微量元素氨基酸螯合物的研究新进展

微量元素氨基酸螯合物是最近发展起来的第三代饲料添加剂。由于其稳定性好、抗干扰性强、生物效价高等特点,迅速成为饲料行业研究的热点。但由于价格及质量评定等方面的原因,在生产实践中受到了制约。本文结合本实验室的研究,对微量元素氨基酸螯合物作一综述。     

肌肽-一种有待开发的天然抗氧化剂

油脂是人和动物的基础营养素之一。含油脂的食品和饲料在加工、储藏和使用过程会发生氧化作用，产生醇、醛、羧酸等有害物质，使油脂逐渐变质败坏，降低蛋白质和能量以及一些主要养分(如脂溶性维生素和叶黄素)的含量，出现难闻的异味，显著降低适口性，影响动物的采食量和生产性能，严重时会使动物机体产生各种组织和细胞异常。所以食品和饲料中常需添加抗氧化剂。抗氧化剂有化学合成的     

肌肽对CCl_4诱导的肝匀浆脂质过氧化的抑制作用

肌肽是一种天然的水溶性二肽，以较高的浓度存在于有氧代谢最活跃的肌肉和脑中。由β-丙氨酸和L-组氨酸在肌肽合成酶的作用下合成。近几年来的研究表明，肌肽作为一种天然二肽，具有广泛的抗氧化性能，如通过缓冲生理pH的能力，减少因体系pH值变化而产生的脂质过氧化；具有捕捉羟自由基、单线态氧和过氧自由基的作用等在体内发挥抗氧化功效，具有广泛的细胞保护作用。     

伪狂犬病病毒在NF-κB家族p65基因敲除细胞系的复制规律研究

试验旨在研究伪狂犬病病毒(PRV)在NF-κB家族p65基因敲除细胞系中的复制规律。利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因定点修饰技术构建猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)p65基因稳定敲除细胞系。通过构建p65-sgRNA重组质粒,转染至HEK293T/17细胞,收取慢病毒,感染3D4/21细胞后利用嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7核酸酶检测敲除效率,再通过有限稀释法获得3D4/21-p65^-/-的稳定细胞系。CCK-8试剂盒检测3D4/21细胞中敲除p65基因后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测PRV-GFP感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后病毒增殖的差异;实时定量PCR检测PRV感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、TK基因mRNA表达水平及PRV感染细胞诱导的IL-1β和IL-6基因mRNA水平表达的变化;Western blotting检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后子代病毒滴度。结果表明,sgRNA2和sgRNA3的基因编辑效率较高,对其进行克隆化培养进而获得敲除p65基因的稳定表达细胞系;CCK-8试剂盒检测细胞活力表明,p65基因敲除对细胞活力无影响;流式细胞仪检测表明,同一时间点PRV-GFP在3D4/21-p65^-/-中的增殖显著高于对照细胞;实时荧光定量PCR表明在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、TK基因的mRNA表达水平,而抑制了IL-1β、IL-6基因的mRNA表达;Western blotting结果表明,在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定结果表明,同一时间点PRV-QXX在3D4/21-p65^-/-细胞中子代病毒的复制显著高于对照细胞。以上结果均表明,p65基因敲除可促进PRV在3D4/21细胞中复制。     

伪狂犬病病毒在NF-κB家族p65基因敲除细胞系的复制规律研究

试验旨在研究伪狂犬病病毒（PRV）在NF-κB家族p65基因敲除细胞系中的复制规律。利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因定点修饰技术构建猪肺泡巨噬细胞（3D4/21）p65基因稳定敲除细胞系。通过构建p65-sgRNA重组质粒,转染至HEK293T/17细胞,收取慢病毒,感染3D4/21细胞后利用嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7核酸酶检测敲除效率,再通过有限稀释法获得3D4/21-p65^-/-的稳定细胞系。CCK-8试剂盒检测3D4/21细胞中敲除p65基因后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测PRV-GFP感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后病毒增殖的差异;实时定量PCR检测PRV感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、TK基因mRNA表达水平及PRV感染细胞诱导的IL-1β和IL-6基因mRNA水平表达的变化;Western blotting检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后子代病毒滴度。结果表明,sgRNA2和sgRNA3的基因编辑效率较高,对其进行克隆化培养进而获得敲除p65基因的稳定表达细胞系;CCK-8试剂盒检测细胞活力表明,p65基因敲除对细胞活力无影响;流式细胞仪检测表明,同一时间点PRV-GFP在3D4/21-p65^-/-中的增殖显著高于对照细胞;实时荧光定量PCR表明在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、TK基因的mRNA表达水平,而抑制了IL-1β、IL-6基因的mRNA表达;Western blotting结果表明,在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定结果表明,同一时间点PRV-QXX在3D4/21-p65^-/-细胞中子代病毒的复制显著高于对照细胞。以上结果均表明,p65基因敲除可促进PRV在3D4/21细胞中复制。     

出生至断奶仔猪胃肠道组织中FcRn的表达规律初探

【研究目的】旨在研究FcRa在仔猪胃肠道的表达分布及不同日龄间的表达变化。【方法】以大白争长白二元杂交仔猪作为研究对象,分布采集从出生至断奶后共12个日龄仔猪胃肠道组织。应用RT-PCR方法检测FcRa mRNA表达并进行表达量的相对分析。【结果】①FcRa在仔猪胃肠道各段组织中均有表达,其中在十二指肠后段和空肠前段表达量最高,在结肠和胃内表达最低。②在十二指肠争空肠段,仔猪从一出生就有较高水平的FcRa转录,吮乳后至出生后1d达到峰值,随后略有下降但前4d差异不显著（P〉0．05）;自7d起FcRamRNA转录水平明显降低（P〈0．05）,至断奶时降到最低。③在回肠段,FcRa表达水平较十二指肠和空肠段低,从出生至断奶前（21d）表达量变化不明显。断奶后有显著下降（P〈0．05）。④胃与结肠部位FcRa的表达比较稳定,一直保持在较低水平。【结论】仔猪不同组织中FcRa在十二指肠后段和空肠前段的表达水平最高,提示仔猪十二指肠、空肠是FcRa转运初乳中IgG的主要部位。仔猪肠道FcRa的表达量变化与初乳及乳汁中IgG含量的变化规律基本一致,证明了FcRa在肠道转运IgG中发挥重要作用。     

大豆黄酮对泌乳后期奶牛相关乳成分的影响

选用14头产奶水平相近的泌乳后期黑白花奶牛,随机分为对照组、试验组。试验组日粮添加10mg/kg的大豆黄酮,持续30d。结果发现:与对照组相比,试验组奶牛乳蛋白有所升高,乳脂率有所下降。试验第15d乳中GH的含量显著升高(P<0.05),E2、T3和T4的含量均有升高的趋势。提示大豆黄酮可能通过调节内源性激素水平而间接地影响奶牛乳成分。     

奶牛乳腺先天防御机理的研究进展

综述了近年来奶牛乳腺先天防御机理的研究进展,分析了奶牛的固有防御机理、诱导型防御机理和细胞征募防御机理,对了解和预防奶牛乳腺炎的发生具有一定的参考和应用价值.     

鸡白细胞抗菌肽的体外抗菌活性比较

应用氯化铵裂解、超声波破碎、离子交换层析和SDS—PAGE电泳等方法,对不同品种鸡白细胞中的抗菌肽成分进行了初步提取和分离,再用反相高效液相色谱法进一步分离和提纯．经微量琼脂糖弥散法初步检测体外抗菌活性后,利用微量稀释培养法分别检测了粗提抗菌肽对7个受试菌株的最小抑菌浓度（M1C）．结果表明,在鸡白细胞颗粒中存在着天然抗微生物活性物质,对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌和真菌均具有抑制活性,且不同品种鸡粗提抗菌肽的体外抑菌浓度存在显著差异,其中罗曼褐壳蛋鸡粗提抗菌肽的抗菌活性最高,其次是三黄肉鸡,而罗斯308肉鸡较差．     

牛Musclin基因片段克隆与序列分析

[目的]对牛Musclin基因片段进行克隆与序列分析。[方法]通过电子克隆技术克隆牛Musclin基因,并通过软件分析牛Musclin基因与小鼠、大鼠、人、猪和鸡的同源性。[结果]通过电子克隆技术成功克隆了牛Musclin基因;分析结果表明,牛Musclin基因与小鼠、大鼠、人、猪和鸡同源性分别为81．0％、80．8％、90．0％、89．1％和62．4％,预测的氨基酸序列含有“KKKR”结构和与小鼠ANP、BNP、CNP蛋白的同源性区域,并将克隆的牛Musclin基因片段注册GenBank（EF646361）。[结论]该试验为进一步研究Musclin在牛骨骼肌中的生物学功能提供了基础资料。