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本研究旨在建立稳定表达猪FcγRⅠ的Marc-145细胞系。从猪肺泡巨噬细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅠ和γ链cDNA,并分别构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅠ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300μg.mL-1)和G418(400μg.mL-1)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅠ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环和流式细胞术对细胞系进行鉴定。结果表明成功构建了猪FcγRⅠ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪FcγRⅠ的细胞系,且表达于转染细胞表面的poFcγRⅠ受体分子能与猪IgG特异结合。本研究为进一步研究奠定了基础。 相似文献
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从鸡B淋巴DT40细胞系中克隆β-actin启动子,替换pCDNA3.1(+)载体中的SV40启动子,构建β-octin启动子驱动的Neomycin抗性基因表达框.将克隆的slgM λ轻链基因两侧各约2 kb的序列插入到抗性表达框的两侧作为同源臂.PCR、酶切以及测序结果表明成功构建了靶向slgM λ轻链基因的置换型打靶载体pCDNA-act-neo-HR.为建立slgM λ轻链基因敲除的DT40细胞模型,探究slgM λ轻链在IBDV感染DT40细胞过程中的作用奠定了基础. 相似文献
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从鸡B淋巴DT40细胞系中克隆-βactin启动子,替换pCDNA3.1(+)载体中的SV40启动子,构建-βactin启动子驱动的Neomycin抗性基因表达框。将克隆的sIgMλ轻链基因两侧各约2 kb的序列插入到抗性表达框的两侧作为同源臂。PCR、酶切以及测序结果表明成功构建了靶向sIgMλ轻链基因的置换型打靶载体pCDNA-act-neo-HR。为建立sIgMλ轻链基因敲除的DT40细胞模型,探究sIgMλ轻链在IBDV感染DT40细胞过程中的作用奠定了基础。 相似文献
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胃溃疡(GU)是一种常见的消化道疾病,其发病率高达10%,然而其发病的主要机制是消化道侵袭因素的增强和防御修复因素的减弱。由于抗生素的长期使用,会导致畜禽产品中残留大量耐药性细菌和药物,对人类的健康存在极大隐患[1-2]。因此,世界各国都明令禁止抗生素的滥用。中药具有药用和营养两个方面的作用, 相似文献
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以双亚7号为试材,建立温度(X)1、时间(X)2、氮素添加剂(X3)和起始酸碱度(X4)与纤维强度(Y)的回归方程。结果表明,提高起始pH到9,降低温度到24℃,添加麻重0.76%的尿素,延长脱胶时间到7d,可以获得最大强度259.2N的纤维,这也提示对于耐沤型品种,缓慢脱胶过程可以避免纤维束内纤维细胞间果胶质的过度损失,获得高强度纤维。 相似文献
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为了提高禽流感核衣壳蛋白(NP)在大肠杆菌中的表达量,试验研究了载体、培养基、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对NP融合蛋白表达量的影响。结果:使用LB培养基于37℃培养3.5h后,采用终浓度为2mmol/L的IPTG在28℃、200r/min诱导培养5h,pET32a-NP融合蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测结果表明pET32a-NP融合蛋白的分子质量与预计大小一致,约为70ku;Western-blot结果表明,pET32a-NP融合蛋白能与抗His标签的单克隆抗体发生特异性反应,说明NP蛋白得到正确表达。 相似文献
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