应用PCR方法向基因内部引入序列的策略研究

应用PCR方法,利用3条引物与2个模板,分别采用一步PCR、两步PCR、三步PCR扩增策略,向cte基因内部引入一段内含子序列,以达到基因改造的目的.结果表明,利用一步PCR的策略,难以扩增得到目的基因,利用二步PCR的策略,虽然可以得到目的条带,但存在非特异扩增;通过三步PCR的策略,即第一步PCR扩增产物作为第二步...     

番茄长花柱品系T431低温胁迫下正向差减文库的构建及ESTs分析

本研究以番茄长花柱品系T431为材料利用抑制性消减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)构建了低温胁迫下的番茄长花柱突变体SSH cDNA正向差减文库,获得398个阳性克隆.经菌液PCR和Reverse Northern Blot杂交方法结合剔除假阳性,利用BLAST在GenBank数据库进行序列相似性比对,获得有功能的ESTs 173个.通过对所获得的ESTs序列进行功能分类发现,其中参与初级代谢、能量代谢、抗病/防御反应和信号传导等过程的基因相对较多.此外,还有一些基因参与植物体内蛋白质合成与加工、物质运输、转运调控与生殖发育等过程.     

番茄叶片总RNA提取方法的比较

番茄叶片富含酚类、多糖、蛋白质等次生代谢物质,用普通方法提取番茄叶片总RNA时很难将其去除,试验比较研究了RNA plant Reagent、UNIQ-10柱总RNA抽提试剂盒和改进Trizol三种方法的提取效果。结果表明,改进的Trizol法能从番茄叶片中提取纯度较高的RNA,凝胶电泳显示条带清晰完整,分光光度计检测A260/A280比值为1.88。用该方法提取的番茄叶片总RNA可以用于逆转录、RT-PCR、Northern blot等分子生物学研究。     

胡萝卜中番茄红素萃取工艺条件的研究

研究旨在通过对有机溶剂、温度、时间和固液比等因素对分离番茄红素的影响,确定最优的番茄红素的提取工艺。实验结果表明,乙酸乙酯的浸提效果最好,故选用乙酸乙酯作为浸提溶剂。番茄红素的最佳提取工艺为：液料比为2:1(mL/g),提取时间100 min,提取温度35℃。用此法提取番茄红素成本低、效率高、易于自动化,具有广阔的工业化应用前景