发根农杆菌Ri质粒转化康乃馨初步研究

利用具有Ri质粒的发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）Pri15834对康乃馨组培苗的带叶茎节进行转化试验。转化后的外植体在K0附加500mg/L羧苄青霉素培养基上培养2～3周后，受感染的伤口部位长出无向地性的毛状根，频率为37.07%。将毛状根切碎分别在K0、K1、K2培养基上继续培养3周，毛状根在K0上表现为无限生长，在K1上主要表现为长愈伤组织，频率为51.42%，而在K2上则主要表现为长绿苗，频率为25%。这说明发根农杆菌的Ri质粒已整合到康乃馨细胞基因组中并得到表达。     

酶制剂在农业中的应用及生物技术改良

酶是由多种氨基酸、维生素及矿物质等构成的活性蛋白质,广泛地存在于自然界。酶制剂工业是生物工程的重要组成部分,其应用非常广泛。主要从畜禽养殖、水产养殖、农药残留降解、生物农药、作为抗生素替代品和农业食品加工以及生物技术在该领域应用进行简短的综述。     

酶制剂在农业中的应用及生物技术改良

酶是由多种氨基酸、维生素及矿物质等构成的活性蛋白质,广泛地存在于自然界。酶制剂工业是生物工程的重要组成部分,其应用非常广泛。主要从畜禽养殖、水产养殖、农药残留降解、生物农药、作为抗生素替代品和农业食品加工以及生物技术在该领域应用进行简短的综述。     

一个小麦AP2/ERF转录因子家族单独亚族基因的克隆及分析

AP2/ERF家族转录因子是植物中重要的一类转录因子,广泛参与植物各类生理过程.为了给该家族转录因子的深入研究提供基础,利用小麦EST数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/UniGene/UGOrg.cgi?TAXID= 4565),以拟南芥AP2/ERF家族转录因子单独亚族成员AtAP2-Soloist的氨基酸序列为探针,搜索到一个小麦UniGene数据,经拼接得到1个全长cDNA序列(TaAP2-Solosit),通过RT-PCR方法从"扬麦15"的cDNA中克隆了该转录因子基因(YM15AP2-Solosit).克隆的转录因子核苷酸序列与电子克隆的序列只有1个碱基不同,两者编码氨基酸序列一致.从cDNA序列、氨基酸序列的相似性、组成成分、理化性质、疏水性/亲水性、进化树、功能域、二级和三级结构等方面进行了分析,结果显示"扬麦15"中的YM15AP2-Solosit转录因子属于AP2/ERF家族中的单独亚族,是亲水性蛋白,在蛋白质的三级结构上与拟南芥的AtAP2-Soloist相似.EST丰度分析显示,YM15AP2-Solosit在根、茎、叶和花中均有表达.     

植酸酶的生物技术改良及应用

植酸是植物中磷的储存库。许多植物饲料,尤其是谷物和豆类中,大部分磷元素以植酸磷的形式存在。植酸是一种抗营养因子,与多种金属离子以及蛋白质螯合从而抑制营养因子的吸收。植酸酶广泛的存在于自然界中,能够催化降解植酸,形成无机的磷酸盐。单胃动物自身植酸酶含量很低,不能有效的利用以植酸形式储存的磷。无机磷的添加一定程度上缓解动物磷营养的问题,但是大量无机磷的添加会导致较为严重的环境问题。植酸酶作为饲料添加剂已经得到广泛的应用,能够提高单胃动物对饲料中磷和矿物营养的吸收,并且降低磷的排放。该文主要综述了植酸酶的生物技术改良和应用。     

新型植酸酶基因YkAPPAS在毕赤酵母中的表达及其酶学特性分析

根据密码子的偏好性,采用PTDS方法化学合成了一个来源于Yersinia kristesenii的新型植酸酶基因(YkAPPAS),并且作为外分泌蛋白在毕赤酵母GS115中成功表达。重组植酸酶YkAPPAS的蛋白分泌量可达到106.73μg/mL。对重组植酸酶的酶学性质研究表明:该酶的比活力为2 330 U/mg;最适pH为4.5和6.0;最适温度为45℃;100℃处理5 min后其剩余活性为47.55%;90℃处理5 min后其剩余活性为56.75%;在pH 3—12时的活性均在30%以上。Li~+、EDTA对酶活有一定的激活作用;Zn~(2+)、Cu~(2+)对酶活有一定的抑制作用。重组植酸酶还具有良好的抗胃蛋白酶和胰蛋白酶水解的特性。     

ACC解氨酶基因转入青花菜的研究

利用根癌农杆菌介导，以下胚轴为外植体把ACC解氨酶基因转入青花菜栽培品种“上海2号”，获得了转基因再生植株，对转化植株进行GUS检测，初步证明ACC解氨酶基因已转入青花菜中表达，另外，对影响转化频率几个因素，即：农杆菌的悬浮液、共培养的方法、维持培养的时间进行了探讨，由此总结出了青花菜转基因的优化程序，采用优化程序的转化率达到了5.5％。     

水稻转录因子DREB1的克隆与原核表达

DREB类转录因子特异地与DRE顺式作用元件结合,在非生物逆境胁迫(干旱、低温、高盐)中激活胁迫诱导基因的表达,使植物能够耐受水分胁迫的影响。以顺式元件rd29A3 cis构建诱饵质粒.通过酵母单杂交方法从水稻cDNA文库中筛选获得7个阳性质粒,序列分析显示阳性质粒中插入的cDNA序列一致,根据核苷酸序列推导出cDNA编码一219个氨基酸组成的多肽,该多肽有保守的EREBP/AP2结构域,N端为核定位信号(NLS),而C端则为转录激活区域,属于EREBP/AP2类转录因子,命名为RdreB1。重新合成的RdreB1 I基因降低了GC比含量,诱导处理产生了约45 kD的特异表达的融合蛋白。     

抗逆相关DREB转录因子的研究进展及应用

DREB转录因子即干旱应答元件结合蛋白,可以特异地与DRE顺式作用元件结合,在非生物逆境胁迫(干旱、低温、高盐)中激活胁迫诱导基因的表达,使植物能够耐受水分胁迫的影响.本文介绍DREB转录因子的结构特点和生物学功能,表达调控以及在抗逆基因工程方面的研究进展,同时对DREB转录因子在信号传递和调控网络方面的复杂性进行了讨论.