肠炎沙门菌双细份系统qseC基因缺失株的构建及其生物学特性分析

为研究肠炎沙门菌qseC基因功能,构建qseC缺失株C50041ΔqseC以及回复株C50041ΔqseC∶∶qseC,分析qseC基因缺失对肠炎沙门菌生化特性、生长曲线、运动性、黏附侵袭等方面的影响,探究该基因在肠炎沙门菌感染致病中的作用.结果 显示:利用框内缺失突变技术成功获得肠炎沙门菌C50041ΔqseC缺失株...     

结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的真核表达及其牛结核病诊断价值评价

本研究旨在利用毕赤酵母(Pichia pastoris)系统融合表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的培养滤液蛋白10(culture filter protein 10,CFP10)和早期分泌抗原靶6蛋白(earlier secreted antigen target 6,ESAT6),并评价其作为牛结核病外周血γ-干扰素(interferon gamma,IFN-γ)体外释放实验特异性刺激剂来诊断牛结核病的应用潜能.通过PCR扩增cfp1 0-esat6融合基因,构建pPICZα A-(cfp10-esat6)重组质粒,电转化毕赤酵母GSll5,添加甲醇至终浓度1.0％,诱导3d,取培养上清进行SDS-PAGE分析,镍离子金属螯合亲和层析柱纯化目的蛋白,Western blot分析重组蛋白的免疫反应性;取纯化的融合蛋白CFP10-ESAT6作为刺激剂用于牛结核病外周血IFN-γ体外释放实验,评价其牛结核病诊断价值.结果表明,目的蛋白(33kD)被成功分泌表达,该融合蛋白与抗CFP10、ESAT6、组氨酸标签和c-Myc4种单抗均发生特异性反应,具有较好的免疫反应性.165份奶牛外周血样品的IFN-γ检测结果表明,CFP 10-ESAT6融合蛋白与结核菌素纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)作为刺激剂,二者阳性符合率为82.3％,阴性符合率为78.8％.本研究利用酵母表达系统成功表达CFP10-ESAT6融合蛋白,并表现出更高的生物学活性,在牛结核病外周血IFN-γ体外释放实验中可作为候选刺激剂,并能克服混合感染导致的PPD漏检问题,从而进一步提高检测的敏感性和特异性.     

林业种苗的培育技术研究

森林是生态环境的一个重要组成,其发展程度程度与生态息息相关。所以要注重林业建设的发展,让它成为推进社会发展推动力。种苗是林业建设的基础,对实现林业可持续发展具有重大作用。本文结合当前林业育苗的发展,对林业育苗技术进行概述。     

我国禽传染性支气管炎病毒分子流行病学研究进展

禽传染性支气管炎（Infectious bronchitis,IB）是由禽传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）引起的雏鸡和成年鸡呼吸系统以及泌尿生殖道组织损伤和病变的急性、高度接触性疾病。虽然临床上广泛使用疫苗免疫防控该病,但由于IBV基因组存在频繁的变异和重组,导致新基因型和血清型不断出现,从而造成我国鸡IB未能得到有效控制。文章详细介绍了基于IBV S1基因系统发育学建立的分型方法以及我国流行的IBV 4个基因型、18个分支的来源、传播和流行现状,为IB防控和疫苗研发提供参考。     

不同树势的榛树对修剪响应的研究

该文以辽宁抚顺地区不同树势的大果榛子为研究对象,采用中度和轻度2种修剪方式研究了修剪对树体生长的影响。结果表明,壮树对中度修剪各项指标变化的响应较好,而中庸树对轻度修剪各项指标变化的响应较好,中度修剪在枝条长度和粗度的变化要高于轻度修剪。     

猪抗沙门氏菌免疫应答研究进展

沙门氏菌感染猪后,宿主的免疫应答是决定感染结局的关键因素.在感染早期,机体通过激活天然免疫来抵抗沙门氏菌感染.由于沙门氏菌可以通过分泌毒力因子等来逃避宿主的杀菌作用,因此,需要进一步启动获得性免疫应答,才能有效地杀灭细菌,其中,T、B淋巴细胞介导的免疫应答在清除病原体方面的作用尤为重要.论文通过对猪免疫系统和沙门氏菌感...     

牛γ-干扰素ELISA检测方法的建立与初步应用

以纯化的rHis-BoIFN-γ制备兔多抗血清,辛酸—硫酸铵两步法对体内诱生的抗rBoIFN-γ单抗腹水进行纯化,用美洲商陆素（Pokeweed mitogen,PWM）刺激奶牛全血产生的分泌性天然BoIFN-γ筛选出与之反应最佳的单抗5E11。将单抗5E11以40μg/mL浓度包被,与1∶3 000倍稀释的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗血清（13.8μg/mL）配对,以1∶6 000稀释的商品化酶标羊抗兔IgG为指示抗体,建立了BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法,该方法可以检出2.56 U/100μL（30.5 pg/100μL）的rHis-BoIFN-γ、8U/100μL的rBac-BoIFN-γ和1U/100μL的分泌性天然BoIFN-γ。以商品化试剂盒作为平行对照,将获得的奶牛临床检测血浆样品使用BoIFN-γ抗原捕获ELISA法进行检测,结果显示两种方法检测符合率达到83.9%。本研究建立的BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法可有效检测分泌性IFN-γ,为进一步开发BoIFN-γELISA检测试剂盒奠定了基础。     

沙门菌PhoN蛋白单克隆抗体及其免疫磁珠的制备

为制备针对沙门菌Pho N蛋白的单克隆抗体(MAb),并以其制备沙门菌的免疫磁珠,本研究构建了重组原核表达质粒p Cold I-pho N和p GEX-6P-1-pho N,利用大肠杆菌系统表达并通过亲和层析纯化了鼠伤寒沙门菌重组蛋白His-Pho N和GST-Pho N,分别作为免疫原和筛选抗原,利用B淋巴细胞杂交瘤技术,经间接ELISA方法筛选获得5株能稳定分泌Pho N蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别为8H2、11E5、4B2、8F2、3B2。采用亚类鉴定试剂盒、间接ELISA和western blot方法分别鉴定各MAb的亚型、效价及特异性结合沙门菌Pho N蛋白的能力,结果显示,5株MAb的亚型均为Ig G2a,测定其效价达1∶4 096 000以上,均能特异性结合His-PhoN和GST-Pho N,而不与His-OmpC、His-OmpF蛋白反应,表明MAb特异性较好。选取4B2 MAb进一步分析其对不同血清型沙门菌和非沙门菌的特异性,western blot结果显示4B2 MAb仅特异性识别不同血清型沙门菌,而不与大肠杆菌、志贺杆菌、空肠弯曲菌和单核细胞增生李斯特菌反应;...     

布鲁氏菌重组L7/L12蛋白对小鼠免疫保护效果的评价

为探究布鲁氏菌候选保护性抗原L7/L12的免疫原性及其对小鼠的免疫保护效果,本研究经PCR扩增羊种布鲁氏菌16M株L7/L12基因,构建重组质粒p ET-22b-L7/L12,经双酶切鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并纯化后利用SDS-PAGE与western blot检测。结果显示,获得了16 ku的重组L7/L12蛋白(r L7/L12),且纯化效果较好。将r L7/L12以100μg/只腹腔注射免疫6周龄SPF BALB/c小鼠,14 d后以50μg/只加强免疫。首免后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d及49 d分别对所有小鼠尾静脉采血,通过间接ELISA方法检测小鼠血清中的Ig G抗体、其亚型(IgG1、Ig G2a)抗体水平及二者比值;并利用ELISA方法检测首免后21 d和35 d两组小鼠血清中细胞因子IL-2、IL-10和TNF-α的分泌水平。结果显示,首免后14 d,小鼠血清中Ig G抗体水平迅速升高,于首免后21 d达峰值并持续至首免后49 d (P<0.01),对照组小鼠则一直无抗体产生;首免后14 ...     

猪γ干扰素单克隆抗体的制备与特性研究

为了制备高特异性的抗猪γ干扰素(IFN-γ)抗体,试验采用原核表达的携带His标签的重组猪IFN-γ(PoIFN-γ)蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备杂交瘤细胞;并以携带GST标签的重组蛋白PoIFN-γ(GST-PoIFN-γ)为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选稳定分泌抗体的单克隆细胞株;而后通过间接ELISA方法、单克隆抗体亚型鉴定试剂盒、SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定和间接免疫荧光方法对获得的单克隆抗体的腹水效价、亚型、反应特异性等生物学特性进行鉴定。结果表明：经筛选后共获得7株能稳定分泌PoIFN-γ的单克隆抗体细胞株;7株单克隆抗体的腹水效价在1∶2 048 000～1∶16 384 000之间,均为IgG1亚型,均能与原核表达及真核表达的PoIFN-γ蛋白发生特异性反应且反应性良好。说明试验成功制备了可特异性识别PoIFN-γ的单克隆抗体。