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采用胶原酶消化法分离猪皮下前脂肪细胞,以含50 nmol/L胰岛素、100 nmol/L地塞米松、0.25 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、100 nmol/L罗格列酮的分化培养液对前脂肪细胞进行诱导分化,借助实时定量RT-PCR方法检测了PPARγ、DECR1和ECHS1 3基因的表达模式,结果发现:PPARγ、DECR1和ECHS1 3基因均于诱导分化后48 h达到表达高峰,此时的表达量分别是诱导前的93.0,5.4和7.8倍;PPARγ同DECR1和ECHS1两基因表达量变化趋势间的相关系数分别为0.92和0.97,DECR1同ECHS1的相关系数为0.94,均达到极显著相关(P<0.01)。实验结果表明:前脂肪细胞在分化过程中细胞内脂肪酸生物合成和脂肪酸β-氧化同时发生,以维持细胞的稳态。 相似文献
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对通过抑制差减杂交技术所筛选的猪前脂肪细胞诱导分化后差异表达的CISD1基因的EST序列为探针进行电子克隆,用克隆序列设计引物,通过RT-PCR、克隆测序、同源比对证实所获序列为猪CISD1基因的mRNA序列,并将序列提交到Genebank,登录号为GQ913654。所获猪CISD1基因的mRNA序列全长为631 bp,CDS包含321 bp,由其编码的CISD1蛋白包含106个氨基酸残基,理论等电点为9.20,属脂溶性不稳定蛋白。猪CISD1蛋白的1~23位氨基酸可能是信号肽,53~91位氨基酸形成CDGSH锌手指域,为该蛋白的重要功能域,猪CISD1蛋白的三级结构与人CISD1蛋白相似度为89.333%。 相似文献
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