沙葱内生菌的分离鉴定及抑菌活性

以荒漠植物沙葱为材料,分离筛选出对植物病原菌具有较强拮抗活性的内生菌,可为生防菌剂的开发提供材料。采用多种培养基通过稀释涂布法从沙葱根、茎、叶不同组织中分离出内生菌,进行形态学观察、分子生物学鉴定和抑菌活性研究。分离出的9株内生细菌均为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）菌株,其中的ZT4、ZT5、ZT10和ZT14对7种植物病原真菌表现出较强的拮抗作用,以ZT14的拮抗作用最强,抑菌率均在65%以上。以ZT14为目标菌,研究其生物学性状与抑菌活性,发现该菌株在系统进化树上与解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）聚在同一分支,同源性为100%,由此将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌;但ZT14次生代谢产物的抑菌活性较低,推测该菌株可能通过与病原菌竞争生长空间和营养而发挥抑菌作用。     

通过染色体整合几丁质酶基因提高伯克氏菌生防能力

为了提高伯克氏菌Burkholderia vietnamiensis的生防能力,通过Tn5转座子介导,将其携带的来自枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的几丁质酶基因整合到野生伯克氏菌B418染色体DNA上,获得工程菌株B418-37。对获得的转化子进行Southern杂交和几丁质酶活性检测,结果证实几丁质酶编码基因已整合到伯克氏菌B418-37染色体DNA上并能表达几丁质酶。生物学特性研究发现几丁质酶基因整合到伯克氏菌染色体中,没有影响野生菌的解磷、解钾、固氮及其在植物根际的定殖能力。平板抑菌试验和温室盆栽试验显示,与野生型相比,该工程菌株对多种病原真菌的抑菌效果增强,说明几丁质酶在植物病害的防治中具有重要作用。上述结果说明通过染色体整合几丁质酶基因是获得多功能生防工程菌的有效途径之一。     

花生内生菌的种群及动态分析

１９９４－１９９７年,先后从山东省主要花生产区监沂、烟台等地采集约１０００株不同类型的花生无病 ,进行了植株内主要微生物类群分析。结果表明,不同品种花生的内生菌都表细菌和真菌,未分离到放线菌和酵母菌,细菌以芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｐ．）黄单孢菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｓｐｐ．）和欧文氏菌（Ｅｒｗｉｎｉａｓｐｐ．）为优势种群。其中芽孢杆菌属以巨大芽孢杆菌（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、蜡样芽孢杆     

溴甲烷土壤熏蒸处理，植物促生菌对大田黄瓜病害的生物防治作用

有人发现，植物生长促生菌（PGPR）能诱导黄瓜产生诱发系统抗性。为了进一步研究植物生长促生菌在有或无溴甲烷土壤熏蒸情况下对黄瓜生长及其自然发生的病害的作用，我们于1996年－1997年进行了田间试验，试验设7个植物生长促生菌的种子处理，其中包括枯草芽孢杆菌（Bacillus punilus)INR7,萎蔫短小杆菌（Curtolxacteriun flaccunfaciens)ME1和枯草芽孢杆菌（Bacillus punilus)GBO33个菌株的单菌株处理及其4个混合菌株的处理。两年的数据表明，在无溴甲烷（MeBr)土壤熏蒸的情况下，所有7个植物生长促生菌处理与空白对照组相比都能显著促进黄瓜植株生长；而在有溴甲烷熏蒸的情况下，同样7个植物生长促生菌试验处理中，1996年有3个处理而1997年只有1个处理显著促进植株生长。1996年试验结果表明，7种植物生长促生菌处理中，有或无溴甲烷熏蒸处理黄瓜主茎生长长度的结果均相似。两年的田间试验表明，有或无溴甲烷的熏蒸；7种植物生长促生菌处理与空白对照相比都能显著减轻黄瓜叶病的严重度。1996年自然发生的叶病是黄瓜角斑病（Pseudomonas syringae pv.lachrymans)，1997年出现的是炭疽病菌（Colletotrichum orbiculare)和角斑病的复合侵染现象。两年中，无论是有还是无溴甲烷熏蒸的情况下，植物生长促生菌菌株的混合物处理比单个菌株处理表现出较高的抗病作用。结果表明，植物生长促生菌诱导蔬菜产生的诱发系统抗性作为蔬菜病虫害综合防治中的一个措施，不应该受到从现有蔬菜生产技术标准中逐步取消溴甲烷而产一的负面影响，植物生长促生菌的促生作用能补偿在无溴甲烷土壤熏蒸处理下造成的植株生长减少。     

兰州百合防病促生细菌筛选及其效果评价

为解决兰州百合连作障碍所引起的一系列土壤问题,并为枯萎病等土传病害提供安全有效的防治方法,本研究从健康兰州百合根际土壤中筛选得到防病促生菌140株,其中有拮抗能力菌81株,溶有机磷菌102株,溶无机磷菌82株,固氮菌118株,解钾菌32株。通过定量测定,选取功能优良的菌株若干,随机组合发酵后测定各组合拮抗、溶磷、固氮及解钾性能,得到5组优良组合（BP1～BP5）,经Topsis综合分析得知组合BP5性能最优。对组合BP5所涉及的4株进行鉴定,JK21为耐寒短杆菌Brevibacterium frigoritolerans,JK22为蜡样芽胞杆菌Bacillus cereus,N11、M40为枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis。以BP5制作菌剂,测定其防病促生能力发现,菌剂防效良好,在68%以上;百合产量提升,单株总小鳞茎鲜重比对照组（CK）增加40 g左右;百合品质提升,可溶性糖、还原糖、粗蛋白、粗脂肪、Vc和flavone含量均升高,粗灰分和粗纤维的含量降低;土壤质量得到改善,速效钾、碱解氮、土壤脲酶、蔗糖酶和碱性磷酸酶的含量升高显著,根际土壤中固氮基因、好氧自生固氮菌和厌氧自生固氮菌含量均显著增高。以上结果表明：菌剂BP5组合,能够解决百合连做障碍,改善土壤质量。     

蓝莓枝枯病拮抗细菌HMQAU140045的鉴定和抑真菌活性

以蓝莓毛色二胞枝枯病菌假可可毛色二胞Lasiodiplodia pseudotheobromae为靶标菌,通过稀释平板法从山东青岛的蓝莓种植园根际土壤中分离出20株细菌,采用对峙平板法和菌丝生长速率法筛选得到一株对靶标菌具有明显抑制效果的拮抗菌株HMQAU140045,采用凹玻片法和菌丝生长速率法测定该菌株发酵滤液对靶标菌孢子萌发和菌丝生长的影响。结果表明,稀释50倍的发酵滤液的抑制率可达100%。离体枝条试验结果表明,发酵液不同组分对蓝莓毛色二胞枝枯病的防治效果均可达90%以上。菌丝生长速率法测定结果表明,该菌株抑真菌谱广,对包括4种蓝莓枝枯病菌在内的15种植物病原真菌具有良好的拮抗作用。通过形态观察、生理生化特性以及gyrB的序列分析,确定该菌株为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。试验结果表明,解淀粉芽孢杆菌菌株HMQAU140045具有较好的抑真菌活性。     

利用拮抗菌防治棉铃疫病

从作物茎内和棉田土中分离纯化到１９３株细菌和９０株真菌,通过平板对峙法筛选出对棉铃疫菌具拮抗作用的细菌２６株和真菌１６株。室内离体棉铃生测表明,施用拮抗菌（芽孢杆菌ＭＢ－３、ＭＢ－７、ＭＢ－８、ＢＣ－１）２４小时后再接种棉铃疫菌比施用拮抗菌后马上接种棉铃疫菌的防治效果要好,可达６０％～８０％。田间试验结果显示,８月初仅喷施一次,ＭＢ－３和ＭＢ－７的相对防效达３４．９％和４５．４％,明显优于对照化学药剂。此外,对拮抗菌的拮抗作用机理也进行了初步讨论。     

植物内生枯草芽孢杆菌Em7菌株对葡萄灰霉病菌的抑菌活性

通过室内皿内对峙抑菌试验、分生孢子萌发抑制试验、离体果实接种试验以及电镜技术,研究测定了分离自小麦根部的植物内生枯草芽孢杆菌Em7菌液对葡萄灰霉病菌Botrytiscinerea Pers.的抑制作用及抑菌机理。结果表明:用Em7菌液处理葡萄灰霉病菌后,在PDA培养基上形成了明显的抑菌圈,直径达2.81 cm;菌液对分生孢子萌发的抑制率达到88.65%;经Em7菌液处理后,离体果实病情指数明显低于空白对照,相对防治效果达到78.92%。电镜观察发现,处理组菌丝生长异常,体表凹凸不平,局部膨大成结或缢缩,分枝变多,菌丝体内液泡增多,细胞壁增厚,细胞膜透性发生变化。表明植物内生枯草芽孢杆菌Em7菌株对葡萄灰霉病菌有良好的抑制作用,并且可以有效控制葡萄灰霉病的发生。     

猕猴桃灰霉病拮抗解淀粉芽孢杆菌X17可湿性粉剂的研制

以植物内生解淀粉芽孢杆菌X17为研究对象,通过对载体、分散剂、润湿剂、稳定剂、保护剂的筛选,确定了内生解淀粉芽孢杆菌X17可湿性粉剂最佳配方:硅藻土10%,羧甲基纤维素钠4%,十二烷基硫酸钠6%,甲基纤维素2%,糊精0.1%。结果显示,制备的解淀粉芽孢杆菌X17可湿性粉剂在25℃室温下芽孢含量为2.0×10¹⁰cfu/g,pH7.0,悬浮率78%,润湿时间35s,细度通过率99%,制剂贮藏6个月存活率达78%。盆栽试验结果表明,内生解淀粉芽孢杆菌X17可湿性粉剂和母粉500倍液对猕猴桃灰霉病的保护效果分别为80.59%和68.82%,菌株X17可湿性粉剂的防治效果优于其母粉。     

抑制镰刀菌生长的土壤拮抗菌的筛选

通过对不同作物根际土壤的处理，分离纯化出９２株细菌，从平板对峙培养和菌液对致病镰刀菌的抗生作用实验结果中，进一步筛选出１２株对三种致病镰刀菌生长有抑制作用的拮抗菌。     

咯菌腈与解淀粉芽胞杆菌X-119复配对葡萄灰霉病的防效

为探究杀菌剂与解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens X-119菌株复配防治葡萄灰霉病的可行性,通过平板试验筛选抑菌效果较好的杀菌剂与解淀粉芽胞杆菌X-119菌株进行复配,测定不同体积比复配剂对葡萄灰霉病的防效,并通过对菌丝形态、产孢量、产核能力及协同转运蛋白超家族（major facilitator superfamily,MFS）相关调控基因表达水平的观察筛选得到最优复配组合。结果显示,咯菌腈与解淀粉芽胞杆菌X-119菌株体积比为8∶2时的复配剂对葡萄灰霉病菌Botrytis cinerea H259、H261 菌株的抑制效果最佳,毒性比率分别为 1.77 和 1.73,防效分别为 90.91% 和72.33%;离体果实防效分别为83.06%和65.48%,温室防效分别为76.72%和76.24%,且复配剂防效高于单剂。且该复配剂可阻碍葡萄灰霉病菌菌丝正常生长,显著降低其产孢能力和产核能力。实时荧光定量PCR结果显示,该复配剂处理葡萄灰霉病菌后细胞膜转运蛋白相关调控基因BCIN_09g00960、BCIN_03g02340和BCIN_09g00210的表达水平下调趋势显著。表明咯菌腈与解淀粉芽胞杆菌X-119菌株复配表现出良好的防控效果,生产中可将咯菌腈与解淀粉芽胞杆菌X-119菌株按体积比8∶2复配用于葡萄灰霉病防治。     

马唐生防真菌MA4的分离鉴定及其生物学特性

【目的】筛选防治马唐（Digitariasanguinalis）的生防真菌,挖掘其应用于杂草生物防治的潜力。【方法】采用组织分离法,从自然发病的马唐植株中分离出对马唐具有较强致病力的生防菌株,通过形态学观察、ITS、β-Tubulin、EF-1α基因序列同源性比对及其系统进化分析确定其分类地位;利用单因素试验研究其生物学特性及整株生物测定法测定马唐生防真菌对几种常见杂草的侵染效果及对常见作物的安全性。【结果】分离得到的马唐生防真菌MA4被鉴定为藤仓镰刀菌（Fusarium fujikuroi）;最适合MA4生长的培养基为PDA和PSA;最适合MA4生长和产孢的培养条件为：温度28～30℃,p H值6.0～8.0,黑暗培养;MA4对马唐鲜重防效较好,达到91.4%,对看麦娘、狗尾草和钻形紫菀的鲜重抑制率分别为63.8%、80.6%、69.4%;MA4对双子叶作物相对安全。【结论】藤仓镰刀菌MA4菌株对马唐等禾本科杂草防治效果较好,对双子叶作物较安全,具有开发成生物除草剂的巨大潜力。     

番茄叶霉病菌拮抗菌的筛选及其发酵条件

从蔬菜地田间土壤中筛选出对番茄叶霉病具拮抗作用的22株菌株,其中14株细菌,8株放线菌。孢子萌发抑制试验表明,细菌X14菌株和放线菌F15菌株的发酵液及其离心后上清液对番茄叶霉病菌孢子萌发抑制率均达100%。菌丝生长抑制试验表明,X14菌株对番茄叶霉病菌的平均抑菌直径为22.2mm,初步鉴定该菌株为芽孢杆菌。利用离体叶片法测定对番茄叶霉病致病性的影响,结果表明,X14菌株对番茄叶霉病的防治效果为79.8%~89.0%。对X14菌株发酵条件研究,最佳碳源为淀粉,最佳氮源为NH4NO3,最适pH为6.0。     

假单胞茵YT3和枯草芽孢杆菌DZl的发酵罐生长条件优化

假单胞菌（Pseudomonas sp．）YT3和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DZl是从植物根际土壤筛选出的具有应用潜力的植物根际促生细菌。研究发酵罐中接种量、转速、通气量等因素对YT3菌量以及对DZl芽孢率、菌量的影响。结果表明：不同的接种量、转速和通气量对Pseudomonas sp．YT3的活菌数、Bacillussubtilis DZl的活菌数及芽孢率均有显著影响。10％的接种量、2m3／ll的通气量对YT3和DZl菌株的作用效果与15％的接种量、3m3／h相当,但显著高于5％的接种量和1m3／h。当转速为200r／min时,YT3具有最高的活菌数,DZl具有最高的活菌数和芽孢率。综合分析认为,YT3和DZl发酵罐的最佳条件为接种量10％、转速200r／min和通气量2矗m。     

禾谷镰刀菌拮抗菌Bacillus amyloliquefaciens AX-3的分离鉴定及拮抗物质的鉴定

禾谷镰刀菌Fusarium graminearum可引起小麦赤霉病,该病严重威胁我国小麦的质量安全。本研究从生物防治的角度出发,分离筛选拮抗菌,研究拮抗菌的拮抗特性和拮抗能力。试验采用系列稀释法和平板对峙法从小麦样品中分离筛选获得禾谷镰刀菌拮抗菌AX-3,根据16S rDNA基因、gyrB基因序列构建的系统发育进化树以及生理生化特性结果,菌株AX-3被鉴定为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens。通过平板对峙法测定拮抗谱,结果显示AX-3对多种镰刀菌属病原真菌都具有良好的拮抗特性,抑菌圈半径为17~32 mm,表明AX-3具有广谱的拮抗性能。采用柱层析及制备液相色谱法对AX-3中的拮抗物质进行分离纯化,然后使用高分辨质谱及核磁共振的方法对拮抗物质进行结构鉴定表明,解淀粉芽胞杆菌AX-3产生的一种抗菌物质为macrolactin A。     

冻土荒漠区分离低温适生PGPR菌的鉴定及其抗菌促生特性

对分离自青海昆仑山口冻土荒漠区植被根围的7株可在4及10℃低温条件下正常生长的低温适生菌进行鉴定分析,并检测其拮抗病原菌活性及催芽促生特性。综合理化测定、BOX-PCR 及 ERIC-PCR 指纹图谱分析、16S rDNA及基因gyrB序列鉴定结果,其中6株菌株为简单芽孢杆菌Bacillus simplex,1株菌株为B. malacitensis。平板对峙试验表明,7株菌株对油菜菌核病原菌Sclerotinia sclerotiorum及水稻白叶枯病原菌 Xanthomonas oryzae pv. oryzae 具有显著拮抗效果。以菌株 KLD2（B. simplex）及 KLD5（B. malacitensis）发酵菌液处理玉米种子及拟南芥幼苗,结果表明菌株发酵液可明显促进种子萌发及幼苗生长,其鲜重、根长、须根数等表征均有显著增加。几株低温适生PGPR（plant growth promoting rhizobacteria）芽孢杆菌具备抗菌、催芽及促生特性,具有农业应用潜力。     

对大丽轮枝菌具有拮抗作用的萎缩芽胞杆菌的分离和鉴定

旨在从新疆棉花主产区的土壤中分离对重要植物病原菌大丽轮枝菌的拮抗菌,鉴定其种类,并探讨其应用前景。采用平板对峙培养法对抗性菌株、发酵滤液进行初步筛选,并对其发酵滤液热稳定性进行测试,采用16S rDNA和gyrB基因序列分析的方法确定该菌的分类地位。共分离出61株对大丽轮枝菌拮抗菌,其中59号菌株拮抗活性强,产色素,其发酵滤液经100 ℃加热5 min后,仍然具有抑菌活性,抑菌圈直径为15.8 mm,盆栽试验结果表明该菌对大丽轮枝菌具有良好的拮抗作用,并能促进棉苗生长。经过16S rDNA和gyrB基因相结合构建的系统发育树分析,结果显示59号等9株菌株为萎缩芽胞杆菌（Bacillus atrophaeus）。这是萎缩芽胞杆菌对大丽轮枝菌有拮抗作用的首次报道。     

拮抗菌防治草莓枯萎病

草莓枯萎病是危害草莓的主要病害之一,连茬种植地块发病最为严重。目前除采用溴甲烷熏蒸土壤可以实现连茬种植以外,尚无其他有效防治措施。溴甲烷为剧毒气体,不仅对人畜剧毒,对大气层具有破坏力,而且使用成本高。因此,采用安全有效措施防治草莓枯萎病显得十分迫切。本研究尝试采用拮抗菌防治草莓枯萎病,初步研究结果报道如下。１　材料与方法１．１　材料　供试菌采用本室从草莓植株和根围土壤分离、筛选得到的两株拮抗菌Ｂ５０１和Ｓ５０６。初步鉴定,Ｂ５０１是芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．）,Ｓ５０６是链霉菌（Ｓｔｒｅｐ…     

小麦赤霉病拮抗菌株筛选及其抑制作用研究

从高寒草甸野牦牛牛粪中分离得到细菌菌株27株。采用平板对峙法筛选小麦赤霉病高效拮抗菌株,研究其对病原菌禾谷镰刀菌(Fusarium gramminearum)的抑制作用。结果表明,筛选得到的8株小麦赤霉病拮抗中,以菌株LM3403拮抗能力最佳,抑菌带宽(13.2±0.8)mm。通过形态观察、生理生化特征分析、16S r DNA序列分析和gyr B基因序列分析,将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。研究发现,菌株LM3403可明显抑制禾谷镰刀菌菌丝体生长和分生孢子萌发,使病菌的菌丝体畸形、细胞膜损伤。该菌株还具有合成surfactin、iturin、fengycin 3种抗菌脂肽的能力。     

欧李内生促生菌分离、鉴定及促生、耐盐碱特性

为获得欧李(Cerasus humilis)根系优良内生促生菌,以欧李根系为研究材料,采用组织匀浆法分离纯化可培养内生细菌,测定其固氮、解磷、溶磷、合成植物生长素IAA(吲哚乙酸)和耐盐碱特性,并通过16S rRNA序列系统发育分析进行初步鉴定.结果显示:分离的7株菌均表现出一定的促生潜力,菌株固氮酶活性在50.64～...