高加索三叶草×白三叶胚萌发条件的探索

以六倍体高加索三叶草Trifolium ambiguum与四倍体白三叶T．repens为亲本,通过远缘杂交,采用组织培养手段对杂交胚的萌发条件进行探索。结果表明：以高加索三叶草为母本、白三叶为父本,在花期8：00-9：00授粉,授粉后12～13d取胚．用质量分数10％ NaCIO灭菌6．5～7min,在不加任何外源激素的改良MS培养基上,胚萌发率最高,达8％。高频扩繁时,再附加0．25mg／L2,4-D＋0．50mg／L6-BA可获得较高萌发率。     

白三叶×高加索三叶草F1代茎段离体培养器官发生的研究

以白三叶Trifoliumrepens×高加索三叶草T.ambiguum未成熟胚离体培养产生的F1代无菌苗的茎段为外植体,进行不定芽途径的直接器官发生培养。筛选适宜的诱导、分化及生根培养基,研究不同质量浓度激素组合对体细胞器官发生的影响,为建立扩繁体系及之后的回交试验奠定基础。结果表明:MS+2,4-D 0.1 mg/L、6-BA2 mg/L为适宜的诱导培养基,MS+NAA0.5 mg/L、6-BA1 mg/L、KT 1 mg/L为适宜的分化培养基,不添加任何激素的1/2 MS培养基为适宜的生根培养基。     

高加索三叶草、白三叶及其杂种F1代的ISSR分析

利用耐寒、耐旱的六倍体高加索三叶草与强固氮能力、生长能力的大兴安岭四倍体白三叶进行远缘杂交,通过胚拯救技术得到杂种F1,同时通过组培快繁技术建立了F1的再生体系.为了明确杂种F1与亲本在DNA水平上的差异,建立适用于F1的分子标记反应体系,利用ISSR技术对其进行了鉴定分析.结果表明,16个ISSR引物共扩增出170条条带,长度介于100～2000bp之间,多态性条带138条,多态性条带百分率为81.18％;4个供试材料间的遗传距离变幅为0.0756～0.6798,平均为0.5313;父本白三叶与母本高加索三叶草之间的遗传距离较大,F1与母本高加索三叶草的遗传相似系数较大,F1组培再生植株与杂种F1之间存在轻微差异;从分子水平鉴定了杂种F1的真实性,并确定了其与亲本之间的遗传差异.     

三种三叶草幼苗期抗旱性差异的研究

在模拟干旱条件下测定了高加索三叶草、白三叶和红三叶幼苗期的抗旱生理指标.结果表明,随干旱时间的延续,三种三叶草都表现出相对含水量下降、细胞膜透性升高、游离脯氨酸含量增加、相对生长率下降等特征,但三种三叶草的反应速度及复水后各指标的恢复能力各不相同.综合评价后初步认为,高加索三叶草的抗旱性强于白三叶和红三叶.     

CdCl2、SNP、CdCl2+SNP对白三叶草种子萌发生理生化的影响

研究了CdCl2、SNP、CdCl2 SNP对白三叶Trioflium repens草种子萌发及相关生理生化特性的影响。结果表明,高于或等于100μmol/L的CdCl2浸种显著降低了白三叶草种子的发芽率、萌发种子内的蛋白酶活性和游离氨基酸的含量,明显提高了萌发种子的电解质泄漏率;在一定的范围内,随着SNP浸种浓度的增加,白三叶草种子的发芽率、萌发种子内的蛋白酶活性和游离氨基酸的含量增加,萌发种子的电解质泄漏率降低,但高于200μmol/L的SNP浸种却明显降低白三叶草种子的发芽率、萌发种子内的游离氨基酸的含量,提高萌发种子的电解质泄漏率;在CdCl2胁迫(浸种浓度≥100μmol/L)的同时,加入200μmol/L的SNP,明显缓解了CdCl2的毒害作用。     

高加索三叶草、白三叶及其杂种F1代的RAPD分析

以高加索三叶草为母本,白三叶为父本,获得杂种F1代植株.利用RAPD技术对亲本及其F1的遗传差异性进行研究,从50个随机引物中筛选出14个适宜引物,共扩增出181个RAPD位点,多态性位点百分率为74.0％,每个引物扩增的条带数平均为3.8～4.8,DNA片段长度在100～2000bp之间.根据扩增图谱计算表明,F1代与白三叶的遗传相似系数为0.3465,与高加索三叶草的遗传相似系数为0.5842,说明F1代与母本的遗传关系更近或者说F1代表达了更多源于母本的遗传信息.     

激素对白三叶愈伤组织形成的影响及体细胞胚的组织学观察

以白三叶3个品种瑞文德、铺地和海法的子叶和下胚轴为外植体,采用正交设计试验研究2,4-D、6-BA和KT三种生长调节剂的不同浓度水平对白三叶愈伤组织诱导及继代的影响,筛选最佳激素组合并进行体细胞胚的组织学观察.结果表明:同一品种同一时期不同外植体愈伤诱导的最佳激素组合不相同,不同品种间也不一致;瑞文德子叶胚性愈伤诱导的最佳培养基为改良SH+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.35mg/L+KT 0.5mg/L,下胚轴为改良SH+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.2mg/L+KT 0.35mg/L;铺地子叶胚性愈伤诱导的最佳培养基为改良SH+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L,下胚轴为改良SH+2,4 D 5mg/L+6-BA 0.35mg/L+KT 0.5mg/L;海法子叶胚性愈伤诱导的最佳培养基为改良SH+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.2mg/L+KT 0.35mg/L,下胚轴为改良SH+2,4-D5mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L.组织学观察表明,体细胞胚的发育经历球形胚、心形胚、鱼雷胚及子叶胚四个阶段后形成一个完整的体细胞胚.     

三叶草愈伤组织诱导及分化的研究

以4个三叶草品种的胚轴、叶片和子叶为外植体,研究了不同激素浓度配比对愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明,不同品种不同外植体愈伤诱导率差异较大,杂三叶下胚轴为较适宜的外植体,其愈伤组织诱导率和体细胞胚形成率最高可达96.7%和33.4%;改良SH+2,4-D 4.0 mg/L+KT 1 mg/L为最佳胚性愈伤组织诱导培养基,MSO培养基适宜三叶草胚状体的形成及植株再生。     

三种三叶草幼苗期抗旱性差异的研究

在模拟干旱条件下测定了高加索三叶草、白三叶和红三叶幼苗期的抗旱生理指标。结果表明,随干旱时间的延续,三种三叶草都表现出相对含水量下降、细胞膜透性升高、游离脯氨酸含量增加、相对生长率下降等特征,但三种三叶草的反应速度及复水后各指标的恢复能力各不相同。综合评价后初步认为,高加索三叶草的抗旱性强于白三叶和红三叶。     

高加索蜜蜂对俄罗斯紫花苜蓿授粉的效果

紫花苜蓿Medicago sativa自花授粉率低,利用传粉昆虫辅助授粉紫花苜蓿是提高单位面积种子产量和经济效益的有效途径。高加索蜜蜂Apis mellifera饲养管理方便、技术成熟、成本低。试验研究了高加索蜜蜂对俄罗斯紫花苜蓿授粉效果,结果表明：高加索蜜蜂吻特长,达7.2 mm,每日访花始期为9：00,访花高峰期为12：00,访花结束期为18：00。访花适宜气温为1525 ℃,访花速度为3040朵/min,日平均访花次数为1.98万2.64万朵/只。高加索蜜蜂授粉俄罗斯紫花苜蓿的有效放蜂容量为125 000只/hm2以上（6个以上强群高加索蜜蜂）,俄罗斯紫花苜蓿最高表现种子产量为1 067.6 kg/hm2。     

2种三叶草杂种F1代胚性愈伤组织筛选

以高加索三叶草(Trifolium ambiguum Bieb.)与白三叶(Trifolium.repens L.)杂交后胚离体培养产生的F₁无菌苗的茎段为外植体,筛选诱导愈伤组织的最适培养基,将F₁茎段产生的愈伤组织经过继代后转移到分化培养基中,研究不同浓度激素组合对体细胞胚胎产生的影响。结果表明:MS+6-BA+NAA是诱导F₁茎段愈伤组织的适宜培养基;MS+2,4-D+6-BA+NAA+KT+CH为F₁茎段愈伤组织的适宜分化培养基;对分化后的胚性愈伤进行组织学观察,可见其表面形成许多瘤状突起,即胚性细胞团,它们可以继续发育形成体细胞胚,为快速得到数量较多的杂种F₁再生苗奠定基础。     

卡那霉素对白三叶种子发芽及无菌苗生长的影响

通过室内发芽试验研究了卡那霉素(Kan)对白三叶Trifolium repens种子萌发及幼苗生长的影响,结果表明,Kan对白三叶种子发芽势和发芽率没有影响,但对根系和地上部分的生长作用显著.表现为须根受到抑制、主根变短增粗、株高降低、叶片数减少及单株平均生长量减少,出现白化现象,且随着Kan浓度增加,抑制作用增强.由此设定Kan对白三叶无菌苗根系生长的有效浓度为10～20 mg/L;对地上部分生长的有效作用浓度为30 mg/L;对白化苗的有效浓度为40 mg/L.     

镉胁迫对白三叶和马蹄金种子萌发的影响

采用不同浓度的镉处理白三叶和马蹄金种子,研究两者萌发阶段对镉胁迫的反应。结果表明:镉浓度低于5mg/L时促进了白三叶和马蹄金种子的萌发。镉浓度为10mg/L时,白三叶发芽率和活力指数开始下降,而马蹄金依然高于对照。随镉处理浓度的继续增高,两者种子发芽率和活力指数逐渐下降。两个草种相比较,在相同镉胁迫作用下,马蹄金比白三叶表现出了较强的耐镉性。     

红三叶和白三叶愈伤组织的诱导和胚性细胞悬浮系的建立

以红三叶野生品种巴东红三叶的叶片为外植体,在MB-1至MB-9的固体培养基上诱导愈伤组织 ,筛选出最佳培养基是MB-9培养基;以白三叶栽培品种"路易斯安娜"和"Huca"的叶片为外植体,接种在MB-9固体培养基上诱导愈伤组织,愈伤组织形成后均经MB-9固体培养基上继代3～4次,获得胚性愈伤组织后再转至MB+3mg/L 2,4-D+0.7mg/L BA+0.2mg/L NAA+2mg/L 甘氨酸+500mg/L CH+3%蔗糖的液体培养基中,经强化培养两个月后获得胚性细胞悬浮系.实验结果表明,缩短换液时间(每隔3～4d换液一次)可加快胚性细胞悬浮系的建立.     

大针茅成熟胚愈伤组织诱导及分化的探索

为摸索大针茅成熟胚诱导、分化的最佳培养基,以大针茅的成熟胚为外植体,采用不同激素配比的培养基进行筛选.结果表明:在大针茅成熟胚胚性愈伤组织诱导和分化过程中,2,4-D,6-BA等激素的浓度对大针茅成熟胚的组织培养影响较大.大针茅愈伤组织诱导最佳培养基:培养基+2,4-D(2.0mg/L),平均出愈率为91.67%;继代培养基:N6+CH(500mg/L)+2,4-D(2.0mg/L)+6-BA(0.5mg/L),愈伤诱导率为80%;添加0.3mg/L ABA对非胚性愈伤组织转化为胚性愈伤组织有一定帮助,诱导率为23.3%.     

江仓矿区高加索三叶草引种试验

青藏高原气候严寒,不利于引种牧草的生长和越冬.高寒矿区植被恢复过程中,可选用牧草种类稀少,且以禾本科牧草为主,需要豆科植物成分来提高群落的稳定性.本研究在江仓矿区引进高加索三叶草,为一种在耐寒、耐旱、耐涝和耐牧性方面均表现良好的根茎型豆科牧草.高加索三叶草在江仓矿区的主要引种表现为:高加索三叶草在江仓矿区越冬率很高,连...     

多叶苜蓿自交S1代的胚挽救培养

以苜蓿(Medicago sativa)多叶性状S1代的3个单株为材料,研究了3份参试材料的败育率,测定了开展胚挽救培养的最佳取材时间和不同激素水平对苜蓿自交系胚挽救的影响。结果表明,参试材料平均败育率为37.59%;进行苜蓿胚挽救培养的最佳取样时间为授粉后30 d;胚挽救培养的最佳培养基配方为MS+0.5 mg/L IAA +0.07 mg/L 6 BA,蔗糖30 g/L,琼脂7 g/L,pH值5.8～6.1。对萌动的胚进行愈伤组织诱导发现,参试材料平均诱导率为85.32%,愈伤组织平均分化率为75.66%。研究以期为苜蓿胚挽救育种提供理论基础,并为苜蓿特异性状自交系结实率低等方面的研究提供有效的解决途径。     

紫花苜蓿组织培养再生体系的建立

以紫花苜蓿无菌苗的下胚轴、子叶、叶片和叶柄为外植体,研究了不同培养基、不同激素种类和配比对胚性愈伤组织诱导的影响以及不同分化培养基对胚状体分化的影响.结果表明:下胚轴外植体胚性愈伤组织诱导率最高;最佳胚性愈伤组织诱导培养基为改良SH 2.0mg/L 2,4-D 0.5 mg/L 6-BA;最佳胚状体诱导培养基为MSO 2.0 mg/L 6-BA 0.5mg/L NAA;成苗培养基为1/2 MS 1% 蔗糖 0.7%琼脂.     

紫花苜蓿不同栽培品种植株再生的研究

离体培养条件下对紫花苜蓿地方栽培品种--陇东苜蓿、和田苜蓿、准格尔苜蓿以及引进品种Rambler苜蓿植株不同部位的再生进行了研究,结果表明,不同的苜蓿品种、外植体、外源激素种类及其浓度等因素均影响着植株的再生.陇东苜蓿下胚轴愈伤组织出愈率和体细胞胚形成率最高可达91.04%和63.75%;和田苜蓿下胚轴愈伤组织出愈率最高可达92.05%,体细胞胚形成率最高为56.82%.这2个品种在紫花苜蓿的组织培养植株再生中是较理想的试验材料;紫花苜蓿下胚轴是理想的受体材料.苜蓿愈伤组织的诱导、体细胞胚的形成以2.0 mg/L 2,4-D处理2周为最佳;在2.0 mg/L 2,4-D 0.5～2.0 mg/L 6-BA的作用下,外植体产生愈伤组织以及进一步发育的趋势较强.对体细胞胚的发育和幼苗的形成则以2.0 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA的激素组合进行处理.适宜的生根培养基为1/2 MS 1.0 mg/L IBA 1%蔗糖 0.7%琼脂.     

海滨雀稗再生体系的建立

以海滨雀稗(Paspalum vaginatum cv.Sea spray)的成熟种子为外植体,运用正交试验设计,在MS基础培养基上添加不同浓度的2,4-D、6-BA、NAA、KT、CuSO4、AHC等外源物质,分析其对愈伤组织诱导、胚性愈伤组织分化的影响,建立海滨雀稗高频再生体系,为基因工程育种奠定基础.试验结果表明,在MS培养基中添加2.0 mg/L 2,4-D和0.5g/L AHC 能提高种子的发芽率至97.50％;最佳胚性愈伤诱导培养基为:MS +2,4-D 3.0mg/L+CuSO4 15.0 mg/L+AHC 1.0g/L,其胚性出愈率为66.88％;最佳分化培养基为:MS+6-BA 8.0mg/L+KT 0.05 mg/L+CuSO4 10.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,其分化率为95.00％.