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根据Cre基因序列设计并合成1对引物,PCR扩增出Cre基因编码区,克隆于pIREShyg载体,得到重组质粒pIREShyg-Cre,转染HEK-293A细胞后经400 μg·mL-1 Hygromycin B的筛选,将其中1个阳性克隆命名为293A-Cre.利用伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)S03109株(带有gfp报告基因表达盒及loxP位点)感染293A-Cre细胞,荧光显微镜观察、PCR及Western blot检测gfp基因的表达.结果表明,S03109感染293A-Cre二代后loxP位点间的gfp表达盒被删除,获得重组病毒S0419.将S0419感染已转染pBlulox的293A-Cre细胞,在RK13细胞上筛选得到表达LacZ的重组病毒S06293.S06293在293A-Cre细胞上传代2次,X-Gal原位染色表明LacZ的表达消失.测序结果证实,在Cre重组酶作用下,2个同向loxP序列之间的外源基因序列被正确除去.以上结果表明,本研究构建的稳定表达Cre重组酶的293A-Cre细胞系可以用于在包含有loxP位点的PRV基因组中外源基因的快速删除或整合. 相似文献
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朝阳县柳城动监所属于城关动监所,属于窗口单位,其工作代表全县基层动监所的形象,文中结合当地畜牧业发展情况简要介绍动监所开展的一些工作和成绩。 相似文献
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2013年10月26日,中国青岛,由中国农业机械化协会农机专业服务组织分会主办的"农机服务组织发展论坛"在全国农业机械展览会期间召开,论坛主题为"创新农业经营体制,构建新型农机社会化服务体系。"论坛伊始,山东省农业厅副厅长高明飞致辞。随后,农业部农村经济体制与经营管理司巡视员关锐捷,农业部农业机械试验鉴定总站副书记国彩同,中国农业大学工学院教授杨敏丽,江苏省农机局副局长王勇,福田雷沃重工农装事业部总经理王玉荣,黑龙江省仁发现代农业农机专业合作社理事长李凤 相似文献
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1主要症状最急性型,兔未见任何变化即突然死亡。多数病兔初期精神沉郁,食欲不振,腹部膨胀,粪便细小两头尖、成串,外包有透明、胶冻样粘液随后出现水样腹泻,肛门、后肢、腹部被毛被粘液及黄色水样稀粪污染。病兔的四肢发冷、磨牙、流延,眼眶下陷,迅速消瘦,脱水,可视黏膜苍白。2剖检变化胃膨大,充满大量液体和气体,胃黏膜上有出血点。十二指肠充满气体和染有胆汁的粘液,空肠、回肠、盲肠充满半透明胶样粘液,肠道黏膜和浆膜充血、出血、水肿。胆囊扩张,黏膜水肿。肝脏及心脏局 相似文献
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根据Cre基因序列设计并合成1对引物,PCR扩增出Cre基因编码区,克隆于pIREShyg载体,得到重组质粒pIREShyg-Cre,转染HEK-293A细胞后经400 μg·mL-1 Hygromycin B的筛选,将其中1个阳性克隆命名为293A-Cre.利用伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)S03109株(带有gfp报告基因表达盒及loxP位点)感染293A-Cre细胞,荧光显微镜观察、PCR及Western blot检测gfp基因的表达.结果表明,S03109感染293A-Cre二代后loxP位点间的gfp表达盒被删除,获得重组病毒S0419.将S0419感染已转染pBlulox的293A-Cre细胞,在RK13细胞上筛选得到表达LacZ的重组病毒S06293.S06293在293A-Cre细胞上传代2次,X-Gal原位染色表明LacZ的表达消失.测序结果证实,在Cre重组酶作用下,2个同向loxP序列之间的外源基因序列被正确除去.以上结果表明,本研究构建的稳定表达Cre重组酶的293A-Cre细胞系可以用于在包含有loxP位点的PRV基因组中外源基因的快速删除或整合. 相似文献
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