的最终反应率为15.38％～96.67％。研究结果显示RH-2485对棉铃虫有显著引起非正常蜕皮的作用,可用于棉铃虫田间防治试验。     

棉铃虫组织蛋白酶B酶原在大肠杆菌中的表达及纯化

用合成的基因特异性引物通过RT-PCR扩增，获得棉铃虫(Helicoverpa armigera)组织蛋白酶B基因(HCB)，将基因克隆到pGEX-4T-1载体，在大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α内进行扩增，经过PCR筛选获得阳性克隆并提取质粒和测序验证后，再转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。表达产物为组织蛋白酶B-谷胱甘肽S转移酶的融合蛋白，分子量在63kD左右。表达产物形成了包涵体，经过对包涵体变性和复性处理，得到了可溶性的融合蛋白，可被Glutathione Sepharose 4B柱亲和纯化，用凝血酶裂解融合蛋白后，经SDS-PAGE分离到37kD左右的棉铃虫组织蛋白酶B酶原。N-末端氨基酸测序鉴定表达产物为棉铃虫组织蛋白酶B。     

纵论信息化

2000年10月，党的十五届五中全会通过了《关于制定国民经济和社会发展第十个五年计划的建议》（以下简称《建议》）。2001年3月，全国人大九届四次会议通过了《国民经济和社会发展第十个五年计划纲要》（以下简称《纲要》）。《建议》和《纲要》作为划时代的纲领性文件，对于各级政府、各行各业，以及全社会都具有极其重要的现实和深远的指导意义。这两个文件中，有许多新思路、新概念，需要我们认真研读、理解。《建议》和《纲要》中，除了都是紧跟在农业、工业、服务业之后，专门用一章阐述推进信息化之外，还有多处提到信息化。特别是在…